Crescimento Microbiano 1.

Fatores necessrios para o crescimento

Fatores Qumicos (nutrientes, gua, O2 etc.) Fatores Fsicos ( temperatura, pH, presso osmtica) 2. Meio de Cultura Meio Complexo Meio Definido 3. Crescimento da cultura bacteriana Quantificao Direta (n. de colnias viveis ou no) Quantificao Indireta (turbidez, peso seco etc.)
Microrganismos so classificados de acordo(-10 aa temperatura ideal em: crescem em baixas temperaturas com 15 C)

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Psicrfilo s: crescem em temperaturas moderadas (10 a 50 C) Mesfilos:

Termfilos:

crescem em altas temperaturas (40 a 70 C)

Termfilos extremos Temperaturas (68 a 110 C)

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CRESCIMENTO MICROBIANO:
Em microbiologia, o termo crescimento refere-se a um aumento do nmero de clulas e no ao aumento das dimenses celulares. Crescimento Microbiano = associado ao crescimento de uma populao de clulas (uma clula dar origem a duas ao fim de um certo tempo, tempo de gerao ou de duplicao.) Temperatura de crescimento mnima: Temperatura onde a espcie capaz de crescer Temperatura de crescimento tima:a espcie apresenta melhor crescimento onde Temperatura de crescimento temperatura, onde ainda possvel o crescimento Bactria: Bacillus cereus Respirao: aerbico facultativo mxima: Incubao: 1-6 horas (casos de vomito) 6-24 (casos de diarria) Principais Alimentos Associados: arroz cozido Observaes: produz esporos e toxinas Bactria: Clostridium botulinum Respirao: anaerobico Incubao: 12-36 horas Principais Alimentos Associados: alimentos em conservas e embutidos de carne Observaes: produz esporos e toxinas termolbeis Bactria: Listeria monocytogenes Respirao: aerobica ncubao: 3 semanas Principais Alimentos Associados: derivados lacteos, frutos do mar e ostras Observaes: nao forma esporos mas resistente ao congelamento, secagem e calor

Bactria: Streptococcus spp (grupo A e D) Respirao: aerobico Incubao: grupo A 1-3 dias horas, grupo D 2-36 horas Principais Alimentos Associados: leite no pasteurizados e alimentos preparados por pessoas infectadas

4/11/12 Observaes: Grupo A causa faringite estreptococica, Grupo D causa a sindrome semelhante a Staphylococcus

Poucas bactrias so capazes de crescer em pH cido (como pH 4,0) 2. pH: Refere-se a acidez ou a alcalinidade de uma soluo

Bactrias acidfilas: alto grau de tolerncia acidez (Thiobacillus de 0,5 a 6,0 com timo entre 2 e 3,5) - Bactrias alcaliflicas: (Bacillus e Archaea) (pH 10 11). Fungos - tendem a ser mais acidfilos que as bactrias (pH <5). PRESSO OSMTICA: No halfilos no necessitam de sal e no toleram a presena no meio. Halotolerantes no necessitam de sal mas toleram a presena no meio. Halfilos- necessitam de sal em uma altas concentraes Halfilos extremo- necessitam de sal em concentrao moderada FATORES QUMICOS FONTES DE CARBONO, NITROGNIO, ENXOFRE E FSFORO: Essencial para a sntese de todos os compostos orgnicos necessrios para a viabilidade celular (elemento estrutural bsico para os seres vivos organismos quimio-heterotrficos: obtm C a partir de materiais orgnicos como protenas, carboidratos e lipdeos organismos quimioautotrficos organismos fotoautotrficos

Bactrias Fixadoras de Fixao de N: algumas bactrias so capazes de utilizar N Bactrias Fixadoras de Nitrognio
Nitrogniogasoso

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Microrganismos do solo (ex. bactrias dos gneros Rhizobium e Bradyrhizobium) utilizam este processo para obteno de N, tanto para elas como para as plantas que convivem simbioticamente (algumas leguminosas soja, feijo). Cultivo de leguminosas: > fertilidade do solo sem a necessidade de implementao de fertilizantes qumicos FATORES QUMICOS . FONTES DE CARBONO, NITROGNIO, ENXOFRE E FSFORO: utilizado na sntese de aminocidos contendo S e de vitaminas (tiamina e biotina)

essencial para a sntese dos cidos nuclicos e para os fosfolipdios componentes da membrana celular

Fontes naturais de S: on sulfato (SO4-2), Fontes naturais de P: on fosfato (PO4-3), DNA, RNA, ATP FATORES QUMICOS 2. GUA: Essencial para os microrganismos - Disponibilidade varivel no ambiente Ambiente com < concentrao de gua: Desenvolvem mecanismos para obter gua atravs do aumento da concentrao de solutos internos seja pelo bombeamento de ons para o interior celular ou pela sntese de solutos 4/11/12 orgnicos (acares, alcois ou aminocidos). sulfito de hidrognio, aminocidos

FATORES QUMICOS

3. OXIGNIO Extremamente importante no desenvolvimento microbiano Os organismos classificados em 1. AERBIOS

Estritos (obrigados): necessitam de O2 Facultativos: no necessitam de O2 mas crescem melhor com O2 Microaerfilo: necessitam de O2 mas em nveis menores 2. ANAERBIOS Aerotolerantes: no necessitam de O2 mas crescem melhor sem O2 Estritos (obrigados): no toleram O2 (letal)

MEIO DE CULTURA meio de material nutriente preparado no laboratrio para o crescimento de microrganismos. cultura: microrganismos que crescem e se multiplicam no meio de cultura. cultura:

complexo MEIO SELETIVO: favorece o crescimento de uma determinada bactria de interesse, impedindo o crescimento de outras bactrias. : 4/11/12

meio definido: meio

toda a composio qumica conhecida composio qumica no conhecida (composto por nutrientes como extrato de levedura, de carne ou de plantas)

ex: gar sabouraud dextrose, ph 5,6, utilizado no crescimento de fungos que so favorecidos, em relao as bactrias, pelo baixo ph.

MEIO DIFERENCIAL: facilita a identificao de um determinado organismo. ex: meio gar-sangue, utilizado para a identificao de bactrias capazes de destruir clulas sangneas (anel claro em torno da colnia). MEIO DE ENRIQUECIMENTO: favorece o desenvolvimento de uma populao bacteriana que esta em desvantagem entre outras populaes. MEIOS REDUTORES: meios com reagentes, como o tioglicolato de sdio, que capaz de se combinar com o oxignio dissolvido eliminando este elemento do meio de cultura (especfico para microrganismos anaerbicos). TEMPO DE GERAO o tempo necessrio para uma clula se dividir (e sua populao dobrar de tamanho tempo varia de acordo com o organismo; depende das condies ambientais (nutricionais, temperatura, etc); maioria das bactrias: 1 3 h FASE lag: Pouca ou ausncia de diviso celular (fase de adaptao) - 1 hora (estado de latncia, com intensa atividade metablica) FASE log: Incio do processo de diviso (perodo de crescimento ou aumento logaritmo). Reproduo celular extremamente ativa, sensveis as mudanas ambientais (* EFEITO DE ANTIBITICOS)

FASE ESTACIONRIA Velocidade de crescimento diminui o n de clulas vivas = n de clulas mortas FASE DE MORTE CELULAR =O n de clulas mortas excede o de clulas novas. MTODOS PARA QUANTIFICAR O CRESCIMENTO QUANTIFICAO DIRETA: CONTAGEM EM PLACAS,FILTRAO,MTODO DO NMERO MAIS PROVVEL,CONTAGEM DIRETA AO MICROSCPIO

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QUANTIFICAO INDIRETA: TURBIDIMETRIA,ATIVIDADE METABLICA,PESOSECO QUANTIFICAO DIRETA: CONTAGEM EM PLACAS= tcnica mais utilizada na determinao do tamanho da populao bacteriana; VANTAGEM: qualificao de clulas viveis DESVANTAGEM: tempo (24 h para o aparecimento das colnias) n de colnias na placa x ndice de diluio da amostra = n de bactrias/mL CLCULO: DILUIO SERIADA MTODO DE ESPALHAMENTO EM PLACA (2) FILTRAO n de bactrias = pode ser utilizado o mtodo de filtrao para a sua contagem. concentrao de bactrias sobre a superfcie de uma membrana de filtro de poros muito pequenos aps a passagem de um volume de 100 mL de gua. filtro posteriormente transferido para uma placa de Petri contendo meio slido. O MTODO DO NMERO MAIS PROVVEL (NMP) utilizado para microrganismos que no crescem bem em meio slido. A) diluio a partir de um alto volume de inculo (ex. 10 mL) B) diluio a partir de um mdio volume de inculo (ex. 1 mL) C) diluio a partir de um baixo volume de inculo (ex. 0,1 mL) D) contagem do n de tubos positivos E) estimativa do n de clulas/mL de bactrias

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(4) CONTAGEM DIRETA AO MICROSCPIO um volume conhecido de suspenso bacteriana colocado em uma rea definida da lmina de microscpio. a amostra pode ser corada ou analisada a fresco. utilizam cmaras de contagem DESVANTAGENS: no separa clulas mortas e vivas pode haver erros de contagem difcil contagem para bactrias mveis QUANTIFICAO Indireta: (1) TURBIDIMETRIA Monitoramento do crescimento bacteriano atravs da turbidez,espectrofotmetro (540 - 660 nm) (2) ATIVIDADE METABLICA Quantidade de um certo produto (como cido ou CO2) diretamente proporcional ao nmero de clulas bacterianas. (3) PESO SECO Principalmente para fungos filamentosos A) fungo removido do meio por filtrao B) seco em dessecador C) posterior pesagem

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