Microbiologa Industrial

Dr. Jorge Welti Chanes

1. De la Microbiologa Industrial a la Biotecnologa

Biologa celular Biologa molecular Ingeniera de procesos BIOTECNOLOGA Industria farmacutica Ambiente y energa Diagnsticos mdicos Industria qumica Bioqumica

Gentica molecular

Microbiologa

Industria alimentaria Y forrajera

Industria de la fermentacin

PRODUCTOS TIPICOS EN INGENIERIA BIOQUIMICA

cidos orgnicos Aminocidos

Alcoholes y solventes Antibiticos Esteroides Vitaminas Otros Protena unicelular

Ejemplos:
cidos orgnicos: actico, ctrico, fumrico, glucnico, itacnico, lctico.  Aminocidos: glutamato de sodio, Llisina, L-metionina, L-triptofano, Lvalina  Alcoholes y solventes: Acetona, butanol, 2,3 butanodiol, etanol, glicerol  Antibiticos: bacitracina, estreptomicina, neomicina, penicilina, tetraciclina


Ejemplos:
Esteroides: cortisona, hidrocortisona, prednisolona, testosterona, triamcinolona.  Protena unicelular: Algas, bacterias, levaduras, hongos  Vitaminas: cido ascrbico, cianocobalamina, F-caroteno, rivoflavina  Otros: alcaloides, enzimas, insecticidas biolgicos, metano, nucletidos, polisacridos


Principales productos de la biotecnologa comercializados:

 Bebidas  Quesos  Antibiticos  Alcohol

alcohlicas

de diagnstico  Jarabes de alto contenido en fructosa  Aminocidos  Levadura para panificacin  Esteroides
 Reactivos

Principales productos de la biotecnologa comercializados (cont.):

Vitaminas  cido ctrico  Enzimas  Vacunas  Albmina  Insulina  Urokinasa  Factor humano VIII  Hormona del crecimiento  Insecticidas microbianos


Fermentacin


Del latn fervere = ebullir Accin de las levaduras sobre extractos de frutas o granos Apariencia de ebullicin produccin de CO2

Fermentacin
 Significado

generacin de energa por el catabolismo de compuestos orgnicos

 Significado

para bioqumicos:

industriales:

para

microbilogos

Es mucho ms amplio. Cualquier proceso para la generacin de un producto mediante el cultivo msico de un microorganismo

1.1. Tipos de procesos biotecnolgicos

a) Aquellos que producen clulas microbianas (biomasa) como producto b) Aquellos que producen enzimas microbianas c) Aquellos que producen metabolitos microbianos d) Aquellos que modifican algn compuesto, el cual se ha adicionado a la fermentacin (proceso de transformacin)

Ejemplos de productos de diferentes categoras en la biotecnologa

(Cooney, 1983)

Masa celular

Levadura de Baker, protena celular

Componentes celulares Protenas intracelulares Productos biosintticos

Antibiticos, vitaminas, aminocidos, cidos orgnicos

Ejemplos de productos de diferentes categoras en la biotecnologa

(Cooney, 1983)

Productos catablicos Bioconversin Tratamiento de desechos

Etanol, metano, cido lctico Jarabe de maz rico en fructosa, cido 6-amino penicilnico Lodo activado, digestin anaerobia

a) Procesos para la produccin de biomasa

Proceso de fabricacin relacionado con el crecimiento  CONDICIONES PTIMAS


MAYOR CRECIMIENTO  De acuerdo al sustrato que utilizan se clasifican en: Sustratos naturales y Sustratos preparados a partir de productos qumicos puros

Sustratos naturales


Preparados a partir de productos o subproductos naturales, ejem: mostos Complejidad y poca versatilidad de los sustratos Requieren de investigacin ingenierl previa muy profunda, para determinar condiciones ptimas de proceso

Sustratos preparados a partir de productos qumicos puros



Fuentes de carbono fijas para la produccin de energa y protenas en forma econmica. Se usaron crudos de petrleo y productos derivados de ste (como metanol) Sustrato conocido y fcil de seguir en su reaccin

Produccin comercial de masa microbiana

1. Produccin de levaduras para la industria panificadora 1. Produccin de clulas microbianas (protena unicelular) utilizada como alimento humano o para animal

TIEMPOS TPICOS DE DUPLICACIN PARA MICROORGANISMOS, PLANTAS Y ANIMALES

Organismo Bacterias, hongos y levaduras Algas Pastizales Aves Cerdos Ganado Tiempo de duplicacin (h) 0.3 2 2 50 170 340 340 680 680 1,000 680 13,600

b) Enzimas microbianas
Se producen a partir de fuentes vegetales, animales y microbianas  Ventaja de enzimas microbianas: se producen en grandes cantidades mediante tcnicas de fermentacin perfectamente establecidas  Se utilizan principalmente en el rea de alimentos e industrias relacionadas


Enzimas de uso comn en la industria

ENZIMA E- Amilasa FUENTE
Aspergillus oryzal Bacillus amyloliquefaciens Bacillus licheniformis Aspergillus sp.

USOS
Hidrlisis de almidn (mieles, cervecera), Textiles y papel

Celulosas

Trichoderma rusei Penicilliun sp.

Procesamiento de frutas y hortalizas

F-Glucanasa

Bacillus subtilis Aspergillus niger

Hidrlisis (F-glucanos) en cervecera

Enzimas de uso comn en la industria (cont.)

ENZIMA
Glucoamilasa

FUENTE
Aspergillus niger Rhizopus sp.

USOS
Produccin de mieles de glucosa Isomerizacin de glucosa en mieles Hidrlisis de lactosa en leche y suero

Actinoplanes Glucosa Isomerasa missouriensis Strptomicetes sp.

Lactasa

Sacharomices sp.

Enzimas de uso comn en la industria (cont.)

ENZIMA Lipasa FUENTE
Aspergillus sp. Mucor sp. Rhizopus sp.

USOS
Modificacin de sabor en queso y mantequilla. Procesamiento de grasa y aceite

Pectinasa Proteasa

Aspergillus niger
Bacillus amiloliquenfaciens

Extraccin y clarificacin de jugos

Panadera y cervecera

c) Metabolitos microbianos


El crecimiento de un cultivo se divide en una serie de etapas: Periodo de adaptacin o fase lag Fase exponencial o logartmica Fase estacionaria Fase de muerte

Comportamiento de cultivo de acuerdo a los productos obtenidos en cada etapa: Fase logartmica (TROFOFASE): Los productos generados son esenciales para el crecimiento de las clulas (aminocidos, nucletidos, protenas, cidos nuclecos, lpidos, carbohidratos, etc.) PRODUCTOS PRIMARIOS del metabolismo Fase estacionaria (IDIOFASE): Compuestos que no tienen una funcin obvia en el metabolismo microbiano PRODUCTOS SECUNDARIOS

PRODUCTOS DEL METABOLISMO PRIMARIO

Metabolito Primario Etanol cido ctrico Acetona y butanol cido glutmico Importancia Comercial
Ingrediente activo en bebidas alcohlicas. Combustible en motores mezclado con petrleo Diversos usos en la industria de alimentos

Solventes Potenciador de sabor

PRODUCTOS DEL METABOLISMO PRIMARIO (cont.)

Metabolito Primario Lisina Nucletidos Polisacridos Vitaminas Importancia Comercial
Suplemento alimenticio Potenciador de sabor Diversas aplicaciones en la industria de alimentos, recuperacin de aceites Suplemento alimenticio

METABOLISMO SECUNDARIO


No todos los microorganismos lo presentan Comn entre bacterias filamentosas, hongos y bacterias esporulantes No se presenta en enterobacterias

Propiedades de productos secundarios:



Actividad antimicrobiana Inhibicin especfica de enzimas Promotores de crecimiento Propiedades farmacolgicas

Relacin entre metabolismo primario y secundario (Turner, 1971)



Las rutas del catabolismo primario se muestran en la siguiente figura en lneas obscuras Los productos secundarios identifican con letra itlica se

d) Procesos de transformacin


Se utilizan clulas microbianas para convertir un compuesto en otro estructuralmente relacionado pero de mayor valor

Las reacciones que pueden ser catalizacatalizadas para efectuar este proceso son:
        Deshidrogenacin Oxidacin Hidroxilacin Deshidratacin y condensacin Descarboxilacin Aminacin Desaminacin Isomerizacin

Ventajas de los procesos microbianos sobre los puramente qumicos:

 Son muy especficos  Operan a bajas temperaturas  No requieren de metales pesados como catalizadores

Ejemplos de procesos de transformacin:



Produccin de vinagre Produccin de esteroides Produccin de antibiticos Produccin de prostaglandinas

Problema de los procesos de transformacin:

Se tiene que producir una gran masa microbiana para catalizar la reaccin

ENZIMAS o CELULAS INMOVILIZADAS

1.2. Historia de la Microbiologa Industrial

Perodo de ignorancia (antes de 1800) Perodo de descubrimiento (1800 1900) Perodo de desarrollo industrial (posterior a 1900)

Perodo de ignorancia
almacenaban carne para mejorar su sabor, producan bebidas intoxicantes a partir de frutas y granos  Perodo a. C.: Diversas civilizaciones producan queso, yogurt y salsas de leguminosas  Ao 4000 a. C.: pan, vino y cerveza
Caverncolas:

Perodo de descubrimiento
Siglo XVIII: desarrollo del microscopio y descubrimiento de los microorganismos. THENARD sugiere que los microorganismos producen el alcohol del vino  Siglo XIX: Pasteur demostr que eran correctas las ideas de Thenard. Hansen aisl y propag cultivos de levadura (cervecera Carlsberg).


Se descubre que algunas enfermedades son causadas por microorganismos Emmerich y Low aislaron de bacterias la FIOCIANASA (primer antibitico) Primeros pasos para microorganismos. tratar aguas residuales con

Perodo de desarrollo industrial



1900 1950: desarrollo procesos fermentativos industriales: fermentaciones alcohlicas, produccin de cidos actico, lctico, ctrico y glucnico, acetona, butanol y glicerol. Procesos AEROBICOS y ANAEROBICOS. Durante la Segunda Guerra produccin de penicilina Mundial:

Durante la post-guerra: Se present un retroceso debido al crecimiento de la industria petroqumica

Perodo de desarrollo industrial

 Aos

60s: Avance importante debido a la investigacin para la produccin de masa microbiana como fuente de protena, por parte de compaas multinacionales fase de desarrollo: inicia con el

 ltima

desarrollo de las manipulaciones genticas de microorganismos IN VITRO, dando origen a la INGENIERIA GENETICA

Calendario de eventos (segn Houwink, 1984)



La era pre-Pasteur (antes de 1865):

Bebidas alcohlicas (cerveza, vino) Productos lcteos (queso, yogurt) Otros alimentos fermentados

La era Pasteur (1865-1940):

Etanol, butanol, acetona, glicerol cidos orgnicos (cido ctrico) Tratamiento aerobio de agua residuales

Calendario de eventos (segn Houwink, 1984)



La era de los antibiticos (1940-1960):

Penicilinas: tecnologa de la fermentacin sumergida Gran variedad de antibiticos Tecnologa de la estructura de la clula animal: vacunas contra virus Transformaciones microbiolgicas de esteroides

Calendario de eventos (segn Houwink, 1984)



La era de los post-antibiticos (1960-1975): Aminocidos Protena celular Enzimas (detergentes) Tecnologa de las clulas y las enzimas inmovilizadas (glucosa isomerasa) Tratamiento anaerobio de aguas de desecho Polisacridos bacterianos (goma de xantn)

Calendario de eventos (segn Houwink, 1984)



La era de la nueva biotecnologa (1975 -): Tecnologa de los hibridomas: anticuerpos monoclonales Pruebas diagnsticas con anticuerpos monoclonales (1980) Ingeniera gentica (1974) Vacunas de origen animal contra la diarrea (1982) Insulina humana (1982)

1.3. Elementos de un proceso biotecnolgico

Formulacin del medio de cultivo Esterilizacin del medio, bioreactores y equipo de apoyo iii. Produccin de un cultivo activo y puro iv. Crecimiento del microorganismos en el bioreactor bajo condiciones ptimas para la formacin del producto v. Extraccin y purificacin del producto vi. Manejo de los efluentes generados en el proceso i. ii.

DESARROLLO DE INCULO

Biomasa Cultivo
SEPARACION DE CELULAS

(fluido) Cultivo stock Biorreactor de siembra Biorreactor de produccin

Sobrenadante
EXTRACCIN DEL PRODUCTO

ESTERILIZACIN DEL MEDIO

PURIFICACIN FORMULACIN DEL MEDIO EMPAQUE Constituyentes del medio

TRATAMIENTO DE EFLUENTES