Instituto Nacional de Salud

Publica
Escuela de Salud Publica de México

I
N
ENZIMAS
S
P
Biol. Luz Edith Ochoa Sánchez
IB. Perla Tinoco Carrillo
QC. Miguel Ángel Ortiz Gil.

11 DE NOVIEMBRE 2008
Es todo proceso químico en el que una o
más sustancias (reactivos o reactantes)
sufren un proceso de transformación o
combinación para dar lugar a una serie de
sustancias (elementos o compuestos)
denominadas productos. A la
representación simbólica de las reacciones
se les denomina ecuaciones químicas.
Es la energía que necesita un
sistema antes de poder
iniciar un determinado
proceso o es la energía
mínima necesaria para que
se produzca una reacción
química dada. La energía de
activación es inversamente
proporcional a la velocidad
de reacción.
 Es una sustancia capaz de acelerar
(catalizador positivo) o retardar (catalizador
negativo o inhibidor) una reacción química,
permaneciendo éste mismo inalterado (no se
consume durante la reacción), proceso
denominado catálisis.
 Los catalizadores
disminuyen la Ea, que
deben superar los reactivos
para transformarse en
productos, sin modificar la
constante de equilibrio.
Sustancias de naturaleza proteica que catalizan
reacciones químicas, siempre que sea
termodinámicamente posible. En estas reacciones,
las enzimas actúan sobre unas moléculas
denominadas sustratos, las cuales se convierten en
diferentes moléculas, los productos.
A las reacciones mediadas por enzimas se les
denomina reacciones enzimáticas.
Las enzimas están constituidas por una proteína y un
componente llamado cofactor, el cual puede estar
ausente. En su estructura, se entrelazan y se pliegan
una o más cadenas polipeptídicas, que aportan un
pequeño grupo de aminoácidos para formar el sitio
activo, una enzima y un sustrato no llegan a adherirse
si sus formas no encajan con exactitud , su estructura
depende de los aminoácidos que la conforman.
Las enzimas se componen de una cadena lineal de
aminoácidos que se pliegan durante el proceso de
traducción (mRNA) para dar lugar a la estructura
terciaria de la enzima, el proceso se lleva a cabo en
los ribosomas.
El sitio activo está formado por las cadenas laterales
de residuos específicos y es al localización sobre la
superficie de la enzima donde se une el sustrato
estabilizada por medio de interacciones débiles y
tiene lugar la reacción química.

Sitio
activo
Las reacciones químicas que se llevan acabo dentro de
los organismos no ocurren espontáneamente, están
catalizadas por enzimas, por lo que sin las enzimas las
reacciones no se llevarían acabo.
1.-Óxido-reductasas (reacciones de óxido
reducción):

- Transferasas ( transferencia de grupos funcionales):

 3.- Hidrolasas (reacciones de
hidrólisis):

4.-Liasas (adición a los dobles enlaces):

 5.-Isomerasas (reacciones de
isomerización):

6.- Ligasas (formación de enlaces con aporte de ATP)

• La actividad de algunas
enzimas depende o El ion metálico puede
solamente de sus actuar como:
estructura como proteínas, o Centro catalítico primario
mientras que otros
necesitan, además uno o
o Grupo puente para reunir
mas componente no el sustrato y la enzima,
proteicos llamados formando un complejo de
cofactores. El cofactor coordinación
puede ser un ión metálico, o Agente estabilizante de
o bien una molécula la conformación de la
orgánica llamada proteína enzimática en
coenzima los iones
metálicos pueden ser: su forma catalíticamente
(Fe2+, Cu2+, K+, Mn2+, activa.
Mg2+, entre otros).
Cuando el coenzima se halla unido
íntimamente a la molécula del enzima
recibe, normalmente el nombre de
grupo prostético.
Un grupo prostético es el componente
no aminoacídico que forma parte de la
estructura de algunas proteínas y que
se halla fuertemente unido al resto de
la molécula. Las proteínas con grupo
prostético reciben el nombre de
heteroproteínas (o proteínas
conjugadas).
Grupo prostético Función Distribución
Bacterias, Archaea y
Flavín mononucleótido 1 Reacciones redox
eucariotas
Flavín adenín dinucleótido Bacterias, Archaea y
Reacciones redox
1
eucariotas
Pirroloquinolina quinona 2 Reacciones Redox Bacterias
Transaminación, descarboxilación y Bacterias, Archaea y
Fosfato de piridoxal 3
desaminación eucariotas
Bacterias, Archaea y
Biotina 4 Carboxilación
eucariotas
Bacterias, Archaea y
Metilcobalamina 5 Metilación e isomerización
eucariotas
Bacterias, Archaea y
Pirofosfato de tiamina 6 Descarboxilación
eucariotas
Bacterias, Archaea y
Hemo 7 Reacciones redox
eucariotas
Bacterias, Archaea y
Molibdopterina 8 9 Reacciones de oxigenación
eucariotas
Bacterias, Archaea y
Ácido lipoico 10 Reacciones redox
eucariotas
La representación
gráfica de la ecuación
de Michaelis-Menten
(v0 frente a [S]0) es
una hipérbola. La Vmax
corresponde al valor
máximo al que tiende
la curva experimental,
y la KM corresponde a
la concentración de
sustrato a la cual la
velocidad de la
reacción es la mitad de
la Vmax.
Si la velocidad inicial de la reacción
se mide a una determinada
concentración de sustrato
(representado como [S]), la
velocidad de la reacción
(representado como V) aumenta
linealmente con el aumento de la
[S].
Sin embargo, cuando aumentamos
la [S], la enzima se satura de
sustrato y alcanza su velocidad
máxima (Vmax), que no
sobrepasará en ningún caso,
independientemente de la [S].
La unidad de actividad enzimática (U) como
la cantidad de enzima que cataliza la
conversión de 1 µmol de sustrato en un
minuto. La actividad específica es el número
de unidades de enzima por miligramo de
proteína (U/mg prot) o por mililitro de
disolución (U/ml).
Recientemente, el Sistema Internacional de
unidades (SI) ha definido la unidad de
actividad enzimática como la cantidad de
enzima que transforma 1 mol de sustrato por
segundo. Esta unidad se llama katal (kat). 1
katal equivale a 60 x 106 U.
La constante de Michaelis, KM, mide la
concentración de sustrato a la que la
velocidad de reacción es Vmáx/2.Por lo
tanto: es una magnitud determinada
experimentalmente y definida
operativamente; es la concentración
del sustrato a la cual la velocidad de la
reacción es la mitad de la velocidad
máxima.
Cuando se grafica la velocidad de la reacción, v0, contra la
concentración de substrato, [S], no siempre es posible
determinar la condición en que se ha llegado a la velocidad
máxima, Vmax.
 El inverso de la velocidad (1/v0) contra el inverso de la concentración
de substrato (1/[S]), se obtiene una línea recta. El gráfico de
Lineweaver-Burke.
Se utiliza para calcular la Km y la Vmax así como para determinar el
mecanismo de acción de los diversos tipos de inhibidores.
Describe una recta en donde el intercepto con el eje de las abscisas
es igual a –1/Km y el intercepto con el eje de las ordenadas es igual a
1/Vmax. 1 Km 1
= +
v0 Vmax[ S ] Vmax
El sustrato y el inhibidor no se pueden unir a la misma enzima
al mismo tiempo.
El inhibidor tiene afinidad por el sitio activo de una enzima en
el que también se une el sustrato; el sustrato y el inhibidor
compiten para el acceso al sitio activo de la enzima.
Los inhibidores competitivos son a menudo similares en
estructura al sustrato verdadero.
 Inhibición competitiva - Representación recíproca doble

0.07
1/v
0.06

0.05

0.04
1/Vmax

0.03

-1/Km 0.02

0.01

1/s
0.00
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

-1/(Km(1 + i/Ki))
El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo
haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijación del substrato a la enzima, pero sí impide la acción
catalítica: Inhibición No Competitiva
 19.- ¿Qué es una enzima alostérica y cómo es su curva de Vmax vs [S]?

- Son proteínas con múltiples subunidades (múltiples centros activos y

catalíticos)
- Presentan una cinética sigmoidal, indicativa de efectos cooperativos en
la unión del sustrato.
- Su actividad está regulada por otras moléculas efectoras.
- Pueden mantener las concentraciones de sus sustratos en valores
bastante constantes:
* Existe una concentración crítica de sustrato ([S]c) por debajo
de la cuál la enzima es prácticamente inactiva
* Un pequeño aumento de la concentración de sustrato, por
encima de la ([S]c, da lugar a un notable aumento de la actividad
enzimática
La inhibición alostérica ejerce su acción sobre otra parte de la
molécula, causando un cambio conformacional con repercusión
negativa en la actividad enzimática.
La activación alosterica en los que el cambio en el sitio catalítico producido
por el activador alosterico es positivo, de modo que facilita la entrada del
sustrato y por tanto su conversión a los productos.
Las enzimas poseen una temperatura de actividad máxima, y
al sobrepasarla hay una pérdida de la estructura terciaria lo
que provoca la pérdida de su actividad catalítica de manera
irreversible debido a que las fuerzas de unión débiles se
rompen.
Aumentos en la temperatura aumenta las interacciones
cinéticas de las moléculas
 Las enzimas presentan su
máxima actividad a un
valor dado de pH
(normalmente entre 4 y 8).
Enzima pH óptimo Si se someten a un
cambio en el pH, los
Pepsina 1.5
diversos grupos
Vo Tripsina 7.7 funcionales de las
Catalasa 7.6 cadenas polipeptídicas
pueden ionizarse o
Arginasa 9.7
interactuar con otras
Fumarasa 7.8 cargas o grupos
1 3 7 11 14 Ribonucleasa 7.8 funcionales provocando un
pH cambio en su estructura
terciaria.

Vo Vo Vo

4 37 85 10 50 100 10 30 50 70 100
Temperatura oC) Coenzima Tiempo (min)
Las β-lactamasas son enzimas que
rompen el anillo β-lactámico que es
una estructura de cuatro átomos
presente en ciertos antibióticos que
actúan inhibiendo la síntesis de
peptidoglucanos de la pared celular
bacteriana debido a que dicho anillo
es análogo del aminoácido D-alanil-
D-alanina. Por tanto, al romperse el
anillo β-lactámico, la moléculas
pierde su actividad antimicrobiana.
β-lactamasas son responsables de
crear resistencia a los antibióticos.
 Modo de acción de las β-lactamasas

1 2 3
E+I EI EI* E’ + I*

1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el substrato o un

inhibidor competitivo convencional

2. La acción catalítica de la enzima convierte al inhibidor I

en una especie altamente reactiva I*

3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivándola

de forma definitiva al igual que un inhibidor irreversible.
•Algunas moléculas de RNA puden actuar como enzimas. A estas
moléculas se les denomina ribozimas.

•Al igual que las enzimas proteícas poseen un centro activo que
se une específicamente a un sustrato y que facilita su conversión
en un producto. Las ribozimas son menos versátiles que las
enzimas proteicas.
 24.- SOLUCIÓN DE PROBLEMA DE CINETICA
ENZIMATICA.
Las cinéticas de una enzima se midieron en función de la
concentración de sustrato tanto en ausencia como en
presencia de 2X10-3 M de inhibidor (I). Los valores
experimentales que se obtuvieron están dados en la
siguiente diapositiva.

a.- ¿Cuáles son los valores de Vmax y KM tanto en

ausencia como en presencia del inhibidor?

b.- ¿Qué tipo de inhibición es?

VMAX CON O SIN (µmoles/min)

KM SIN INIHIBIDOR 0.001M INHIBIDOR: 50

KM CON INHIBIDOR 0.002M

TIPO DE INHIBICIO: COMPETITIVA.

 Inhibición competitiva
PROBLEMA EQUIPO LUZ-PERLA-MIGUEL
Velocidad Inversos de la velocidad
Sustrato (µmoles/min) (min/µmoles)
Concentración Inverso Sin Con Sin inhibidor Con Inhibidor
(M) (1/M) inhibidor Inhibidor

0.3 X 10-5 10.4 8.2

0.5 X 10-5 14.5 12.12

1.0 X 10-5 22.5 19.05

3.0 X 10-5 33.8 32.26

9.0 X 10-5 40.5 40

 Velocidad Inversos de la
Sustrato (µmoles/min) velocidad
(min/µmoles)

Concen- Inverso (1/M) Sin inhibidor Con Sin inhibidor Con

tración Inhibidor Inhibidor
(M)

0.0003 3333.33
10.4 8.2 0.0962 0.1220

0.0005 2000.00
14.5 12.12 0.0690 0.0825

0.001 1000.00
22.5 19.05 0.0444 0.0525

0.003 333.33
33.8 32.26 0.0296 0.0310

0.009 111.11
40.5 40 0.0247 0.0250
CALCULOS EN FORMATOS EXCEL HACER CLICK AQUÍ.

KM
1/V Vmax

pendiente
de la recta

-1 / KM 1/S

1 ordenada
Las unidades de [S] es M. Vmax al origen
Las unidades de V son µmoles/min
http://es.wikipedia.org/wiki/Cin%C3%A9tica_enzim%C3%A1tica
http://es.wikipedia.org/wiki/Cin%C3%A9tica_de_Michaelis-Menten
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#kv
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#kv
http://docencia.izt.uam.mx/lebo/bioquimicaposg/contenido/cineticaenzimat
ica.ppt
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/cinetica%20enzimatica.ht
ml
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/propiedades%20enzimas1.
html
http://es.wikipedia.org/wiki/Digesti%C3%B3n_qu%C3%ADmica#Estructuras
_y_mecanismos
http://es.wikipedia.org/wiki/Catalizador_(qu%C3%ADmica)
http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_qu%C3%ADmica
http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm#clasificaci
onenzimas
http://es.wikipedia.org/wiki/Digesti%C3%B3n_qu%C3%ADmica#Estructuras
_y_mecanismos
http://es.wikipedia.org/wiki/Inhibidor_enzim%C3%A1tico
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/ecuacion%20de%20micha
elis4.html
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#kv
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