POLIMORFISMO DE LONGITUD DE FRAGMENTO DE RESTRICCIN (RFLP) Y POLIMORFISMO DE UN SOLO NUCLETIDO (SNP)

Un SNP es un polimorfismo de nucletido nico. El genoma humano en realidad tiene muy poca variacin entre los individuos. Se estima que por cada 1000 pares de bases del ADN, slo hay par 1base de ADN es diferente. Sin embargo, con 3,3 millones de pares base a considerar, todava hay una gran variacin de entender. Hay varios tipos de variacin gentica entre los humanosInserciones y deleciones de ADN repetitivo, incluyendo la expansin de repeticiones de trinucletidos y dinucletido (por ejemplo, X frgil, la enfermedad de Huntington) Pequeas duplicaciones y deleciones de los genes (por ejemplo, alfa amilasa, lactasa) Las mutaciones puntuales que dan lugar a sustituciones de un solo par de bases o supresiones (anemia de clulas falciformes la hemoglobina S, algunos tipos de fibrosis ) Cada uno de estos tipos de variacin requieren diferentes pruebas diagnstica. El primer diagnstico de SNP se RFLP Anlisis de polimorfismos de longitud de fragmentos de restriccin. Sin embargo, la reaccin en cadena de la polimerasa o PCR es un mtodo comn utilizado para la deteccin de SNP.

 Una diferencia hereditaria del modelo de digestin de enzima de restriccin se conoce como RFLP ,se refiere a las secuencias especificas de nucletidos en DNA Que luego son recortadas y cortadas por las enzimas de restriccin y que varan en algunos individuos.

 El ADN de un individuo se extrae y se purifica, el ADN purificado puede ser amplificado usando la tcnica molecular de PCR

CLONADO DE GENES
Aislamiento y amplificacin de un gen de inters para su posterior manipulacin gentica Pasos: 1.Aislamiento y fragmentacin de la fuente de ADN: ADNgenmico, ADN copia, producto de PCR. 2.Insercin en vector de clonado 3.Introduccin y amplificacin en organismo husped 4. Identificacin del gen de inters

Clonado en clulas animales

Se realiza sobre cultivos de clulas. La transformacin generalmente requiere la integracin del ADN en el cromosoma del husped. Mtodos de transformacin: -Electroporacin -Microinyeccin. Inyeccin de ADN en el ncleo de clulas con una aguja fina -Liposomas -Vectores virales (retrovirus, adenovirus). Se integran en el cromosoma del husped

Se introdujo el gen de la hormona de crecimiento humana en el genoma del ratn bajo el control de un promotor regulable. Cuando se alimentcon dieta + inductor los ratones transgnicoscrecieron a un tamaoinusual.

TERAPIA GNICA
Surge de la investigacin con animales transgnicos. Es una tcnica para reemplazar un gen deficiente por uno normal en individuos con enfermedades genticas

OBTENCION DE PROTENAS Obtencin de protenas de inters mdico, comercial, etc... (insulina, hormona del crecimiento, vacunas, factores de coagulacin antes se obtenan a partir de los tejidos que las producen o fluidos corporales)

DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES DE ORIGEN GENTICO

Mediante ingeniera gentica se construye una sonda de ADN, marcada (marcaje fluorescente), con la secuencia complementaria del ADN enfermo

ADN sano ADN enfermo Conocimiento previo de la secuencia de ADN enfermo

ADN complementario del ADN enfermo

DIAGNSTICO

Biochip Microarray DNAchip

Si aparecen bandas fluorescentes demuestra que la persona presenta la anomala Hibridacin? Renaturalizacin No hibridacin? del ADN con la sonda fluorescente Desnatura lizacin del ADN ADN de la persona que se quiere diagnosticar

APLICACIN DE LAS TCNICAS DEL ADN RECOMBINANTEEN LAS PLANTAS Hace posible alterar el perfil nutricional, rendimientos de la cosecha, resistencia a estreses ambientales Introduccin de genes en plantas mediante infeccin con Agrobacteriumtumefaciens A. tumefacienses una bacteria patgena de plantas dicotiledneas que transfiere ADN (ADN-T) a las plantas, causando la formacin de tumores.

CREACIN DE UN EMBRIN ARTIFICIAL (con clulas adultas) -embrin somtico-

OBJETIVO LTIMO: TRATAMIENTO de ENFERMEDADES

1 Cultivo de blastocisto

OBJETIVO LTIMO: AUTOTRASPLANTES (no hay rechazo)

Fecundacin

2 Eliminacin de la capa externa Embrin temprano

3 Adicin de sustancias que disgregan la masa celular interna

Fusin de clula somtica y ovulo enucleado

4 Transferencia de los agregados celulares a un nuevo pozo

6 Adicin de factores de diferenciacin seleccionados

En caso de existir deficiencias a nivel gentico se puede hacer terpia gnica a nivel de clulas madre
7 Administracin de clulas diferenciadas a tejidos daados

5 Formacin de clulas diferenciadas a tejidos daados

Las clulas madre abren la posibilidad a un nuevo mundo en las terapias de los trasplantes.

Calificada como una tcnica "ineficaz e imperfecta" por cientficos como Iam Wilmut, "padre" de la oveja Dolly, la clonacin ha encontrado en las clulas "madre" su primera razn de ser.
Retos tcnicos 1. Las clulas embrionarias de ratn originan teratomas y teratocarcinomas en animales adultos

2. Conocimiento de las seales implicadas en el desarrollo y diferenciacin

3. Asegurar la salud a largo plazo de las clulas a transplantar (edad biolgica de las clulas)

Frente a los mltiples beneficios de la tecnologa del DNA recombinante pueden surgir algunos problemas: Problemas sanitarios nuevos microorganismos patgenos, efectos secundarios de nuevos frmacos de diseo, etc... Problemas ecolgicos desaparicin de especies con consecuencias desconocidas, nuevas contaminaciones debidas a un metabolismo incontrolado, etc... Problemas sociales y polticos en el campo de la produccin industrial, agrcola y ganadera, pueden crear diferencias an ms grandes entre pases ricos y pobres. El sondeo gnico en personas puede llevar a consecuencias nefastas en la contratacin laboral, por ejemplo, y atenta contra la intimidad a que tiene derecho toda persona (empleo, agencias de seguros, discriminacin..). Problemas ticos y morales Poder conocer y modificar el patrimonio gentico humano puede ser una puerta abierta al eugenismo "Eugenesia: la ciencia del incremento de la felicidad humana a travs del perfeccionamiento de las caractersticas hereditarias".