ENZIMAS

ASPECTOS GENERALES

Prcticamente todas las reacciones qumicas que tienen lugar en los seres vivos estn catalizadas por enzimas. Los enzimas son catalizadores especficos: cada enzima cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre acta sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos.

ASPECTOS GENERALES

La sustancia sobre la que acta el enzima se llama sustrato. El sustrato se une a una regin concreta del enzima, llamada centro activo. El centro activo comprende (1) un sitio de unin formado por los aminocidos que estn en contacto directo con el sustrato y (2) un sitio cataltico, formado por los aminocidos directamente implicados en el mecanismo de la reaccin Una vez formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo ciclo de reaccin

1.- El enzima y su sustrato 2.- Unin al centro activo 3.- Formacin de productos

PROPIEDADES DE LOS ENZIMAS

Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser protenas y de actuar como catalizadores. As, cambios en la conformacin suelen ir asociados en cambios en la actividad cataltica. Los factores que influyen de manera ms directa sobre la actividad de un enzima son: pH temperatura cofactores

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Una molcula de enzima no tiene por qu actuar siempre a la misma velocidad. Su actividad puede estar modulada por: cambios en el pH cambios en la temperatura presencia de cofactores las concentraciones del sustrato y de los productos finales presencia de inhibidores modulacin alostrica modificacin covalente activacin por proteolisis isoenzimas

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMTICA

Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad cataltica. Este es el llamado pH ptimo.

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMTICA

La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente su actividad. Ej, la pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10. Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalizacin de la protena, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos para mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores fisiolgicos.

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMTICA

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMTICA

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMTICA

En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima. Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado por la prdida de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse.

EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMTICA

A veces, un enzima requiere para su funcin la presencia de sustancias no proteicas que colaboran en la catlisis: los cofactores. Los cofactores pueden ser iones inorgnicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Casi un tercio de los enzimas conocidos requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molcula orgnica se llama coenzima. Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos covalentemente al enzima se llaman grupos prostticos. La forma catalticamente activa del enzima, es decir, el enzima unida a su grupo prosttico, se llama holoenzima. La parte proteica de un holoenzima (inactiva) se llama apoenzima, de forma que:

EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La velocidad de una reaccin enzimtica depende de la concentracin de sustrato. La Figura 1 muestra la velocidad de una reaccin enzimtica a 6 concentraciones distintas de sustrato.
Adems, la presencia de los productos finales puede hacer que la reaccin sea ms lenta, o incluso invertir su sentido (Figura 2 ).

EFECTO DE LOS INHIBIDORES SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMTICA

Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un enzima: son los inhibidores. Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alteran la conformacin espacial del enzima, impidiendo su unin al sustrato (inhibidor no competitivo) .Inhibidor competitivoInhibidor no competitivo

MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA

Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio R <==> T Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores positivos. El propio sustrato es a menudo un modulador positivo. Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre una regin del enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos

EFECTO DE LA MODIFICACIN COVALENTE

SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Otros enzimas pasan de una forma menos activa a otra ms activa unindose covalentemente a un grupo qumico de pequeo tamao como el Pi o el AMP. Tambin se da el caso inverso, en el que un enzima muy activo se desactiva al liberar algn grupo qumico. En las enzimas de las vas degradativas del metabolismo, la forma fosforilada es ms activa que la no fosforilada, mientras que en las vas biosintticas ocurre lo contrario.

ACTIVACIN PROTEOLTICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Algunos enzimas no se sintetizan como tales, sino como protenas precursoras sin actividad enzimtica. Estas protenas se llaman proenzimas o zimgenos. Para activarse, los zimgenos sufren un ataque hidroltico que origina la liberacin de uno o varios pptidos. El resto de la molcula proteica adopta la conformacin y las propiedades del enzima activo. Muchos enzimas digestivos se secretan en forma de zimgenos y en el tubo digestivo se convierten en la forma activa. Es el caso de la a-quimotripsina, que se sintetiza en forma de quimotripsingeno . Si estos enzimas se sintetizasen directamente en forma activa destruiran la propia clula que las produce. As, la tripsina pancretica (una proteasa) se sintetiza como tripsingeno (inactivo). Si por alguna razn se activa en el propio pncreas, la glndula sufre un proceso de autodestruccin (pancreatitis aguda), a menudo mortal.

CINTICA ENZIMTICA

Los principios generales de las reacciones qumicas se aplican tambin a las reacciones enzimticas. Por este motivo, antes de empezar con la cintica qumica, se van a repasar algunos conceptos bsicos de cintica qumica. A continuacin, se describirn los siguientes conceptos: Cintica enzimtica Modelo cintico de Michaelis-Menten Clculo de la KM y la Vmax de un enzima Actividad enzimtica

CLASIFICACIN DE LOSENZIMAS

En funcin de su accin cataltica especfica, los enzimas se clasifican en 6 grandes grupos o clases: Clase 1: OXIDORREDUCTASAS Clase 2: TRANSFERASAS Clase 3: HIDROLASAS Clase 4: LIASAS Clase 5: ISOMERASAS Clase 6: LIGASAS

Clase 1: OXIDORREDUCTASAS

Catalizan reacciones de oxidorreduccin, es decir, transferencia de hidrgeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, segn la reaccin general: AH2 + B A + BH2

Clase 2: TRANSFERASAS

Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del hidrgeno) de un sustrato a otro, segn la reaccin: A-B + C A + C-B

Clase 3: HIDROLASAS

Catalizan las reacciones de hidrlisis: A B + H2O AH + B-OH

Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reaccin: Lactosa + agua glucosa + galactosa

Clase 4: LIASAS

Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos: A-B A+B Un ejemplo es la acetacetato descarboxilasa, que cataliza la reaccin: cido acetactico CO2 + acetona

Clase 5: ISOMERASA
Catalizan la interconversin de ismeros: A B Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa isomerasa fosfotriosa isomeras gliceraldehdo-3-fosfato dihidroxiacetonafosfato fosfoglucosa isomerasa glucosa-6-fosfato fructosa-6-fosfato

Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis simultnea de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.): A + B + XTP A-B + XDP + Pi Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que cataliza la reaccin: piruvato + CO2 + ATP oxaloacetato + ADP + Pi

NOMENCLATURA DE LOS ENZIMAS

Hay varias formas mediante las cuales se asigna un nombre a un enzima: nombres particulares nombre sistemtico cdigo de la comisin enzimtica (enzyme comission)

NOMBRES PARTICULARES

Antiguamente, los enzimas reciban nombres particulares, asignados por su descubridor. Al ir aumentando el nmero de enzimas conocidos, se hizo necesaria una nomenclatura sistemtica que informara sobre la accin especfica de cada enzima y los sustratos sobre los que actuaba.

NOMENCLATURA DE LA COMISIN ENZIMTICA

El nombre de cada enzima puede ser identificado por un cdigo numrico, encabezado por las letras EC (enzyme commission), seguidas de cuatro nmeros separados por puntos. El primer nmero indica a cual de las seis clases pertenece el enzima, El segundo se refiere a distintas subclases dentro de cada grupo,

NOMENCLATURA DE LA COMISIN ENZIMTICA

El tercero y el cuarto se refieren a los grupos qumicos especficos que intervienen en la reaccin. As, la ATP:glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa) se define como EC 2.7.1.2. El nmero 2 indica que es una transferasa, el 7 que es una fosfotransferasa, el 1 indica que el aceptor es un grupo OH, y el ltimo 2 indica que es un OH de la D-glucosa el que acepta el grupo fosfato.

NOMBRE SISTEMTICO

El nombre sistemtico de un enzima consta actualmente de 3 partes: el sustrato preferente el tipo de reaccin realizado terminacin "asa Un ejemplo sera la glucosa fosfato isomerasa que cataliza la isomerizacin de la glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato.

NOMBRE SISTEMTICO

Muchos enzimas catalizan reacciones reversibles. No hay una manera nica para fijar cual de los dos sentidos se utiliza para nombrar al enzima. As, la glucosa fosfato isomerasa tambin podra llamarse fructosa fosfato isomerasa.

CINTICA ENZIMTICA

Los principios generales de las reacciones qumicas se aplican tambin a las reacciones enzimticas. Por este motivo, antes de empezar con la cintica qumica, se van a repasar algunos conceptos bsicos de cintica qumica. A continuacin, se describirn los siguientes conceptos: Cintica enzimtica Modelo cintico de Michaelis-Menten Clculo de la KM y la Vmax de un enzima Actividad enzimtica

MODO DE ACCIN DE LOS ENZIMAS

El comienzo de la reaccin requiere un aporte inicial de energa. Esta energa inicial que hay que suministrar a los reactantes para que la reaccin transcurra se llama energa de activacin (Ea). Cuanto menor es la Ea ms fcilmente transcurre la reaccin.

MODO DE ACCIN DE LOS ENZIMAS

Reaccin con catalizador y sin catalizador

CINTICA ENZIMTICA

Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y de la especifidad del enzima. La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar el enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos.

CINTICA ENZIMTICA

CINTICA ENZIMTICA

Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de desaparicin del sustrato) en funcin del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reaccin, o simplemente, la cintica de la reaccin. A medida que la reaccin transcurre, la velocidad de acumulacin del producto va disminuyendo porque se va consumiendo el sustrato de la reaccin. Para evitar esta complicacin se procede a medir la velocidad inicial de la reaccin (v0).

MODELO CINTICO DE MICHAELISMENTEN

Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin inical del sustrato sobre la actividad enzimtica comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo enzimasustrato como intermediario del proceso de catlisis enzimtica. En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten desarrollaron esta teora y propusieron una ecuacin de velocidad que explica el comportamiento cintico de los enzimas.

MODELO CINTICO DE MICHAELISMENTEN

Energa y Metabolismo

Energa
Es la capacidad de realizar un trabajo. A pesar que existen varias formas de energa: qumica, luminosa, mecnica, etc. , solo hay dos tipos bsicos: Potencial: es la capacidad de realizar trabajo como resultado de su estado o posicin. Puede estar en los enlace qumicos, en un gradiente de concentracin, en un potencial elctrico, etc. Cintica: es la energa del movimiento, puede existir en forma de calor, luz, etc.

Energa y Metabolismo

Energa
En trminos bioqumicos, representa la capacidad de cambio, ya que la vida depende de de que la energa pueda ser transformada de una forma a otra, cuyo estudio es la base de la termodinmica. Sus leyes son aplicables a los sistemas cerrados o aislados, es decir aquellos que no intercambian energa con el medio que los rodea; las clulas son sistemas abiertos, o sea pequeas partes de un sistema cerrado mayor. Las leyes de la termodinmica expresan: 1 Ley: en un sistema aislado la energa no se crea ni se destruye, puede ser transformada de una forma en otra. 2 Ley: no toda la energa puede ser usada y el desorden tiende a aumentar, lo que se conoce como entropa.

Energa y Metabolismo

Metabolismo Cada clula desarrolla miles de reacciones qumicas que pueden ser exergnicas (con liberacin de energa) o endergnicas (con consumo de energa), que en su conjunto constituyen el METABOLISMO CELULAR. Si las reacciones qumicas dentro de una clula estn regidas por las mismas leyes termodinmicas ... entonces cmo se desarrollan las vas metablicas?

Energa y Metabolismo

Metabolismo
1. Las clulas asocian las reacciones: las reacciones endergnicas se llevan a cabo con la energa liberada por las reacciones exergnicas. 2. Las clulas sintetizan molculas portadoras de energa que son capaces de capturar la energa de las reacciones exergnicas y las llevan a las reacciones endergnicas. 3. Las clulas regulan las reacciones qumicas por medio de catalizadores biolgicos: ENZIMAS.

ATP: Reacciones acopladas y transferencia de energa

Las clulas acostumbran a guardar la energa necesaria para sus reacciones en ciertas molculas, la principal es el: ATP, trifosfato de adenosina. Las clulas lo usan para capturar, transferir y almacenar energa libre necesaria para realizar el trabajo qumico. Funciona como una MONEDA ENERGTICA. La funcin del ATP es suministrar energa hidrolizndose a ADP y Pi. Esta energa puede usarse para: obtener energa qumica: por ejemplo para la sntesis de macromolculas; transporte a travs de las membranas trabajo mecnico: por ejemplo la contraccin muscular, movimiento de cilios y flagelos, movimiento de los cromosomas, etc.

Estructura del ATP: es un nucletido compuesto por la adenina (base nitrogenada), un azcar (ribosa) y tres grupos fosfato.

Las clulas requieren energa para mltiples trabajos:

Sintetizar y degradar compuestos Transporte a travs de las membranas (activo, contra el gradiente de concentracin). Endocitocis y exocitosis. Movimientos celulares. Divisin celular Transporte de seales entre el exterior e interior celular Esta energa se encuentra en las molculas de ATP, en las uniones qumicas de alta energa de los fosfatos. Las molculas de ATP se ensamblan en las mitocondrias a partir del ADP y los Pi con la energa tomada de la ruptura de molculas complejas como la glucosa, que a su vez deriva de los alimentos ingeridos.

Las clulas requieren energa para mltiples trabajos:

La Glucosa (C6 H12 O6) es el combustible bsico para la obtencin de energa, muchos otros compuestos sirven como alimento, pero casi todos son transformados a glucosa mediante una serie de numerossimas oxidaciones graduales, reguladas enzimticamente, al cabo de las cuales el oxgeno atmosfrico (ingresado por respiracin pulmonar) se une a los tomos de hidrgeno de las citadas molculas para formar H2O. En cada oxidacin se liberan gradualmente pequeas porciones de energa que son capturadas para formar el ATP.

En el proceso de obtener energa a partir de la glucosa hay tres procesos metablicos:

GLUCLISIS: ocurre en el citosol, donde cada molcula de glucosa, con sus 6 tomos de Carbono, da lugar a dos molculas de piruvato (de 3 tomos de Carbono). Se invierten dos ATP pero se generan cuatro. RESPIRACIN CELULAR: ocurre cuando el ambiente es aerobio (contiene O2) y el piruvato se transforma en dixido de Carbono (CO2) liberando la energa almacenada en los enlaces piruvato y atrapndola en el ATP. FERMENTACIN: cuando el O2 est ausente, ambiente anaerobio, en lugar de producir CO2 se producen otras molculas como el c. lctico o el etanol.