Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Los antibiogramas o antibioticograma, son mtodos de laboratorio que estudian la sensibilidad de un microorganismo a la accin de los ANTIBIOTICOS. El trmino sensible es muy usado como sinnimo de susceptible. Susceptible significa que un microorganismo es inhibido o muerto en las pruebas in vitro por una concentracin del antibitico accesible en la sangre, cuando ese mismo antibitico se utiliza in vivo.
COORDINACION PRACTICA 2006-2007 2
Un "ANTIBIOGRAMA" consiste en poner en contacto al germen que hemos cultivado con distintos antibiticos para ver cual de ellos es el que mejor va como tratamiento.
OBJETIVOS:
-Medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha que es la responsable de una infeccin.
TIPOS DE ANTIBIOGRAMA?
Segn las necesidades respiratorias de los microorganismos se pueden realizar dos tipos de estudios, como son: el antibiograma para grmenes aerbicos y el antibiograma para grmenes anaerobios. El antibiograma para grmenes aerbicos son los nicos que se realizan en forma sistemtica en muchos laboratorios. El antibiograma es una prueba que se utiliza para medir la susceptibilidad de los microorganismos en presencia de sustancias antibiticas. Esta capacidad puede ser estimada ya sea, por el mtodo de dilucin o de difusin.
Debe ser de amplio espectro nutritivo, para que permita el crecimiento de la mayora de microorganismos. Debe tener un pH estable (7,2 - 7,4) y no sufrir oscilaciones por accin de los microorganismos sobre los componentes del medio; la acidez favorece la actividad de betalactmicos, tetraciclina, y novobiocina; y la alcalinidad la de los aminoglucsidos y macrlidos.
La Dilucin en agar es considerado el mtodo de referencia. en este mtodo, las placas contienen, una determinada concentracin de un antibitico y son inoculadas con el microorganismo en estudio y luego incubadas por 16 a 18 horas. Despus de la incubacin, se examina si el organismo crece o no en cada una de las placas, con lo cual se determina la concentracin inhibitoria mnima (CIM) para el antibitico. MIC (Concentracin Mnima Inhibitoria).- Es la concentracin ms baja que inhibe el desarrollo de las bacterias despus de la incubacin nocturna. El valor MIC es entonces comparado con las concentraciones conocidas de la droga obtenidas del suero del paciente o de los fluidos orgnicos del mismo, para en esta forma sentar la respuesta clnica probable.
COORDINACION PRACTICA 2006-2007 9
10
En los mtodos de dilucin en caldo, base de casi todos los mtodos utilizados en la actualidad, se colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano, generalmente diluciones 1:2, en tubos con un caldo de cultivo que sostendr el desarrollo del microorganismo. El caldo ms comnmente usado para estas pruebas es el de Mueller-Hinton suplementado con los cationes magnesio y calcio.
COORDINACION PRACTICA 2006-2007 11
Sobre el agar uniformemente sembrado con el organismo de ensayo, se colocan discos de papel filtro impregnado de antibitico.
Por difusin se forma un gradiente de concentracin del antibitico desde el disco hacia la periferia y el desarrollo de microorganismos es inhibido a cierta distancia del disco cuyo dimetro est relacionado, entre otros factores, a la mayor susceptibilidad del microorganismo
12
13
Es el mtodo de difusin en discos, y se lo ha catalogado como un mtodo de referencia en la susceptibilidad antimicrobiana y podr ser utilizado como una tcnica rutinaria en el laboratorio. Este mtodo es apropiado particularmente en pruebas con bacterias de la familia Enterobacteriaceae, pero puede ser tambin recomendado como un mtodo general para todos los patgenos de crecimiento fcil y rpido, exceptuando los anaerobios estrictos.
14
Interpretacin: En ste mtodo la interpretacin de los resultados est basado sobre la relacin entre la concentracin inhibitoria mnima (MCI) y el dimetro de la zona de inhibicin
El sistema ms simple comprende solamente dos categoras susceptibles y resistentes, sta clasificacin aunque ofrece muchas ventajas para los propsitos estadsticos epidemiolgicos es demasiado inflexible para la utilizacin del clnico. En el mtodo de Kirby Bauer modificado se reconocen tres categoras de susceptibilidad que son sensible, resistente e intermedio
15
Cuando se prepara l inoculo a partir de un cultivo primario, se tocan con el asa de inoculacin 4 o 5 colonias bien aisladas y de apariencia morfolgica idntica. Este crecimiento se transfiere a un tubo con caldo nutritivo o caldo de Muller Hinton. Se incuba de 2 a 5 horas en general a una temperatura de 35C, luego se hace una comparacin del caldo cultivado con el nefelmetro, se ajusta la turbidez del caldo diluyndolo con caldo estril o solucin salina estril, este ajuste es necesario para asegurar el desarrollo resultante sea confluente.
16
-Las
cajas son inoculadas mojando la torunda estril en l inoculo (sta torunda debe ser de madera), desechar el exceso de caldo por presin y rotacin de la torunda contra las paredes del tubo. - Extender entonces l inoculo sobre el agar, debe pasar la torunda 2 a 3 veces sobre la superficie del medio, girando cada vez la caja 60 grados, para asegurar una siembra uniforme.
COORDINACION PRACTICA 2006-2007 17
-Dejar secar la caja sin sobrepasar los 15 minutos antes de aplicar los discos. -La caja debe ser colocada en el incubador a 35C, dentro de los 30 minutos posteriores a su preparacin.
-Despus de la incubacin se mide el dimetro de cada zona de inhibicin, anotndolo en mm.
18
Existen diversos factores tcnicos que influirn en el tamao de la zona de inhibicin, entre los cuales tenemos: Densidad del inculo. Potencia de los discos de antibiticos Temperatura de incubacin
Tamao de las cajas, fondo del agar y espacio entre discos
19
Zona De Inhibicin.- Se considera as al crculo alrededor del disco en el que hay ausencia total de crecimiento bacteriano. Lectura.- Hay algunas formas de interpretar las zonas de inhibicin, las ms comunes son: Usando una regla; en ste caso la zona de inhibicin son medidas en mm, y los dimetros son interpretados de acuerdo al antibitico y su concentracin en mg. La tendencia actual; es la de que los tcnicos hagan interpretaciones binarias es decir, sensible o resistente, quedando incluida la respuesta intermedia en la resistente.
COORDINACION PRACTICA 2006-2007 20
Sensible.- Un microorganismo es llamado sensible a un antimicrobiano cuando la infeccin causada por l es probable que responda favorablemente al tratamiento con ste agente a las dosis usuales recomendadas. Intermedia.- Cuando la infeccin es probable que responda favorablemente el tratamiento a dosis inusualmente altas del antimicrobiano. Resistente.- Es trmino que implica la expectativa de que el microorganismo no responda a una droga dada, independientemente de la dosis y localizacin de la infeccin. La ltima decisin para usar un antibitico en particular y la dosis a ser administrada dependern no solamente del resultado de la prueba de susceptibilidad, sino tambin de su interpretacin.
21
Intermedia:
Intermedia:
RESISTENTE
Resistente:
Sensible:
22
23
MTODO DE E-TEST
Es uno de los mtodos ms recientes que se han presentado en el mercado y resulta de una curiosa combinacin de caractersticas de los mtodos anteriores.
Se trata de una tcnica cuantitativa en placa que permite obtener una lectura directa de CMI en g/ml, ya que se emplean tiras plsticas impregnadas en concentraciones crecientes de antibitico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.
El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira del antibitico (o antibiticos) a ensayar
Tras la incubacin de 16-24 horas a 35C se observan las placas y se valora la zona de inhibicin, de forma elptica, alrededor de cada tira.
24
MTODO DE E-TEST
COORDINACION PRACTICA 2006-2007
25
MTODOS AUTOMATIZADOS
Estos novedosos mtodos utilizan sistemas de micro dilucin en medio lquido sobre microplacas con pocillos en "U. Interpretan el crecimiento bacteriano en los diferentes pocillos por medio de un autoanalizador.
26