Farmacocintica In vivo del cido Acetilsaliclico en ratas Wistar

Resumen
Se determinara el perfil farmacocinetico de cido acetilsaliclico (AAS) in-vivo en ratas Wistar (200-250 g) a las cuales se les administrara una dosis de 100mg/Kg de peso por va oral. Se empleara el mtodo de Trinder para cuantificar las concentraciones plasmticas del

frmaco y se elaborar una curva concentracin

plasmtica vs tiempo a partir de la cual se obtendrn los parmetros farmacocinticos.

Farmacocintica
La farmacocintica explica la permanencia del frmaco en el organismo, cuantificando todos los procesos que se producen. Comprende los procesos LADBE:
Liberacin Absorcin Distribucin Biotransformacin Eliminacin
Rabasco, 1997

Esquema de la relacin entre los procesos farmacocinticos

Esquema

de

la

relacin

entre

absorcin,

distribucin,

unin,

biotransformacin y eliminacin de un frmaco, y su concentracin en el sitio

Goodman & Gilman, 1996

Modelo monocompartamental
Considera al organismo como una unidad homognea.

Consideraciones:
Absorcin constante. El volumen aparente de distribucin es constante. El frmaco se distribuye a todos los tejidos y permanece en equilibrio. El frmaco se elimina en forma constante

Fig1. Modelo monocompartimental.

Florez, 1987

Modelo bicompartamental
En este modelo el frmaco se distribuye en dos compartimentos Compartimento central: Compuesto por sangre y rganos muy irrigados: rin, hgado, pulmones. La distribucin del medicamento en este compartimento es inmediata. Compartimento perifrico: Compuesto por msculo, tejido adiposo, hueso. El acceso del frmaco a este compartimento es lento.

Florez, 1987

cido Acetilsaliclico

pKa: 3,5 (25C) log P (octanol/ buffer pH 7.4) = 1.1 Peso Molecular: 180.2 g/mol Punto de fusin: 135C

Cristales transparentes o blancos, es estable al aire pero gradualmente se hidroliza Poco soluble en agua (1:300), etanol (1:5), cloroformo (1:17), ter (1:15) . Soluble en soluciones de acetatos y citratos.
Moffat, Osselton, Widdop; 2004

cido Acetilsaliclico
Absorcin rpida y completa por TGI. Se hidroliza por efecto del primer paso a cido saliclico. El AAS se une en 80 a 90% a las protenas plasmticas y se distribuye ampliamente (Vol. Distribucin 170mL/kg de peso). Se metaboliza a cido saliclico (hgado, durante y despus de absorcin) y a otros metabolitos como cido salicilrico, glucornido salicilfenlico, glucronido acilsalcilico, entre otros. Eliminacin principalmente por va renal.
Martindale, 2003

cido Acetilsaliclico
Vida media AAS : 15-20 minutos Vida media AS: 2-4 horas

Volumen Distribucin AS: 0.1-0.2 L/kg

Hamilton y Moore, 1998 Moffat, Osselton, Widdop; 2004

Modelo In vivo
Se refiere a experimentos farmacolgicos con un animal integro, vivo, consiente o inconsciente para registrar los cambios que ocurren en el animal como un todo por el flujo del frmaco. Ventajas In vivo
Efectividad teraputica del frmaco Identificacin de reacciones adversas Determinacin de la dosis letal

In vitro
Posibilita cuantificacin precisa de la respuesta o efecto del frmaco Conocimiento exacto de la concentracin del frmaco Menor costo

Tcnica de Trinder
Es una solucin que contiene acido e iones mercricos que precipitan las protenas.
Se basa en la reaccin de iones frricos con los salicilatos formando un complejo color violeta. Determina cuantitativamente salicilatos en muestras biolgicas.
O O H
Fe(NO3)3

O Fe O

Moffat, Osselton, Widdop; 2004

Justificacin
Desde el punto por de vista en el teraputico laboratorio un de

medicamento debe asegurar eficacia y evitar

toxicidad ello, biofarmacia se determinaran los diferentes parmetros farmacocinticos para evaluar el comportamiento del cido acetilsalcilico

utilizando un modelo in vivo.

Objetivo
Obtener el perfil farmacocintico de una administracion oral de cido acetilsaliclico en ratas mediante la cuantificacin de salicilatos en sangre por el mtodo de Trinder.

Hiptesis
Los principales metabolitos del AAS posterior a su administracin oral son los salicilatos los cuales se pueden cuantificar utilizando el mtodo de Trinder para obtener curvas de concentracin plasmtica contra tiempo que permitan evaluar los parmetros farmacocinticos.

Material y mtodo
POBLACIN OBJETIVO: Farmacocintica de salicilatos en ratas Wistar.
CRITERIOS DE INCLUSIN: Ratas Wistar con un peso de 200 a 250 g, sin tratamiento previo, del mismo sexo y con ayuno durante 12 h. CRITERIOS DE EXCLUSIN: Ratas Wistar con alguna lesin superficial. CRITERIOS DE ELIMINACIN: Ratas Wistar sin condicin de ayuno.

Material y mtodo
Material e instrumentos:
Cnula peditrica. Jeringas de insulina. Jaula de restriccin. Pipetas de 1 y 5 mL Micropipetas Vaso de precipitado de 250mL. Matraz volumtrico de 100mL. Tubos de ensaye Estuche de diseccin Frasco de vidrio boca ancha Algodn Tubos de ensayo Sonda nasogstrica Franela Micropore Tabla de diseccin

Equipo: Balanza analtica Balanza granataria Centrifuga Espectrofotmetro

Material biolgico 6 Ratas wistar

Preparacin de reactivos
Reactivo de Trinder

Disolver 10g de HgCl2 en 210 ml de agua dest., agregar

30 mL. de HCl 1N, incorporar 10g de nitrato frrico y llevar a 250 mL.

Solucin de heparina

Tomar 2mL de una solucin de heparina sdica de 1000

UI/mL. Transferir a un matraz vol. de 100mL y aforar con solucin salina esteril.

Preparacin de reactivos
Solucin stock

50 mg de salicilato de sodio en 10 mL de agua.

Suspensin de AAS Pesar el equivalente a 2.5g de AAS y transferirlos a un matraz volumtrico de 50ml.

Adicionar la menor cantidad de ETOH 96% para

solubilizarlo y aforar con CMC al 0.5% y homogeneizar.

Metodologa
Preparacin de la curva estndar.
Pesar 50mg cido saliclico, se transfieren a un matraz volumtrico de 10mL y aforar con agua 5000g/mL. Preparar soluciones de 20 a 120 (g/mL ).

Adicionar 100 L de la solucin de cloruro frrico y completar a un volumen de 1.5mL. Homogeneizar y leer en el espectrofotmetro a 540nm.

Tomar 100 L de cada una de las soluciones anteriores y colocarlas en tubos de ensaye.

 Preparacin de la curva estndar con plasma

De las soluciones anteriores, tomar 50 L y pasarlos a tubos de ensaye.

Adicionar 50 L de plasma, agitar por 10 manualmente, aadir 400 L de agua destilada, agregar 50 L de solucin Trinder.

Leer en el espectrofotmetro a 540 nm.

Centrifugar a 3500rpm por 2 minutos.

Toma de muestra

Marcar y pesar a las ratas.

En base al peso, calcular la dosis (100mg/kg).

Anestesiar en una cmara de ter.

Llevar a cabo la
canulacin.

Al finalizar colocar a la rata en una trampa para

inmovilizarla

Tomar tiempo 0 De la rata canulada en trampa y reemplazar el volumen de sangre tomado con solucin salina. Administrar dosis

Al terminar sacrificar a la rata en la cmara de ter

Tomar muestras de 200L de sangre a tiempos de: 10,15,30,45,60,90,120, 150,180, 240,270 y 300 min.

Tratamiento de la muestra
La muestra de sangre se coloca en viales con heparina (0.02mL) Se centrifuga en una microcentrifuga a 3500rpm por 2 min. Se toman 100L de plasma y se colocan en un tubo.

Leer en el espectrofotmetro a 540nm.

Mezclar muestras hasta homogeneizar y centrifugar a 3000rpm por 5min

Se adicionan 350L de agua destilada, 50L de solucin stock y 50L de Trinder

Tratamiento de los datos

C mx
Concentraci n Plasmtica

DIRECTAMENTE t mx ABC MTODO DE LOS TRAPRECIOS

ABC

tiempo (minutos)

Gibaldi, 1982

Tratamiento de los datos

ln Concentracin Plasmtica

Ka Ke
t 1/2
MTODO DE LOS RESIDUALES

tiempo (minutos)

Gibaldi, 1982

Referencias bibliogrficas

Rabasco Alvarez A. Biofarmacia y Farmacocintica Bsicas. Conceptos Generales en Farmacologa. Madrid. Accin Mdica. 1997, p. 27-50 Goodman & Gilman. Las bases farmacolgicas de la teraputica. 9. Mxico. Mc Graw Hill Interamericana. 1996. p. 3-29 Florez J. Farmacologa humana. 3. Barcelona. Masson S.A. 1987, p. 50-72 Moffat A, Osselton A, Widdop B. Clarkes Analysis of Drugs and Poisons. 3. London, UK. Pharmaceutical Press. 2004. Sweetman S. Martindale, The complete drug reference. 36. London, UK. Pharmaceutical Press. 2009. Gibaldi M. Farmacocintica. Espaa. Reverte. 1982 Martindale. Gua completa de consulta farmacoterapeutica 1. Espaa. Pharma editores. 2003 p. 13-17 Hamilton D, Moore L, Lehne R. Pharmacology for nuising care. 3a. USA. W.B. Saunder Company, 1998. Martindale. The extra Pharmacopoeia. 27. London. Pharmaceutical Press. 1977. P. 177-186 A. Wade, b. Pharm, m. Phil