Realizado por: Lilian D. Chel Guerrero Maestra: Ada R.

Prez Espadas
Mrida, Yucatn a 09 de Octubre del 2011

Cromatografa

Tipos de cromatografa

Cromatografa en columna

Cromatografa en capa delgada preparativa

Referencias bibliogrficas

La palabra cromatografa significa literalmente escribir en colores.

Tcnica o mtodo fsico de separacin de dos o ms solutos presentes en una mezcla basada en la velocidad de desplazamiento de los mismos. En ella participan dos fases, una mvil (lquida o gaseosa) y otra estacionaria (slida o lquida). La primera, tambin conocida como eluyente, de naturaleza lquida o gaseosa tiene como misin arrastrar las sustancias a travs de la fase fija.

En la estacionaria o fija se verifica la separacin de la

mezcla.

Cuando una especie qumica se distribuye entre dos fases, a este fenmeno se le denomina reparto. Cuando la muestra est formada por multicomponentes y el reparto es muy diferente entre las dos fases consideradas, se habla de extraccin, si est ms equilibrado se denomina

fraccionamiento.

Dependiendo de la interaccin de las sustancias a separar con la fase estacionaria se puede hacer la siguiente clasificacin de tcnicas cromatogrficas: De adsorcin. De reparto. De intercambio inico. De permeabilidad. De afinidad.

De acuerdo con el sistema utilizado como soporte, la cromatografa puede efectuarse en columna, en papel o en

capa fina.

La fase estacionaria es un slido en el que los componentes de la muestra son adsorbidos. La fase mvil puede ser un lquido (cromatografa lquidoslido) o un gas (cromatografa gas-slido); los componentes se distribuyen entre dos fases a travs de la combinacin de los procesos de adsorcin y desorcin.

La cromatografa de adsorcin es particularmente adecuada para el anlisis de molculas no ionizantes, insolubles en agua y relativamente simples, que frecuentemente son ismeros o compuestos muy relacionados. El intervalo de compuestos que pueden separarse se extiende desde los hidrocarburos muy polares hasta compuestos polifuncionales fuertemente polares. Esta cromatografa se ve poco influida por las diferencias en peso molecular y ms por los grupos funcionales especficos. En consecuencia, la separacin por adsorcin de compuestos que difieren solamente en el grado o tipo de sustitucin alquilo, como en los miembros de las series homlogas, es pobre.

Es un proceso de superficie mientras que la absorcin es la penetracin de una sustancia en el seno de otra. En cualquier fenmeno de adsorcin influyen tres variables independientes: el adsorbente, el disolvente y las sustancias a cromatografiar. Por tanto, s una molcula tiene una gran afinidad pasar muy lentamente mientras que otro componente con menos afinidad lo har ms rpidamente.

Existen ciertas sustancias slidas, qumicamente inertes, que tienen la propiedad de adsorber o fijar dbilmente en su superficie a una gran cantidad de compuestos. Entre los adsorbentes ms usuales: slica Gel (xido de silicio), almina (xido de aluminio), celulosa, fluorosil (silicato de magnesio) y sulfato de calcio. La separacin se realiza por la diferente tendencia de adsorcin de los compuestos orgnicos por la fase estacionaria.

Est constituida por un slido poroso, finamente granulado, con centros activos polares en su superficie donde se adsorben las molculas de los compuestos que se van a cromatografiar. Cuanto menor sea el tamao de partcula de este material mayor ser la capacidad de adsorcin. La adsorcin se debe a interacciones intermoleculares del tipo dipolo-dipolo, dipolo-dipolo inducido o enlaces de hidrgeno entre el adsorbente y el soluto. En la gel de slice las interacciones tienen lugar entre los grupos SiOH y SiOSi.

Es un disolvente en el que los componentes de las mezcla son, al menos, parcialmente solubles. Al aumentar la polaridad del disolvente aumenta velocidad de elucin de los compuestos de la mezcla. la

Se puede utilizar un nico disolvente o una mezcla de disolventes e incluso llevar a cabo la elucin con un gradiente de polaridad aumentando progresivamente la proporcin del disolvente ms polar.

Para un mismo compuesto, un aumento en la polaridad de la fase mvil hace que se desplace con ms facilidad de la fase estacionaria. Por ejemplo, se eluir ms rpidamente.

Para compuestos poco polares, que se retienen poco

en el adsorbente, se utilizan eluyentes apolares o poco polares como, por ejemplo, hexano

Para

que quedan muy retenidos en el adsorbente, se emplean eluyentes muy polares como, por ejemplo, metanol o mezclas metanoldiclorometano.

compuestos

muy

polares,

Para compuestos de polaridad media se emplean eluyentes

de polaridad intermedia y son muy aconsejables en estos caso las mezclas en distintas proporciones de hexano-acetato de etilo.

La fase mvil desplaza y disuelve a los componentes de la mezcla segn sea su afinidad por la fase estacionaria es decir,

los componentes ms polares estarn adsorbidos con ms fuerza y sern ms difciles de separar de la fase estacionaria
que los componentes poco polares.

Los menos polares no presentan una interaccin importante con la fase estacionaria (gel de slice) y no sern
retenidos. La regla general es elegir la polaridad del disolvente anloga a la de la muestra a emplear y en la mayora de los casos adsorbentes poderosos (activos) para sustancias no polares y adsorbentes con menos actividad para sustancias ms polares.

Cromatografa liquido slido que utiliza columnas huecas verticales de vidrio cerradas en su parte inferior con una llave que permite la regulacin del flujo de la fase mvil. Como fase estacionaria se emplean bsicamente dos adsorbentes,

gel de slice y almina.

La tcnica consiste en rellenar la columna con el adsorbente elegido que debe sedimentar sin que se produzcan canales o grietas.

En la parte superior de la columna se coloca la mezcla a separar, llamada cabeza de la columna que se obtiene mezclando el adsorbente con la muestra con el eluyente (fase mvil) que va a ser utilizado en el proceso de separacin.

Se deja que el eluyente empiece a descender por la columna ya sea por gravedad o a presin (cromatografa flash). Se produce la adsorcin de los componentes con diferentes intensidades logrando que unos avancen ms que otros. En la parte inferior de la columna se recogen las diferentes fracciones cromatogrficas que se analizan y agrupan en funcin de sus caractersticas.

Solvente

M.S. separados

El rendimiento del proceso depende bsicamente preparacin de la columna y del proceso de elucin. El relleno de la columna puede ser en seco o en hmedo.

de

la

El seco tiene el inconveniente de que pueden aparecer burbujas de aire en la columna que son difciles de eliminar.
Tambin hay que tener presente que los adsorbentes al empaparse de los eluyentes aumenta su volumen y pueden romper la columna.

El relleno hmedo evita los problemas anteriores y consiste en llenar la columna en forma continua con una mezcla de adsorbente con el eluyente a utilizar de menor polaridad. La cantidad de adsorbente a emplear es de 20 25 gramos de adsorbente por cada gramo de mezcla a separar.

Durante todo el proceso nunca debe secarse la columna!!!

El orden aproximado de elucin de los compuestos es el que se indica a continuacin.

Alcanos Alquenos
teres Hidrocarburos halogenados

Aumento de la polaridad movimiento ms lento

Hidrocarburos aromticos Aldehdos y cetonas steres Alcoholes Aminas cidos carboxlicos

Polaridad de los disolventes ms usuales:

Alcanos (hexano, ter de petrleo)

Tolueno Aumento de la polaridad, se eluye ms fcilmente Hidrocarburos halogenados ter dietlico Acetato de etilo Acetona Alcoholes cido actico

Es el mtodo ms utilizado para la separacin y purificacin de compuestos orgnicos, slidos o lquidos, a escala preparativa. Ventajas: Mucho ms verstiles Mayor resolucin Se adaptan a sistemas automatizados o manuales Mayor capacidad de carga

La cromatografa en capa fina tambin se puede usar con fines cuantitativos para separar pequeas cantidades de un

compuesto.

Las separaciones preparativas se realizan en placas estndar de 20 x 20 cm (algunas veces en placas de 20 x 40 cm) ms gruesas y el volumen de la muestra tambin debe ser mayor (alrededor de 10 ml). La muestra se aplica en forma de banda lineal mediante una pipeta Pasteur o con un capilar.

Para la TLC preparativa podemos utilizar todos los sistemas de disolventes presentados.

Una vez realizada la cromatografa, las bandas de inters se ponen de manifiesto utilizando una tcnica no destructiva con el reactivo adecuado (luz UV o Yodo).

Con luz UV (ultravioleta).- Las placas suelen llevar incorporado un indicador fluorescente que absorbe luz UV y emite luz visible, generalmente verde. Cuando se cromatografan sustancias que absorben en el UV donde se encuentra el compuesto no absorbe el indicador y como resultado vemos una mancha que indica su presencia. Con un agente revelador.- Se emplea cuando las sustancias no absorben radiacin UV. El revelador reacciona con los productos absorbidos dando lugar a compuestos coloreados y por tanto se utilizar uno u otro en funcin del compuesto que se quiera visualizar.

La zona de la placa que contiene dicha banda es raspada y recuperada en un matraz y extrada con el disolvente adecuado. Finalmente el disolvente es evaporado para la recuperacin del soluto. Esta tcnica tiene la ventaja de que su tiempo de desarrollo es inferior al de una cromatografa en columna.

"Gua de Prcticas de Qumica Orgnica, Mariana Lpez Snchez Jorge Triana Mndez Mara Esther Torres Padrn. Ed. Servicio de Reprografa y Encuadernacin Universidad de Las Palmas de Gran Canaria (2001). "Introduccin a la Cromatografa, David Abboutt R.S Andrews, Ed. Alambra (1983). "Manual de Cromatografa", Juan Francisco Loro Ferrer, Coleccin Textos Universitarios. Gobierno de Canarias. Consejera de Educacin - Cultura y Deportes (2001). Mtodos Fsicos de Separacin y Purificacin de Sustancias Orgnicas, Mariana Lpez Snchez, Jorge Triana Mndez , Francisco Javier Prez Galvn , Mara Esther Torres Padrn , Universidad de Las Palmas de Gran Canaria (2005).

Morrison, R.T. and Boyd, R.N., Organic Chemestry, Allin & Bacon Inc. 2000.
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