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Citometra de Flujo
Presentado a la Ctedra de: Instrumentacin y Automatizacin en el Laboratorio Clnico.
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Samaruto

Huancayo Per

Lic. T. M. TRIGOSO AVALOS , Wilson E.

La Citometra de Flujo es una tecnologa que permite la medicin de mltiples caractersticas fsicas y qumicas de clulas o partculas en suspensin.

Qu es Citometra de flujo?

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Instrumentacin de la Citometra de flujo

Consta de 3 componentes en general: P sistema de fluidos. P Sistema ptico. P Sistema electrnico.

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Sistema de fluidrico
El propsito del sistema de fluidos es transportar las partculas en una corriente fluida hasta el rayo laser para su interrogacin.

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Este sistema consta de dos fluidos, uno que contiene en suspensin a la muestra y otro que lo envuelve a fin de darle estabilidad. Las clulas deben pasar una a una por delante del haz del lser. Ambos fluidos (Solucin fisiolgica, PBS, aire) no se mezclan porque circulan a diferente presin.

Propiedades de la luz desviada

luz refractada y reflejada Proporcional a la granularidad y complejidad celular Desva la luz en 90 grados

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difractada FSC (Side-scatter) luz SSC(La luz de Proporcional a la superficie celular Desva la luz en menos de 10

dispersin

Fluorescencia

Un fluorocromo es una molcula qumica que absorbe la luz a una determinada longitud de onda (ENERGIA ) energa de excitacin y emite a una longitud superior (MENOR ENERGIA). Interacciona con la luz de excitacin procedente de el lser. Se utiliza unido a anticuerpos especficos (monoclonales ) para antgenos de la clula.

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Cmo se obtiene la luz fluorescente?

Unin de sitios especficos con anticuerpos marcados con fluorocromos . El fluorocromo absorbe energa del lser. El fluorocromo libera energa absorbida por : Vibracin y disipacin del calor. Emisin de fotones a una mayor longitud de onda llamada fluorescencia.

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Espectros
El rango sobre el cual un compuesto fluorescente puede estar excitado es llamado su espectro de absorcin. El rango de longitudes de onda emitidas para un compuesto particular es llamado su espectro de la emisin.

Espectro
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de Absorcin Emisin

PARMETROS BIOLGICOS

Macromolculas Metabolitos de bajo peso Receptores especficos Regiones especficas en macromolculas Orgnulos subcelulares

Integridad de la membrana plasmtica Transporte e internalizacin Potenciales de membrana Actividades enzimticas especficasSntesis de ADN Movimientos inicos
Funciones que requieren Estructuras que requieren marcadores exgenos:

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Sistema ptico
Este sistema se compone de dos tipos de pticas:

La ptica de excitacin, compuesta de el lser y las lentes para enfocar y dirigir el haz de luz La ptica de lectura, compuesta por las lentes de recoleccin de luz emitida luego de la interaccin entre el haz del lser y las partculas y el sistema de espejos y filtros para direccionar longitudes de onda especficas hacia los detectores correspondientes.

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Sistema ptico

FILTROS OPTICOS: Son aquellos que seleccionan las longitudes de onda que deja pasar hacia el detector. Estos pueden ser: DE INTERFERENCIA (Dicroicos que reflejan las long. de onda no deseadas) DE ABSORCION (absorben las long de onda no deseadas). De stos son 3 tipos:

Filtros Band Pass : Dejan pasar un rango de longitudes de onda (Por ej: 620 640 nm) Filtros Short Pass: Dejan pasar por debajo de una longitud de onda determinada ( Por ej: < 575 nm)

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La deteccin de seal
Hay dos tipos de fotodetectores:

Fotodiodos: El fotodiodo es menos sensitivo para iluminar seales, as se usa para detectar al ms fuerte el FSC Los tubos fotomultiplicador (PMTs) se usan para detectar las seales ms dbiles generadas por SSC y fluorescencia.

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Deteccin de la seal
Las

seales ligeras son generadas cuando las partculas atraviesen el rayo lser en una corriente fluida. estas seales ligeras les es convertido a seales electrnicas (los voltajes) por fotodetectores

Un

pulso de voltaje es creado cuando una partcula entra en el 4/28/12

Sistema electrnico
Una

vez las seales ligeras han sido convertidas a pulsos electrnicos una computadora adquiere los datos proporcionados y hace un representacin grafica.

La

computadora produce un histograma o un despliegue de dos parmetros (dot plot o contour plot) a 4/28/12

Forma de presentacin de datos

Histograma Grfico Grfico Grfico Grfico
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de Puntos (Dot Plot) de Contorno (Contour Plot) Isomtrico (3D) de Densidad (Density Plot)

Aplicacin del Citometro de flujo Toxicologa Hematologa

Inmunologa Microbiologa Patologa Parasitologa Trasplantes Citogentica Farmacologa Virologa Biologa

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