Es una coleccin de fragmentos de DNA en la que se espera estn incluidas el mayor nmero de secuencias posibles de un genoma (Alberts, et al.

, 1994). Los fragmentos clonados deben ser de tamao suficiente para contener, en lo posible, genes con sus secuencias reguladoras, pero no tan grandes que dificulten su discriminacin cuando se realice el mapa con las enzimas de restriccin. Uno de los aspectos fundamentales para obtener mapas moleculares y poder realizar anlisis fsico de grandes regiones cromosmicas, as como el aislamiento de genes de inters, se basa en la disponibilidad de bibliotecas genmicas.

 Vector plasmdico y vrico: En ellos se une un fragmento de DNA q contenga gen humano con el cromosoma de un virus o plsmido el cual va a replicar tanto el DNA vrico o plasmdico como el DNA humano insertado en la misma proporcin.

Proceso de preparacin de una Biblioteca Genmica

Utilizar plsmidos circulares de DNA como vectores de clonacin. El plsmido se abre realizando un corte con la nucleasas de restriccin.(Mtodo de la Perdigona) Se da una unin covalente con la DNA ligasa y el fragmento de DNA que se desea clonar (previamente cortado por la nucleasa de restriccin).

Los extremos se unen entre si y la DNA ligasa sella los cortes de la cadena de DNA, produciendo una molcula recombinante de DNA completa. ( HuntingtonPotter, David Dressler).

Se introduce las molculas circulares de DNA recombinante el las bacterias, a esto le podemos denominar que han sido transfectadas con el plsmido. Cuando crecen y se dividen se van multiplicando cada 30 min

Los plsmidos recombinantes tambin se replican y producen miles de copias del DNA que se clono. Cuando estas bacterias han sido tratadas se guardan en condiciones especificas, ya que cada una contiene un fragmento de DNA de humano

Clonacin
Se puede clorar cualquier fragmento de DNA que contenga un gen de inters. El trmino CLONACION DE DNA se puede definir como: La accin de realizar copias idnticas de una molcula de DNA; Este trmino tambin se utiliza para describir el aislamiento de una fragmento de DNA (gen determinado) del resto del DNA de la clula ya que permite realizar varias copias idnticas del DNA de inters.

Biblioteca cDNA:
Consiste en un proceso de clonacin seleccionando las secuencias de DNA que se transcriben a RNA por lo tanto corresponden a genes. 1.- Se realiza una extraccin del mRNA y a continuacin se hace una copia se hace una copia de cDNA de cada una de las molculas de mRNA presentes. 2.- Esta reaccin es catalizada por la enzima transcriptasa inversa de retrovirus, la cual sintetiza una cadena de DNA sobre un molde de RNA. 3.-Las molculas de DNA de una sola cadena sintetizadas por la transcriptasa se trasforman en DNA de doble cadena mediante la DNA polimerasa.

 4.- Se insertan en vectores vricos o plasmdicos y se clonan. 5.- cada uno de los clones obtenidos de esta forma se denomina clon cDNA (ya que son clones derivados de un mRNA)

Diferencias entre clones DNA Genmico y cDNA. Los primeros son una muestra al azar de todas las secuencias de DNA de un organismo, los segundos solo contienen regiones del genoma que se ha transcrito a mRNA

 Construida a partir de una fraccin genmica, como un cromosoma, puede ser muy valiosa para seleccionar genes especficos y para examinar la organizacin del cromosoma. Las bibliotecas provenientes de cromosomas individuales humanos se han preparado utilizando la citometra de flujo.

 Los cromosomas de clulas mitticas se tien con dos colorantes fluorescentes, uno que se une a los pares A T, y otro a los pares G C. Los cromosomas teidos pasan por un rayo lser que estimula la fluorescencia, y un fotmetro clasifica y fracciona los cromosomas segn las diferencias de unin de loscolorantes y de dispersin de la luz.

 Los insertos de DNA clonados en vectores pueden utilizarse en experimentos de hibridacin para caracterizar la identidad de genes especficos, para localizar regiones codificantes o regiones reguladoras en secuencias clonadas y para investigar la organizacin molecular de las secuencias genmicas. Edward Southern desarroll la utilizacin de segmentos de DNA clonado, separados por electroforesis, transferidos a filtros, y rastreados con sondas.

1.- El DNA clonado se corta en fragmentos con una o ms enzimas de restriccin, y estos fragmentos se separan por electroforesis en gel. 2.- El DNA se desnaturaliza dentro del gel en fragmentos de cadena sencilla, y stos se transfieren a un filtro de un material, normalmente nitrocelulosa o un derivado del nylon, que une el DNA. 4.- La transferencia se hace colocando la hoja de la membrana encima del gel, y provocando que el tampn pase por el gel y por la hoja de nitrocelulosa o de nylon por capilaridad. 5.- El tampn pasa por el gel y por la membrana, arrastrando al DNA fuera del gel e inmovilizndolo en la membrana.

 En la prctica, esto se hace poniendo el gel con el DNA desnaturalizado sobre una gruesa esponja que acta de mecha. La esponja est parcialmente sumergida en una cubeta con tampn. Se pone una membrana encima del gel, y se cubre con hojas de papel secante o absorbente La accin capilar arrastra el tampn de la cubeta a travs de la esponja, del gel, de la membrana Al pasar el tampn por el gel, los fragmentos de DNA se transfieren a la membrana, a la que se unen. Despus de la transferencia, el DNA de cadena sencilla se fija a la membrana calentndola a 80C o exponindola a luz ultravioleta para que se hagan uniones entre los fragmentos y la membrana.

 Entonces, los fragmentos de DNA del filtro se hibridan con una sonda. Slo formarn hbridos los fragmentos de DNA de cadena sencilla presentes en la membrana que sean complementarios a la secuencia nucleotdica de la sonda. Se lava la sonda no unida, y se visualizan los fragmentos hibridados. Si se utiliza una sonda radioactiva, la posicin de la sonda se determina por autorradiografa, utilizando pelcula fotogrfica

 Para el mapeo de sitios de restriccin en un gen o cerca de l. Identificacin de fragmentos de DNA que contienen un gen determinado de entre una mezcla de muchos fragmentos. Identificacin de genes relacionados en diferentes especies Detectar reorganizaciones y duplicaciones en genes asociados a enfermedades genticas humanas y a cnceres.

 Sistema que se utiliza para detectar ARN. Puede utilizarse para determinar si un gen clonado es transcripcionalmente activo en un tipo celular o en un tejido dado. Esta tcnica detecta la presencia de RNA que sea complementario al segmento de DNA clonado.

1.- Esto se lleva acabo extrayendo RNA de uno o varios tipos celulares o tejidos. 2.- Se fracciona el RNA por electroforesis en gel, y el patrn de bandas se transfiere a una membrana que una el RNA como en el Southern blot.

3.- El filtro se hibrida con una sonda de DNA de cadena sencilla, proveniente de DNA genmico clonado o de cDNA. 4.- Si hay RNA complementario a la sonda de DNA, ste se detectar por autorradiografa como una banda en la pelcula fotogrfica. Como el protocolo original que utiliza DNA unido a un filtro se conoce como Southern blot, el protocolo que utiliza RNA unido al filtro se denomin transferencia Northern

 Para examinar patrones de expresin gnica en tejidos embrionarios y adultos. Calcular el tamao del mRNA de un gen de inters. Utilizarse para caracterizar y cuantificar la actividad transcripcional de un gen determinado en distintas clulas, tejidos, u organismos.