IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION DE LIPIDOS Realizado por :

PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACIN DE LPIDOS PRUEBA DE ACROLEINA

En esta prueba ocurre ya sea en glicerol libre o en esteres del glicerol La reaccin ocurre cuando el glicerol esta en contanto con el bisulfato de potasio que al calentarse se realiza una deshidratacin formndose un aldehdo

La positividad de esta reaccin indica la presencia de glicerina y se manifiesta por el desprendimiento de vapores blancos irritantes de olor desagradable

PRUEBA DE IODO
La positividad de esta reaccin indica la presencia de cidos grasos de la serie etilnica. La reaccin positiva se manifiesta por la desaparicin del color del Yodo

PRUEBA DE SAPONIFICACIN Es una prueba para identificar lpidos que contengan cidos grasos. Los jabones se define qumicamente como, las sales metlicas de los cidos grasos superiores

Extraccin, separacin e identificacin de lpidos celulares

EXTRACCION DE LIPIDOS COMPLEJOS Los lpidos neutros (triacilgliceridos, ceras, pigmentos, etc). Se extraen fcilmente con ter etlico, cloroformo o benceno. Los lpidos de membrana se extraen mejor con disolventes polares (etanol, metanol) reduciendo las interacciones hidrofbicas entre las molculas de lpidos

CROMATOGRAFIAS DE ADSORCION Las mezclas de lpidos tisulares se fraccionan por diferencia de polaridad de cada lpido Los lpidos polares se fijan fuertemente al gel slice polar mientras que los lpidos neutros emerge con el primer lavado con cloroformo y continuacin se eluyen los lpidos en orden de polaridad creciente

CROMATOGRAFIAS DE ADSORCION
Fraccin I Eluyente fraccin lipdica Hidrocarburos cidos grasos libres steres del colesterol Esteroles Glicridos Cerebrsidos Sulftidos Ceramida polihexsidos fosftidos glicolipidos

cloroformo

II Acetona III Metanol

CROMATOGRAFIA DE CCF

La cromatografa de CCF una capa fina de gel slice sobre una de vidrio donde se aplica en el una pequea cantidad de lpidos disueltos en cloroformo y se sumerge en un recipiente con disolventes orgnicos que desplazan a los lpidos menos polares ya que no tienden tendencia de unirse al gel slice

Despus de su separacin se pulveriza un colorante como rodamina y observar los lpidos con luz ultravioleta Fracciones lipidicas: Esteres del colesterol Triglicridos Colesterol libre cidos grasos Fosfolipidos

DETERMINACIN DE LA ESTRUCTURA DE UN ACIDO GRASO POR ESPECTROMETRIA DE MASAS La espectrometra de masas revela la estructura lipdica completamente El acido graso se convierte en primer lugar en un derivado que minimiza la migracin de los dobles enlaces cuando se fragmenta la molcula mediante bombardeo de electrones

Cuantificacin
Extraccin

Mtodos de cromatografa

Mtodo de Soxhtle

Mtodo de goldfish

Mtodo de mojonnier

Adsorcin

CCF
gravimetra

Determinacin del porcentaje De grasas por diferencia de peso

CGL

espectrofotometra

fotodensitometria

CUANTIFICACIN Despus de la cromatografa se pueden realizar los siguientes mtodos para cuantificar lpidos. Fotodensitometria: Gravimtrico. Espectrofotomtricos. CFG. Otros mtodos utilizados pero para la cuantificacin de lpidos totales son: Mtodo Soxhlet. Mtodo Goldfish. Mtodo Mojonnier.

CUANTIFICACIN
La fotodensitometria Un detector recibe el haz de luz y dependiendo de la intensidad de la luz recibida se determina la concentracin. Mtodo gravimtrico Consiste en pesar la fraccin obtenida de la placa despus separarse del gel silice

CUANTIFICACIN

Mtodos espectrofotomtricos.
Se utiliza segn el lpido a analizar espectroscopia con luz ultravioleta como en el caso de carotenoides, luz visible, infrarroja como en el caso de los triglicridos

CUANTIFICACIN

La CGL separa los componentes voltiles de una mezcla segn las tendencias al disolverse en el material inerte en la columna arrastrndolos por una corriente de gas inerte La mayora de los lpidos aumentan su volatilidad previamente calentndolos en metanol con HCl con NaOH

CUANTIFICACIN Los componentes mas solubles se disuelven en el mismo y los menos solubles son arrastrados y emergen en el primer lugar de la columna. Esta tcnica es ideal para separar y cuantificar cidos grasos

METODO DE SOXHLET
Es una extraccin semicontinua con un disolvente orgnico. En este mtodo el disolvente se calienta, se volatiliza y condensa goteando sobre la muestra la cual queda sumergida en el disolvente. Posteriormente ste es sifoneado al matraz de calentamiento para empezar de nuevo el proceso. El contenido de grasa se cuantifica por diferencia de peso

METODO DE GOLDFISH
Es una extraccin continua con un disolvente orgnico. ste se calienta, volatiliza para posteriormente condensarse sobre la muestra. El disolvente gotea continuamente a travs de la muestra para extraer la grasa. El contenido de grasa se cuantifica por diferencia de peso entre la muestra o la grasa removida

METODO DE MOJONNIER
La grasa es extrada con una mezcla de ter etlico y ter de petrleo en un matraz de Mojonnier, la grasa extrada se pone a peso constante y es expresada en porcentaje de grasa por peso. La prueba de Mojonnier es un ejemplo de extraccin discontinua con disolvente.

BIBLIOGRAFIA

Gurr M.I. Harwood (1991) Lipid

Biochemistry 4ed, Champman & Hall London Prescott S.M., Zimmerman,GA (2000) Platelet-activating factor and related lip mediators. Annu Rev. Biochem 69, 419445.