Lic.

Maria Elsa Romero de Zelaya 2011

La Microbiologa Industrial puede definirse diciendo que es la parte de la Microbiologa que se ocupa de las aplicaciones industriales de los microorganismos. Desde otro punto de vista puede decirse tambin que los procesos de la Microbiologa Industrial constituyen aquellos procesos industriales catalticos basados en el uso de microorganismos. Con el notable impulso de la Biotecnologa producido en los ltimos aos y la inclusin y difusin de otros trminos como biotecnologa de avanzada, biotecnologa moderna, biotecnologa de punta, biotecnologa recombinante o tecnologa del DNA recombinante, biotecnologa e ingeniera gentica, biotecnologa y microbiologa industrial, y hasta biotecnologa negativa, etc., se ha complicado la comunicacin entre los distintos especialistas y la interpretacin adecuada de los trminos empleados. Para poder clarificar esos trminos pensamos que es conveniente definir y delimitar los campos de la Biotecnologa y de algunas disciplinas que la integran

La Biotecnologa es una actividad multidisciplinaria que comprende la aplicacin de los principios cientficos y de la Ingeniera al procesamiento de materiales por agentes biolgicos para proveer bienes y servicios. Los agentes biolgicos pueden ser clulas microbianas, animales, vegetales y enzimas. Se entiende por bienes a cualquier producto industrial relacionado con alimentos, bebidas, productos medicinales, etc., y por servicios a aquellos vinculados a la purificacin de aguas y tratamiento de efluentes.

propuesta por la Organizacin para la Cooperacin Econmica y el Desarrollo (OECD).

La Microbiologa Industrial se ocupa de produccin de bienes y servicios con clulas microbianas. representa una parte, seguramente la ms importante, de la Biotecnologa. La Ingeniera gentica comprende una serie de tcnicas que permiten obtener un organismo recombinante, o sea portador de un gen extrao proveniente de otras clulas, ya sean microbianas, vegetales o animales La Microbiologa Industrial Es una disciplina derivada de la Biologa molecular que est incluida en la Biotecnologa como herramienta fundamental para la obtencin de microorganismos especficos a ser utilizados en la produccin de bienes y servicios

Consideramos que los trminos biotecnologa de avanzada, biotecnologa moderna, no son adecuados. Cualquier tecnologa o biotecnologa avanza y se moderniza. Si los trminos se aplican a procesos con cepas de Ingeniera gentica nicamente o a transplante de embriones o a micropropagacin vegetal por cultivos de tejidos o a produccin de especies vegetales mejoradas por cultivos de tejidos o a produccin de especies vegetales mejoradas por cultivos de anteras pueden confundirse mucho los conceptos cuando con toda justicia podemos incluir tambin en la biotecnologa de avanzada las nuevas tecnologas de produccin de alcohol, ya que son ms modernas o de avanzada con respecto a las anteriores. Si se desea hacer una diferencia, tal vez sera conveniente referirse a la Biotecnologa tradicional o convencional para denominar a los procesos conocidos Con anterioridad al advenimiento de la Ingeniera gentica, y no convencional a los posteriores.

Las reas principales : salud, alimentos, produccin vegetal y animal, insumos industriales, minera y servicios.

Se debe destacar la importancia de la Microbiologa Industrial en el mantenimiento de la salud y tratamiento de enfermedades, fundamentalmente por su aplicacin en la produccin de compuestos de actividad farmacolgica y vacunas.

En la industria de alimentos es tambin significativa la aplicacin de la Microbiologa Industrial en la produccin de bebidas, enzimas, saborizantes, productos lcteos, etc

La produccin agropecuaria se ve tambin favorecida en sus aspectos de Produccin vegetal y animal por un conjunto variado de procesos microbiolgicos que se han enriquecido notablemente en los ltimos aos (como ha sucedido con otras reas) Con la utilizacin de tcnicas de ingeniera gentica. El rea de aplicacin en minera est relacionada con la biolixiviacin o sea con la aplicacin de microorganismos en la extraccin de metales de minerales de baja ley. El rea de servicios se refiere fundamentalmente a la aplicacin de microorganismos en la purificacin de efluentes, aspecto fundamental para El mantenimiento de la calidad de vida.

Criterios generales 1. 2. 3. 4. La cepa a utilizar debe ser genticamente estable. Su velocidad de crecimiento debera ser alta. La cepa debe estar libre de contaminantes, incluidos fagos. Sus requerimientos nutricionales deberan ser satisfechos a partir de medios de cultivo de costo reducido. 5. Debe-ser de fcil conservacin por largos perodos de tiempo, sin prdida de sus caractersticas particulares. 6. Debera llevar a cabo el proceso fermentativo completo en un tiempo corto. 7. Si el objetivo del proceso es un producto, ste debera ser de alto rendimiento y de fcil extraccin del medio de cultivo.

Los microorganismos que se utilizan en un proceso, pueden ser obtenidos por aislamiento a partir de fuentes naturales o de una coleccin de cultivos. A nivel industrial, en general, cada firma posee su propia coleccin de organismos, muchos de los cuales han sido mejorados a travs de tcnicas clsicas de mutacin o de ingeniera gentica.

Existen en el mundo un gran nmero de colecciones depositarias de cultivos.

Entre la diversidad de colecciones se destacan: American Type Culture Collection USA, la cual mantiene bacterias, levaduras, algas, actinomycetes, mohos, protozoos, virus y lneas celulares; Colletion Nationale de Cultures de Microorganismes del Institut Pasteur, Francia; Northern Regional Research Laboratory (NRRL), de Peoria, USA, y National Collection of Type Cultures", Londres, Inglaterra.

Si el organismo a utilizar es aislado de fuentes naturales como agua, suelo, plantas y desechos, la eleccin del material de partida puede hacerse teniendo en cuenta que el organismo exprese en ese ambiente las propiedades que son de inters. Ejemplo, en suelos tratados con pesticidas se podran encontrar organismos adaptados a la degradacin de estos productos qumicos; o en larvas de insectos muertos agentes causales de la muerte.

Elegida la fuente de aislamiento, las posibilidades de xito dependen de la tcnica elegida para el mismo en este caso las alternativas son: a) Aislamiento directo

b) enriquecimiento del cultivo con o sin pretratamiento de la muestra.

Una vez efectuado el muestreo y seleccin (screening) para el aislamiento de una cepa de inters, la misma deber ser caracterizada. En este procedimiento se debe tener en cuenta que la composicin qumica del material a partir del cual se va a realizar el aislamiento comienza a variar a partir del momento en que es tomada la muestra, por lo que se debe procesar rpidamente, tratando de evitar alteraciones que afecten a la poblacin de inters.

Es deseable que el medio que se utiliza para el aislamiento permita la mxima expresin del material gentico del organismo. Si se busca por ejemplo un organismo con accin antimicrobiana, se puede crecer al potencial productor, en una caja de petri en presencia del o los organismos contra los cuales se requiere la accin antimicrobiana, observndose la produccin del inhibidor por las zonas de inhibicin de crecimiento.

Consiste en incrementar en una poblacin mixta el nmero de organismos de inters en relacin al resto. De esta forma se busca favorecer el crecimiento de un tipo dado de microorganismos mediante condiciones de cultivo adecuadas al mismo, o de condiciones inapropiadas para el desarrollo de los otros. Esto se logra mediante el empleo de sustratos especficos o ciertos inhibidores. Para mantener la fuerza selectiva del medio, el cual se modifica por el crecimiento del organismo buscado, se realizan subcultivos peridicos en medio fresco. Esto lleva a que el organismo de inters sea el dominante de la poblacin, lo cual facilita su posterior aislamiento en medio slido. Se debe considerar en este caso el efecto del medio sobre la velocidad especfica de crecimiento (u).

Los objetivos de la conservacin de los cultivos a) preservar la pureza gentica del cultivo sin prdida de ninguna de sus propiedades bioqumicas; b) preservar los niveles de su productividad inicial; c) lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado con facilidad. Esto ltimo puede ser un factor esencial en la seleccin de un mtodo de preservacin. En todo trabajo de Microbiologa se deben conocer las caractersticas de la poblacin con la cual se va a trabajar (propiedades morfolgicas y bioqumicas). En este sentido, tanto en la conservacin como en el desarrollo del cultivo, ya sea el que suministra o el que recibe la cepa, deberan usar las mismas tcnicas metodolgicas. Tanto para el mantenimiento, preparacin y propagacin de inculos se deben usar mtodos reproducibles que no produzcan variaciones o prdidas de las caractersticas de la cepa empleada. No hay mtodos de mantenimiento en procesos industriales que sean comunes a todas las industrias, emplendose en algunos casos mtodos especficos secretos.

El conocimiento de las caractersticas del cultivo es esencial en la eleccin de un mtodo de preservacin. La identidad del cultivo puede conocerse en base a sus caractersticas de crecimiento en uno o ms medios especficos, tomando en consideracin propiedades macro y microscpicas exhibidas, o en base a una evaluacin ms exhaustiva empleando muchos ensayos bioqumicos, biolgicos, inmunolgicos y genticos.

En general los cultivos no son estudiados en detalle debido a la casi Imposibilidad de determinar en cada etapa si ha habido o no alteracin gentica. En la mayora de las situaciones solamente se pueden notar cambios mensurables u observables tales como pigmentacin, morfologa, reacciones fermentativas, propiedades microscpicas, etc. El anlisis de estos parmetros junto con la determinacin cuantitativa del recuento de colonias antes y despus del proceso de mantenimiento brindan la informacin necesaria para la correcta evaluacin de la tcnica de conservacin a elegir.

Subcultivos

Mantenimiento bajo capa de aceite Congelacin Cultivos en tierra Preservacin en celulosa Liofilizacin

Lic. Maria Elsa Romero de Zelaya 2011

INTRODUCCION
A la hora de desarrollar un proceso industrial destinado a la produccin de un metabolito o de una enzima de origen microbiano, hay que considerar varios aspectos: (1) el aislamiento del microorganismos de inters, la deteccin de los metabolitos deseados y la conservacin del microorganismo aislado para la produccin industrial estable, (2) el diseo del proceso de fermentacin, y (3) la mejora de las cepas aisladas para incrementar el rendimiento. Todos los organismos producen metabolitos primarios (aquellos que intervienen en las rutas centrales del metabolismo y que son esenciales para la supervivencia y, en general, idnticos en todo tipo de organismos) y secundarios. Estos ltimos son especficos de cada tipo de organismo y estn involucrados en el establecimiento de las relaciones ecolgicas del organismo productor.

Aislamiento y manipulacin de cultivos de inters Aislamiento de cultivos El primer paso en el proceso industrial es el aislamiento de un microorganismo que produzca un metabolito con inters industrial. La tarea de aislamiento de microorganismos hay que plantearla considerando las caractersticas del producto y del proceso que se va a realizar y las caractersticas ecolgicas de la muestra que se toma. Lo primero nos indicar dnde tomar las muestras y lo segundo cmo disear los medios de aislamiento para los microorganismos presentes en dichas muestras. El estudio ecolgico de las caractersticas del microorganismo de inters permitir hacer una bsqueda sistemtica en los diferentes nichos de un ecosistema, lo que proporcionar un gran nmero de microorganismos de salida para el proceso de deteccin.

Un esquema de estudio ecolgico previo a la toma de muestras comprendera los siguientes pasos: (1) lista de grupos de microorganismos que van a ser aislados (los medios y tcnicas de cultivo son diferentes para bacterias y hongos, por ejemplo); (2) descripcin del ecosistema o hbitat en el que se van a tomar las muestras, (3) agrupacin de las muestras segn el material de origen (suelo y horizontes del suelo, agua, material vegetal, etc.); (4) lista de los parmetros ambientales a considerar (pH, salinidad, potencial redox, temperatura, etc.); (5) lista de los substratos naturales disponibles por los microorganismos autctonos en su ambiente natural, (6) diseo de las tcnicas de aislamiento usando la informacin de los puntos anteriores, (7) evaluacin de las tcnicas de aislamiento usando patrones internos como control, y (9) utilizacin de procedimientos de enriquecimiento para los microorganismos que puedan ser de inters.

Deteccin de metabolitos : Una vez recogidas las muestras hay que desarrollar el procedimiento de bsqueda y deteccin (screening en ingls) del metabolito de inters. Histricamente la bsqueda se ha dirigido hacia la produccin de antibiticos; pero actualmente se ha ampliado el campo a otros productos teraputicos y, en general, puede desarrollarse cualquier bsqueda para la que se disponga de un sistema de deteccin suficientemente correcto. En cualquier caso, haz que considerar dos cualidades importantes a la hora de disear un proceso de deteccin: (1) la selectividad: se ha de poder detectar un compuesto de inters mezclado con un nmero muy elevado de compuestos que no son interesantes; y, (2), la sensibilidad: la concentracin del metabolito de inters puede ser extremadamente baja.

La bsqueda puede hacerse en cultivos slidos o en cultivos lquidos. Sin embargo, puesto que la produccin ha de realizarse en cultivos lquidos y puesto que los metabolitos de cultivos slidos son diferentes de los de cultivos lquidos, es conveniente realizar la deteccin, siempre que sea posible, en medios de cultivo lquido.

Las pruebas de actividad se pueden realzar sobre diferentes tipos de organismos (animales vivos, plantas, bacterias, hongos), sobre cultivos celulares o sobre preparaciones subcelulares. Para cada tipo de bsqueda hay que disear un procedimiento de deteccin adecuado.

Desarrollo del inculo: Tanto en la primera produccin industrial como en las siguientes es necesario utilizar grandes volmenes de cultivo por lo que la preparacin de un inculo adecuado es una tarea de importancia capital. En un proceso industrial puede ser necesario realizar incubaciones de gran volumen (>160.000 litros) para las que son necesarios tambin grandes inculos (>1.000 litros). Para repetir rutinariamente la operacin de produccin es necesario utilizar cultivos almacenados del microorganismo de inters (cultivos stock) y a partir de ellos hay que desarrollar el inculo intentando: (1) minimizar la prdida de viabilidad durante el proceso de recuperacin del microorganismo, (2) obtener una copia genticamente idntica a la que se haba almacenado (esto es: evitar mutaciones y contaminaciones), (3) incrementar la biomasa del cultivo y (4) cultivar el microorganismo hasta un estado fisiolgico adecuado para lograr la mayor eficiencia en la fase final de produccin. Al desarrollar un inculo es necesario conseguir una alta velocidad de crecimiento y de concentracin de biomasa al inicio del proceso de fermentacin.

Mejora de las tcnicas de cultivo: Desde las primeras etapas del desarrollo de un proceso industriales hace necesario mejorar el medio de cultivo del microorganismo para conseguir un mayor rendimiento en la produccin del metabolito de inters, reducir la presencia de otros productos que puedan dificultar el aislamiento del compuesto deseado y reducir los costes de produccin. Puesto que el nmero de variables qumicas y fsicas independientes que afectan el crecimiento del microorganismo es muy alto, su optimizacin mediante el anlisis sistemtico de cada una de ellas se hace rpidamente imposible. Para realizar el estudio cuando hay ms de cinco variables independientes se recomienda utilizar una aproximacin de anlisis multivariable que consiste en agrupar varias variables para decidir sobre el incremento en rendimiento debido al cambio de un grupo de ellas.

Conservacin de los microorganismos importantes: La conservacin de microorganismo de inters industrial es una tcnica bsica en todo el proceso. La conservacin ha de estar encaminada al mantenimiento de las cepas altamente productivas durante largos periodos de tiempo sin que se produzcan cambios fenotpicos, especialmente en las caractersticas relacionadas con la produccin de los metabolitos de inters. Se han desarrollado varias tcnicas de conservacin; (1) el subcultivo de clulas activas, (2) la desecacin de cultivos, (3) la liofilizacin, (4) la congelacin mecnica (-20 -80C) y (5) la ultracongelacin en vapor de nitrgeno lquido (-156C) o en nitrgeno lquido (-196C). Generalmente, las tasas de supervivencia son ms elevadas despus de la conservacin en nitrgeno lquido que tras cualquiera de los otros mtodos. En los casos de conservacin por congelacin, es necesario aadir a los cultivos agentes crioprotectores (glicerol, Di-Metil-SulfOxido, DMSO).