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Requerimientos en la replicacin 1. Un molde de ADN de cadena simple 2. Un cebador o primer. 3. dNTPs y Mg 4. Enzimas de la replicacin
Helicasa Primasa SSB DNA POL III DNA POL I DNA Ligasa
Sintetiza DNA (holoenzima- 10 protenas) Remueve primers y rellena espacios. Une los extremos de DNA
DNA Polimerasa I (POL I) de E. coli Primera enzima aislada que sintetiza la polimerizacin de nucletidos.
Una sola cadena polipeptdica Mr: 103 KD; 1000 aa; 300-400 unidades/clula Presenta varias actividades: Polimerasa (5' 3'); ~ 10 nucletidos/sg 3' 5' exonucleasa, prueba de error 5' 3' exonucleasa, remueve primers
Kda 3
Sntesis ADN eucaritico. Marcaje de ADN (Random primer meted) Marcaje con Random primer Desnaturalice ADN p Mezcle con Oligonucleotido (Random Primer + ssADN) Aada Klenow frag + E 32P dNTPs
Random
A pesar de sus diferencias: Todas necesitan un molde de ADN. Sintetizan en direccin 5 a 3. Utilizan dNTPs Requieren un primer para iniciar la sntesis. Catalizan la formacin de enlaces fosfodiester.
Polimerasas eucariticas
Polimerasas eucariticas
Polimerasa Actividad primasa Primer de ARN seguido de unos pocos nucletidos de ADN Polimerasa Completa la replicacin en la hebra lder y retrazada. Polimerasa No participa en la replicacin Asociada con reparacin y recombinacin.
Polimerasas eucariticas
Polimerasa Replica ADN mitocondrial Una polimerasa similar tambin replica ADN cloroplstico. Similar en estructura y funcin a la polimerasa Polimerasa Parece tomar parte de la replicacin nuclear Replicacin de hebra lder y retrazada. El papel preciso no es an claro.
Polimerasas eucariticas
Polimerasas ( , , , , , ) Replicacin de ADN daado Reparacin del ADN La mayora de las ADN polimerasas tienen mltiples papeles en la replicacin y reparacin del ADN
ADN Polimerasa
4 subunidades. 167 kDa con actividad polimerasa Baja posesividad. No tiene prueba de lectura. Inicia la sntesis del primer (primasa)
ADN Polimerasa
1. involucrada en la reparacin del ADN. 2. Es mas mas pequea ~ 40 Kda 3. No es muy activa, no presenta actividad exonucleasa. 4. Protenas asociadas la activan. 5. Se presenta mayor cantidad de polimeros en clulas tratadas con agentes que daan el ADN. Ejemplo: virus.
ADN Polimerasa
1. 2. 3. Polimerasa de Levaduras, enzima del ncleo. Es una protena de 125 KDa. Depende para aumentar su actividad de una protena de 36 KDa la PCNA (antgeno celular de proliferacin nuclear), aumentando su actividad unas 50 veces. Replica ssADN del fago en presencia de un primer. Presenta actividad exonucleasa 3 a 5. Esencial para replicacin, sntesis de ambas hebras. Protenas accesorias potencian su actividad (PCNA)
4. 5. 6. 7.
Polimerasa
1. Polimerasa 2 de las levaduras. 2. Tiene un tamao de 255 KDa, muy activa (no necesita PCNA). 3. Juega un papal muy importante en la Replicacin y reparacin del ADN.
El replisoma eucaritico
Polimerasa primer. Polimerasa ADN. para la sntesis del
para la sntesis de
El factor C de replicacion desplasa pol y atrae PCNA (Proteina deslizante). PCNA (proteina deslizante) para la procesividad. Rnasa H para remover el primer de ARN
El replisoma eucaritico
La helicasa (DnaB) recluta DnaG primasa que sintetiza un primer o cebador DNA pol III interactua con la unin DNA molde-Primer
Replicacin en eucariotes
Menos entendida que en procariotas Algunas diferencias Mltiples orgenes de replicacin, secuencias de replicacin autnoma (ARSs), 100 200 pb. Mas tipos de ADN polimerasas Los nucleosomas se despus de la replicacin
ensamblan
inmediatamente
Control de la Iniciacin
Terminacin de la replicacin
La terminacin de la replicacin en E. coli se da en una regin de 350 Kb flanqueada por 10 sitios terminadores idnticos de 23 pb Los sitios ter son reconocidos por la protena Tus (Terminator Utilization Sustance) Tus Le permite al replisoma pasar en una direccion pero no en la otra Tus es una contrahelicasa, directamente la accion de DnaB. bloquea
Terminacin de la replicacin
Problemas
Si el genoma es circular: Los cromosomas terminan enredados. Si el genoma es lineal: Los cromosomas gradualmente se acortan.
Terminacin de la replicacin
Problemas
La ADN polimerasa requiere un primer de ARN. El primer de ARN debe ser removido El primer del extremo no puede sr reemplazado porque la ADN polimerasa solo trabaja en 5 3
El ADNss en el extremo izquierdo puede alinear con el ADNss en el extremo derecho Los espacios faltantes son llenados por la ADN polimerasa (gp5) y ligados por la ADN ligasa T7 (gp1.3) El concatamero es cortado en generando dos mleculas con los extremos 5 completos.
Telomerasa
La telomerasa contiene una parte protenica y una de ARN Parte de ARN El ARN contiene una secuencia que es complementaria las repeticiones de los telomeros Los ARN de las telomerasas varian en longitud -Tetrahymena 146nt -Candida albicans 1544 nt Ellos adoptan una estructura 2ria (y 3ria) caracterstica
El telmero
Los telmeros consisten de Aprox. 1000 copias de una secuencia repetida en tandem
El telmero
La unin de una protena (o un complejo) lo protege de la degradacin cuando no esta siendo replicado