INTRODICCION A LA CROMATOGRAIIA DL GASLS

In|roduccin a la croma|oaralia.
Dclinicin
Principios bsicos
Croma|oaralia dc Gascs
Campo dc aplicacin
Par|cs dc un croma|aralo dc aascs
LA CROMATOGRAIIA DL GASLS Y SIS
APLICACIONLS
22 DL OCTIBRL DL 2007
INTRODICCION A LA CROMATOGRAIIA
Dclinicin
Principios bsicos
Dclinicin
Tccnica quc pcrmi|c scparar
los componcn|cs dc una
mucs|ra dcbido a su dilcrcn|c
alinidad cn|rc dos lascs
inmisciblcs cn|rc si, una
cs|acionaria (liquida o slidai v
o|ra mvil (aas o liquidai"
to
t1
t2
A B
A B
Flujo de fase mvil
La mucs|ra sc in|roducc cn la lasc mvil v cs |ranspor|ada a
lo larao dc la columna quc con|icnc una lasc cs|acionaria
dis|ribuida.
Las cspccics dc la mucs|ra cxpcrimcn|an in|craccioncs
rcpc|idas (rcpar|osi cn|rc la lasc mvil v la lasc cs|acionaria.
Cuando ambas lascs sc han cscoaido dc lorma adccuada, los
componcn|cs dc la mucs|ra sc scparan aradualmcn|c cn bandas
cn la lasc mvil.
Los componcn|cs abandonan la columna cn ordcn crccicn|c
dc in|craccin con la lasc cs|acionaria.
La amplia aama dc sclcccin dc ma|crialcs para la lasc mvil
v la cs|acionaria pcrmi|c scparar molcculas quc dilicrcn muv
poco cn sus propicdadcs lisicas v quimicas.
lasificacin de los mtodos cromatogrficos
romatografa
romatografa de gases romatografa de lqnidos
Cas -Lqnido
CL
Cas -Slido
CS
Lqnido -Lqnido
LL
Lqnido -Slido
LS
JntercamIio
inico
JJ
Jclnsin
J
asos particnlares:
JntercamIio Jnico: Los componentes inicos de la mnestra se separan por el
intercamIio selectio con contraiones de la fase estacionaria
Jclnsin: La fase estacionaria proporciona nna clasificacin de molcnlas
Iasada en la geometra el tamao molecnlar
omportamiento cromatogrfico de los compnestos
Jl comportamiento cromatogrfico de nn componente de nna mnestra
pnede descriIirse de diersas formas:
- VJ Volnmen de retencin
Volnmen de fase mil necesario para transportar la Ianda de nn
componente desde el pnnto de ineccin. a tras de la colnmna.
hasta el detector (en el mimo de pico del componente)
- tJ tiempo de retencin
Tiempo necesario para qne el componente. nna ez inectado pase a
tras de la colnmna alcance el detector (en el mimo de pico del
componente)
- L razn de reparto
Js nna medida del tiempo qne el componente est en la fase
estacionaria en relacin con el tiempo qne est en la fase mil
to
t1
t2
A B
A B
Flujo de fase mvil
tB
A B
tA
A
Seal
tiempo
to
t1
t2
tB
tA
L razn de reparto
tJ - tH VJ - VH
L= =
Seal
tiempo
to
tB
tA
tH VH
Donde tH es el tiempo de retencin de
nn compnesto qne no interaccionara con
la fase estacionaria tJ es el tiempo de
retencin del compnesto de inters. Lo
mismo se pnede epresar en relacin con
Los olnmenes de retencin.
Jl oIjetio de la cromatografa es doIle:
Separar los distintos componentes de la mnestra
Jdentificar los componentes preiamente separados
Separar los distintos componentes de la mnestra
Selectiidad eficiencia
Buena selectividad
Eficiencia baja
Baja selectividad
Buena eficiencia
Buena selectividad
Buena eficiencia
Jdentificar los componentes preiamente separados
Seleccin de detectores adecnados qne permitan el anlisis
cnalitatio.
- La seleccin de nn detector est relacionada con la natnraleza de las
snstancias a determinar.
- Los componentes de nna mnestra se identifican por sn tiempo de
retencin
- Se pneden emplear tcnicas qne aporten nna maor informacin
soIre la natnraleza de los componentes: Acoplamiento con
Jspectrometra de Hasas
Anlisis nantitatios Iasados generalmente en la
integracin del rea Iajo los picos.
- aliIracin con patrones o estndares: Si se realizan determinaciones
cromatogrficas de mnestras de concentracin conocida de algnno de
sns componentes. se pnede realizar nna recta de caliIrado
posteriormente el anlisis e integracin de nna mnestra de
concentracin desconocida del citado componente permitir la
cnantifcacin del mismo.
- Jstndar interno: Permite qne aren las condiciones de operacin
entre mnestra mnestra.
romatografa de Cases
Js la tcnica a elegir para la separacin de compnestos
orgnicos e inorgnicos trmicamente estaIles oltiles
Jn cromatgrafo de gases consiste en el acoplamiento de
arios mdnlos Isicos ensamIlados para:
- Proporcionar nn flnjo constante de gas portador
- Permitir la introdnccin de apores de la mnestra en la
corriente de gas qne flne
- ontener la longitnd apropiada de fase estacionaria
- Hantener la colnmna a la temperatnra apropiada (o la
secnencia del programa de temperatnra)
- Detectar los componentes de la mnestra a medida qne
elnen de la colnmna
- Proeer nna seal legiIle proporcional en magnitnd a la
cantidad de cada coomponente
romatografa de Cases
romatografa de Cases
romatografa de Cases
Sistema de ineccin
Jl modo estndar es la ineccin
directa. la mnestra es inectada
con nna jeringa a tras de nn
septnm de goma a nn alineador
de idrio donde es aporizada
transportada por el gas al
interior de la colnmna.
Jl Iloqne de ineccin. se
mantiene a nna temperatnra tal
qne permita conertir
prcticamente de forma
instantnea la mnestra lqnida en
nn tapn de apor.
Jisten jeringas especiales para
mnestras gaseosas. TamIin se
pnede emplear nn lazo o Incle
para incoporar las mnestras
gaseosas al flnjo de gas portador
Sistema de ineccin
Jl modo de separacin ms
etendido en la actnalidad se
Iasa en el empleo de colnmnas
capilares. Jstas colnmnas
reqnieren mn peqneos
olnmenes de mnestra.
Jsto se logra empleando nn
inector qne incorpora nn diisor
de flnjo (split). Normalmente se
introdnce en la colnmna nn 1'
nando las snstancias a separar
se encnentran a mn Iajas
concentraciones se realiza
ineccin sin diisor (splitless)
Sistema de ineccin
Para el anlisis de compnestos
orgnicos oltiles en mnestras
slidas lqnidas. se han
desarrollado algnnas tcnicas
aniliares:
Jspacio de caIeza (Head space)
Pnrga trampa (Pnrge and trap)
Jspacio de caIeza (Head space)
Se analiza la fase de apor en
eqniliIrio termodinmico con la
mnestra en nn sistema cerrado.
Para ello se procnra nn eqniliIrio
estaIle. mediante el control de la
temperatnra del ial qne contiene
la mnestra.
Posteriormente. se arrastra la
fase apor al interior del
cromatgrafo.
% equilibrio
Gas portador A la columna
Pnrga trampa (Pnrge and trap)
Js aplicaIle solo a mnestras lqnidas.
onsiste en la continna renoacin del gas en
eqniliIrio con la mnestra. con lo qne se
consigne el desplazamiento dinmico de los
compnestos oltiles de la mnestra lqnida a
la fase gaseosa.
Los apores se arrastran a nna trampa donde
qnedan retenidos se an concentrando.
Jinalizado el proceso se calienta la trampa
se arrastran los apores al interior del
cromatgrafo.
%
1) Gas portador
trampa
% baja
%
2) Gas portador
trampa
% alta
A la columna
olnmnas cromatogrficas
olnmnas capilares olnmnas Jmpacadas
olnmnas cromatogrficas empacadas
Se constrnen con tnIo de acero
inoidaIle. niqnel o idrio.
Los dimetros interiores an de 1.6 a 9
mm.
La longitnd snele ser inferior a los 8 m.
Se rellenan de nn material adsorIente
adecnado a las snstancias qne se qniere
separar.
olnmnas cromatogrficas capilares
Se constrnen con slice fnndida.
Los dimetros interiores snelen ser de 200-250 3m.
La longitnd snele ser snperior a los 20 m.
Ha dos tipos:
Jmpacadas con partcnlas slidas ocnpando el total del dimetro
de la colnmna (micro-empacadas)
TnInlares aIiertas. con traectoria para el flnjo aIierta sin
restriccin por el centro de la colnmna
Jjemplos de fases estacionarias en cromatografa de gases
Separaciones por pnnto de eInllicin de compnestos en nn
interalo amplio de pesos molecnlares:
Jscnalano
Polidimetilsiloano
Para hidrocarInros insatnrados otros compnestos
polidifenildimetilsiloano
policarIoranometilcianoetilsilicn
Para compnestos nitrogenados
poliamida
policianoetilmetilsilicon
Para alcoholes. steres. cetonas acetatos
polietilenglicol
pentaeritritol tetracianoetilado
Las colnmnas cromatogrficas se enrollan. se snjetan en nn
soporte se introdncen en el interior de nn horno
Jl horno deIe poderse calentar enfriar rpidamente
La temperatnra se deIe poder programar para poder
traIajar en rgimen de gradiente
Hnchas aplicaciones mtodos cromatogrficos reqnieren
comenzar a temperatnras por deIajo de la amIiental
Horno
%1
%2> %1
Horno
taraeteristieas ideales de un deteetor para tromatografia de Cases:
SensiIilidad alta estaIle: tpicamente 10
-8
g solnto/s
Lajo niel de rnido
Jespnesta lineal en nn amplio rango dinmico
Tiempo de respnesta corto
Lnena respnesta para toda clase de compnestos orgnicos
JnsensiIilidad a las ariaciones del flnjo la temperatnra
JstaIilidad roInstez
Simplicidad en sn operacin
Jdentificacin de compnestos positia
Tcnica no destrnctia
Peqneo olnmen en preencin del mezclado de componentes
Sistemas de deteccin
Sistemas de deteccin
etector de ionizacin de llama (F)
Jste detector aade hidrgeno al
elnente de la colnmna.
La mezcla pasa a tras del
condncto de nn mechero. donde se
mezcla con aire eterno lnego
arde.
nando entra en la llama material
ionizaIle del elnente de la colnmna
Se qnema la corriente anmenta
notaIlemente.
Jste detector es ideal para compnestos
oidaIles.
No responde a los compnestos de
carIono totalmente oidados. como
carIonilos o carIoilos grnpos ster
Sistemas de deteccin
etector de conductividad trmica (%)
Jtiliza nn filamento caliente
colocado en el flnjo de gas emergente.
La cantidad de calor por condnccin
qne pierde el filamento hacia las
paredes del detector depende de la
condnctiidad trmica de la fase
gaseosa.
Js ntil para determinar la presencia
inclnso de peqneas cantidades de
materiales orgnicos qne prodncen
nna rednccin relatiamente grande
en la condnctiidad trmica del
elnente de la colnmna.
Sistemas de deteccin
etector de captura de electrones (E)
Jl elnente pasa entre dos electrodos.
Jno de los electrodos tiene en sn
snperficie nn radioistopo qne emite
electrones de alta energa conforme
decae.
Los electrones IomIardean el gas
portador (N2) formndose nn plasma
qne contiene iones positios. radicales
electrones trmicos.
Se aplica nna diferencia de potencial
de modo qne se recolectan los
electrones generados.
Los compnestos qne aIsorIen
electrones reaccionan con los
electrnes trmicos disminnendo la
corriente del detector. la cnal es
medida permite la cnantificacin
Sistemas de deteccin
etector de espectroscopa de masas (MS)
Los elnentes son ionizados
fragmentados.
Los iones resnltantes se dirigen a
tras de nn cnadrnpolo se ordenan
en fnncin de sn masa.
Jse detector permite oItener el
espectro de masas del compnesto qne
ha elnido.
Podemos por tanto conocer. adems
del tiempo de retencin el espectro de
masas del compnesto contrastarlo
con IiIliotecas de espectros.
Se trata por tanto de nn detector
nniersal para la maora de los
compnestos conocidos.
romatografa Jnica
Polaridad
Lasndose en la polaridad de la fase estacionaria
la fase mil. se distingnen los signientes mtodos
de cromatografa lqnida:
PoIaridad de Ia
fase estacionaria
PoIaridad de Ia
fase mviI
inico
poIar
no poIar
no poIar poIar inico
Cromatografa en
fase normaI
Cromatografa en
fase reversa
Cromatografa de pares inicos
Cromatografa inica
Jl intercamIio inico como mecanismo de
separacin
La gran maora de las separaciones por cromatografa
inica ocnrren por intercamIio inico soIre fases
estacionarias con grnpos fnncionales cargados. Los
correspondientes contraiones del elnente se localizan en la
ecindad de los grnpos fnncionales se intercamIian con
iones del analito de la misma carga en la fase mil. Para
cada ion el proceso de intercamIio se caracteriza por nn
eqniliIrio de intercamIio inico correspondiente. qne
determina la distriIncin del analito (H
-
A
-
) entre la fase
mil la fase estacionaria:
) )
) )
I.e. I.m.
I.m. I.e.
A
E A
E A
K


c
c

A
-
es el ion del analito
E
-
es el ion del eluyente (contraion)


. e . I . m . I . m . I . e . I
A E A E
l intereambio ionieo eomo meeanismo de
separaeion
Jl grnpo ms importante de intercamIiadores inicos son
los Iasados en resinas sintticas hechas de nn copolmero de
estireno diinilIenceno.
Los intercamIiadores catinicos se oItienen por posterior
snlfonacin de esta resina de estireno-diinilIenceno. Los
intercamIiadores aninicos por posterior clorometilacin
segnida de aminacin.
ntercambiador catinico ntercambiador aninico
6romatograf|a |n|ca
TamIin llamada cromatografa de intercamIio inico.
determina iones inorgnicos orgnicos. normalmente por
condnctiidad.
Se ntilizan dos tipos de tcnicas en la prctica:
Snpresin qnmica. en la qne la condnctiidad de fondo se
snprime tanto qnmica como electrnicamente. Normalmente
ntilizada en aniones.
Snpresin electrnica. en la qne se emplean elnentes con sales
de cidos orgnicos en Iaja concentracin soIre
intercamIiadores de iones de mn Iaja capacidad para alcanzar
nna condnctiidad de fondo relatiamente Iaja. qne pnede ser
snprimida directamente por medios electrnicos.
Se Iasa en el nso de sales de cidos dIilmente disociaIles (NaHO
8
. por
ejemplo) como elnentes. Jstos elnentes se pneden eliminar en gran medida
mediante nna reaccin post-colnmna de acnerdo con el signiente proceso
Jl cido carInico formado como resnltado del intercamIio catinico se
disocia mn dIilmente. por lo qne aporta poca condnctiidad.
Por otro lado. los iones de la mnestra snfren la reaccin correspondiente. Por
ejemplo. para el clornro
Jl proceso de snpresin conierte el Nal al correspondiente cido fnerte. el
cnal tiene nna maor condnctiidad qne la sal original. nanto menor fnerza
tenga el cido prodncido. el incremento en sensiIilidad deIido a la snpresin
qnmica ser menor.
Snpresin qnmica
Snpresin qnmica
Eluyente - bomba
nyeccin de
muestras
Separacin
Supresin eteccin
Sin supresin qumica
Eluyente: cido ftlico
on supresin qumica
Eluyente: H

-
/

-
Aniones
ationes sin snpresin qnmica
Eluyente - bomba
nyeccin de
muestras
Separacin
Supresin eteccin
Deteccin por condnctiidad
La condnctiidad es nna medida de la capacidad qne tienen las
disolnciones de electrolitos para transportar la corriente por
migracin inica en nn campo elctrico aplicado entre dos
electrodos.
La condnctiidad () es directamente proporcional a la
concentracin para disolnciones dilnidas. signiendo la relacin
Donde
es la condnctiidad eqnialente en Scm
2
mol
-1
c(eq) es la concentracin eqnialente en eq/l o normalidad

eq ( c c

Eluyente - bomba
nyeccin de
muestras
Separacin
erivatizacin
eteccin
eteeeion UV/VIS
Directa: Se nsa en la determinacin de iones qne aIsorIen
fnertemente en el rango JV (nitrito. nitrato aniones
orgnicos. p.e.) en presencia de altas concentraciones de
iones inorgnicos (clornro. fosfato snlfato. p.e.) qne tienen
escasa o nnla aIsorcin JV.
Jndirecta: Se ntiliza con elnentes de alta aIsorcin JV
(ftalato. p.e.). De este modo. los iones con menor actiidad
JV qne el elnente darn picos negatios los iones con
maor actiidad JV qne el elnente darn picos positios.
on reaccin post-colnmna: Jsada en la deteccin de
metales de transicin (Je. Ni. n. Hn Zn. p.e.)
Eluyente - bomba
nyeccin de
muestras
Separacin
eteccin
Deteccin electroqnmica
Se ntiliza ocasionalmente. Jeqniere qne los iones a determinar
sean snsceptiIles de oidarse o redncirse. Jntre ellos ha mnchos
compnestos orgnicos (azncares aminas. p.e.). metales de
transicin aniones como nitrito. nitrato. halnros. snlfnro.
ciannro. snlfito snlfato.
Ha cnatro tcnicas diferentes :
Amperometra: Hedida de la corriente a potencial constante
nlomIimetra: Hedida de la corriente a potencial constante con
100' de conersin del analito
Voltametra: Hedida de la corriente frente al potencial en nn
rango definido de potencial
Amperometra de pnlsos: Hedida de la corriente a pnlsos de
potencial constante
Jstado. cantidad preparacin de mnestras
Los lqnidos qne sean acnosos o misciIles en el agna se pneden
analizar directamente. Los lqnidos. slidos gases
inmisciIles en agna deIen ser etrados o disneltos en
disolncin acnosa antes del anlisis.
Jl olnmen tpico a analizar es de 5 a 200 ul. annqne se pnede
partir de olnmenes tan grandes como 100 ml. ntilizando
tcnicas de preconcentracin cromatogrficas cnando se
reqniera nna maor sensiIilidad.
Dilncin filtracin son los procedimientos ms comnnes de
preparacin de mnestras. Se reqniere etraccin para
mnestras no acnosas o preconcentracin para mnestras
dilnidas. La necesidad de deriatizacin precolnmna es rara.
Tcnicas complementarias
AIsorcin atmica. emisin atmica plasma de
acoplamiento indnctio. Se nsan para determinar la
cantidad total de nn metal en ez de nna cierta forma
inica.