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J. Loaiza R
14ABR09
 

Los medios de cultivo son una mezcla de

nutrientes que en concentraciones adecuadas y
en condiciones físicas óptimas, permiten el
crecimiento de los microorganismos.
 Los medios de cultivo son un punto crítico
en el laboratorio de microbiología por lo que
un control en su fabricación, preparación,
conservación y uso, asegura la exactitud,
confiabilidad y reproducibilidad de los
resultados obtenidos.
|

pe acuerdo a la naturaleza de sus

constituyentes en:

Ñ |edios naturales o complejos

Ñ |edios definidos o sintéticos

pe acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos
se clasifican en:

Ñ |edios de enriquecimiento
Ñ |edios selectivos
Ñ |edios diferenciales

Figura 1. 
  
cultivado en medio selectivo
|
Ñ Fomentar el crecimiento microbiano para
comprobar las características del cultivo.

Ñ Facilitar algunas reacciones bioquímicas, que

luego puedan ser demostrables por
observación directa o a través de reacciones
subsecuentes con algún otro reactivo.
 M  |
1. En el laboratorio a partir
de sus diferentes
componentes.

2. A partir de productos en
polvo deshidratados
comerciales.

3. Pueden adquirirse
medios listos para su Figura 2. Frascos de medio de cultivo
uso. deshidratado marca p FCO
M  |
Antes de preparar un medio de cultivo
debe tomarse en cuenta ciertas
consideraciones para asegurar la calidad de
éste, que será el ³alimento´ para que los
microorganismos crezcan y reproduzcan
adecuadamente y no sufran mutaciones
durante este proceso, algunas
recomendaciones son las siguientes.
á
Ñ Los medios de cultivo, deben prepararse,
almacenarse y utilizarse de acuerdo con un
procedimiento documentado (PNO).
Ñ Calidad del Agua
Ñ Recipiente
Ñ Homogeneización del |edio
Ñ Calentamiento del medio (cuando aplique)
Ñ pH del medio de cultivo
Ñ Almacenamiento.
 M M  |

ÑEn dicho procedimiento debe contener una
descripción del equipamiento necesario.

ÑEl laboratorio debe colocar una etiqueta

indicando la identificación y otros datos en los
medios de cultivo y reactivos.

Ñpebe existir una bitácora de preparación de

medios de cultivo.

Para la preparación de medios debe usarse agua
destilada que haya sido sometida a controles
periódicos que aseguren su calidad.

Controles periódicos:

-Conductividad.
- pH
- Contaminación microbiana
- Libre de sustancias bactericidas, inhibidoras o
interferentes.
-Se debe llevar un registro actualizado de los
mismos.
á
D El recipiente dónde se prepara y almacena el
medio debe ser inerte.

Ñ peben ser suficientemente grandes para que

el medio de cultivo pueda ser agitado con
facilidad y concienzudamente, de ser posible
el volumen de medio no debe sobrepasar 2/3
del recipiente
  |
Ñ Al medio de cultivo
deshidratado y
pesado se añade
aproximadamente la
mitad del volumen de
agua necesaria para
su preparación y se
agita suficientemente
para conseguir una
suspensión
homogénea.
Figura 3. |atraz Erlenmeyer con
medio de cultivo
Agitación adecuada
|

aodo tipo de
medio de cultivo es
sensible al
calentamiento. Por
este motivo no debe
calentarse mas de lo
estrictamente
necesario.

Figura 4. Calentamiento y agitación

pe medio de cultivo
 Los medio de
cultivo son calentados
por que tienen agar y
gelatina y se necesita
conseguir disolución,
se debe calentar a
baño maría o en la
autoclave sin presión.

Figura 5. Esquema de Autoclave

 Se alcanza la
disolución completa
cuando al agitar el
recipiente, el medio de
cultivo no se adhiere a
la pared interna del
recipiente ninguna
partícula de agar, la
solución resbala
libremente y la solución
es traslucida.
Figura 6. |atraces con medio de
Cultivo, nótese lo traslucido
de éstos.
 
Se debe tomar el pH del medio antes y
después de esterilizar, Este debe corresponder
al reportado en el marbete del frasco, antes de
ser esterilizado; de no ser así se puede ajustar
con soluciones 1| de NaOH ó 1 | de HCl,
según se requiera.

El pH debe ser el adecuado para el

crecimiento óptimo del los microorganismos y
para asegurar la funcionalidad del medio.
  

Los medios de cultivo pueden esterilizarse

por calor húmedo.

El calor húmedo comprende métodos de

esterilización por vapor a presión (autoclave),
la tindalización o esterilización fraccionada, el
agua hirviente y la pasteurización.


pebe determinarse y verificarse el

periodo de validez de los medio preparados
en las condiciones de conservación
especificadas.

Se debe observar cambio del color,

evaporación, la deshidratación o el
crecimiento microbiano.

En general los medios
preparados se
almacenan:
D En refrigeración no
más de tres meses
D A temperatura
ambiente no más de
un mes en
condiciones que
impidan que su
composición sea
modificada.
Figura 7. Almacenamiento de medios de
Cultivo en frascos adecuados.
 |



aodos los medios deben ser validados antes de su

utilización.

Se evalúa utilizando criterios objetivos del medio

respecto a:
D El crecimiento de los microorganismos de interés
(Promoción)
D La inhibición de los microorganismos no deseados
tiene que ser cuantitativa. (testigo +/-)
D Los atributos (por ejemplo: Propiedades físicas y
bioquímicas).

Parte de esa validación es provista por las

especificaciones de calidad del proveedor.
á 
Ñ |adigan, |. a., J. |. |artinko y J. Parker. 2004.



       10ª edición.
Prentice Hall. España.
Ñ Norma SO/aS 11133-2:2000
Ñ Saucedo J., Gónzalez O.,   2006    
      
     

   Facultad de Estudios superiores Zaragoza,
UNA|. |éxico.
Ñ |erck. 1994.         
parmstadt, Alemania.
Ñ |edios naturales o complejos: constituidos por
sustancias complejas de origen animal o vegetal,las
que son usualmente complementadas por la adición
de minerales y otras sustancias. En ellos no se
conocen todos los componentes ni las cantidades
exactas presentes de cada uno de ellos.

Ñ |edios definidos o sintéticos: son los medios que

tienen una composición química definida
cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se
usan en trabajos de investigación.
Ñ |edios de enriquecimiento: Favorecen el
crecimiento de un tipo de microorganismo en
particular. Han sido adicionados
complementados con algunos líquidos
corporales, vitaminas, aminoácidos, etc.
Ejemplo: Agar sangre, agar chocolate.
Ñ |edios selectivos: Son parecidos a los de
enriquecimiento, se les ha agregado ciertos
reactivos que impiden el crecimiento de
algunas bacterias, permitiendo el aislamiento
de algunas otras. Ejemplo: E|B, Sal y
manitol, Agar      
Ñ |edios diferenciales: Son medios que
contienen indicadores coloreados ácido-
base. Permiten revelar características
fisiológicas de los microorganismos. Ejemplo
Agar E|B, |c Conkey, etc.
 |  



El laboratorio debe registrar la fecha :
D pe recepción
D pe apertura del envase.
D pe caducidad

2. El almacenamiento debe realizarse en las condiciones

apropiadas.
1. Envases: deben estar herméticamente cerrados.
(especialmente medios deshidratados)
2. No deben utilizarse medios deshidratados que
presenten apelmazamiento o un cambio de color.