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bacterianos
QBP. DOMINGO SANCHEZ FRANCIA
HOSPITAL DEL NIÑO MORELENSE
CUERNAVACA MORELOS.
I.-Puntos a tomar en cuenta
en las marchas bacterianas
1.-Toma de muestra
2.-Transporte de la muestra
1. Simples: 2. Diferenciales:
• Azul de metileno • Gram
• Ziehl-Neelsen
• Fucsina fenicada
• Tan Thiam-Hok
• Verde de malaquita
• Machiavello
• Jiménez
VIII.- Tinciones Estructurales:
a) Flagelos
- Rhodes
- Tribondeau
- Leifson
b) Esporas
- Shaeffer-fulton
- Moeller
c) Cápsula
- Hiss
- Tinta china
d) Gránulos metacromáticos
- Ernst-Neisser
- Albert
- Loeffler
Tinción Gram
+ + + + + + + + – – – – –
(cultivo fresco)
Forma coco coco coco coco bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón coco
Crecimiento
+ + + + + – + + + + + + +
aerobio
Crecimiento
– + + + + + + – – – + + –
anaerobio
Esporas – – – – – + + + – – – – –
Catalasa + + – – – – + + + + + + +
Oxidasa + + – + +
Fermentación de
glucosa a acido – + + + + + (o –) + – – – + + –
o a acido+gas
O/F – O F F O
Micrococcus X
Staphylococcus X
Streptococcus X
Lactococcus X
Enterococcus X
Leuconostoc X
Pediococcus X X
Aerococcus X
Lactobacillus X
Clostridium X
Bacillus X X
Alcaligenes X
Pseudomonas X
Enterobacterias X
Aeromonas X
Chromobacteriu
X
m
Neisseria X
IX .-Ca ra cte rísti ca s
fe no tip ic as p ara la
id entifica ció n ba cte ria na
A).- Criterios Generales:
• Reacción de catalasa
• Reacción de oxidasa
• Prueba de movilidad
• Pruebas de O/F de carbohidratos
• Presencia de Esporas
• Tinción de Ziehel Neelsen
• Tinción de Gram
XI.-Requerimientos nutricionales
1.-Conocer que suplementos nutricionales que
requiere MO para crecer óptimamente.
2.-Aerobios.
3.-Microaerofílicos.
4.-Anaerobios facultativos.
5.-Anaerobios estrictos
XIII.- Temperatura
1.-Conocer la temperatura ideal para su
desarrollo.
Izquierda tubo de OF
inoculado con un organismo
de metabolismo no
fermentador y no oxidativo
para la glucosa.
b) O.N.P.G.
Pru eba de la ONPG (o-
Nitrof eni l- β- D-
ga lactopi ranósid o)
• Es un compuesto estructuralmente
similar a la lactosa, excepto en que la
glucosa ha sido reemplazada por un
grupo o-nitrofenilo.
C).- Vibrios.
1. Enteropatógena EPEC
2. Enterohemorrágica EHEC
3. Enterotoxigénica ETEC
4. Enteroagregativa EaggEC
5. Enteroadherente difusa DAEC
6. Enteroinvasiva EIEC
• Algunas especies de Campylobacter
y Helicobacter se incluyen como
causantes de enfermedad en el
aparato gastrointestinal, al igual que
Vibrio, Aeromonas y Plesiomonas.
Recolección de la muestra
• Las muestras se recolectan directamente en un frasco
limpio y de boca ancha con tapa hermética, al inicio de
la enfermedad y preferentemente antes de iniciar
tratamiento antimicrobiano.
(MEDIO DE
TRANSPORTE
CARY- BLAIR)
INCUBAR INCUBAR
INCUBAR
37ºC, 24h 37ºC, 8 – 12 h
37ºC, 24h
OX(+ ) OX(+ ó -)
OX(-)
OF: (+/+) OF: (+/-)
OF: (+/+) AGAR NUTRITIVO
OF: (-/-)
Oxidasa
OF
Pbas. Bioquímicas:
E.coli patógenas KIA,ONPG,LD, OD, CIT,
Pbas. Bioquímicas: Shigella sp SIM MR-VP, UREA, FD
KIA,ONPG,LD, OD, Salmonella spp Serotipificar
CIT, SIM MR-VP, Yersinia enterocolitica AB CLSI
UREA, FD Plesiomonas
Serotipificar Aeromonas
AB CLSI
HISOPADO
RECTAL CARY
BLAIR
2.-Tracto genitourinario
• I.V.U : Urocultivo
DILUCIÓN 1:100
0.1 ml ORINA+9.9 ml SS ESTERIL Tinción de Gram
Mezclar
Seleccionar medios
de cultivo primarios
GS de carnero al 5%
Sembrar por estría cruzada
Picar el medio 3-5 ocasiones
Incubar en CO2 al 3%
24 – 48 hrs 37ºC
CGP
Cadenas
Col βhem.
Cat(-)
Seroagrupar preferentemente
Realizar susceptibilidad (CLSI)
B).- Cultivo nasal
• Es la muestra indicada para la investigación de
Bordetella pertussis y de otros patógenos
oportunistas (S. pneumoniae, H. influenzae, Neisseria
meningitidis).
GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dextrosa Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC
CGP racimos
Col. β óγhem CGP BGN BGN LAC (+ ó -) INV. Hongos más comunes
Cat(+) Cat(-) Pleomórficos En pacientes
Furazolidona(S) F(V) F(X) Inmunodeprimidos
Oxidasa (-)
Agar Nutritivo
OX
Coag(+) DCGP OF
F(V) (+) F(V) (+)
Manitol(+) Col.αhem Pigmentos
F(X) (+) F(X) (-)
Lac(+) Taxo P(S) IND IND
16mm ORN ORN
OPT 5ug URE URE
Sol. en bilis (+) OX(+ ó -)
OX(-)
OF: (+/-)
OF: (+/+)
OF: (-/-)
Staphylococcus aureus
AB. CLSI S. pneumoniae
Serotipificar H. parainfluenzae
Solo en manejadores AB. CLSI H. influenzae Serotipificar FENOTIPO
De alimentos
Serotipificar AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
AB CLSI Citrato,LD,OD,SIM,
URE, FD
K. Rhinoscleromatis
BGNF
K. ozaenae
C).- Otitis media
• Se define otitis media • Los dos principales
como la presencia de patógenos son:
exudado en la cavidad
media del oído. • Cocos gram positivos como:
Streptococcus pneumoniae,
Streptococcus pyogenes,
• Los lactantes y niños Staphylococcus aureus.
pequeños son los más
propensos a padecer • Bacilos Gram negativos
otitis media, como: E. coli o
Pseudomonas
aeruginosa,Haemophilus
influenzae y anaerobios
Cultivo de secreción de oído
• El Cultivo bacteriológico de aspirado de oído
medio adecuadamente recolectados, permite
determinar cuáles son los microorganismos
responsables de la otitis media aguda.
GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dextrosa Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC
K. Rhinoscleromatis
BGNF
K. ozaenae
D).-Cultivo de expectoración
• Las infecciones del tracto respiratorio inferior
son de las más frecuentes dentro del
conjunto de las infecciones,tanto entre las
adquiridas en el ambiente comunitario como
en el medio nosocomial.
6.1.2 Infecciones de vías respiratorias bajas. CIE-10 (J12-J18, J20, J86.9, J98.5).
6.1.2.1 Neumonía. CIE-10 (J12-J18).
Cuatro criterios hacen el diagnóstico.
Criterios 6.1.2.1.4 y 6.1.2.1.5
son suficientes para el diagnóstico de neumonía.
6.1.2.1.1 Fiebre, hipotermia o distermia.
6.1.2.1.2 Tos.
6.1.2.1.3 Esputo purulento o drenaje purulento a través de cánula endotraqueal
que al examen microscópico en seco débil muestra <10 células epiteliales
y > 20 leucocitos por campo.
6.1.2.1.4 Signos clínicos de infección de vías aéreas inferiores.
6.1.2.1.5 Radiografía de tórax compatible con neumonía.
6.1.2.1.6 Identificación de microorganismo patógeno en esputo, secreción
endotraqueal o hemocultivo.
Muestra de Expectoración
Gram: Criterios de
Murray-Bartlett
PMN =>25 CE <=10
GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dextrosa Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC
CGP racimos
Col. β óγhem CGP BGN BGN LAC (+ ó -) INV. Hongos más comunes
Cat(+) Cat(-) Pleomórficos
Furazolidona(S) F(V) F(X)
Oxidasa (-)
Agar Nutritivo
OX
Coag(+) DCGP F(V) (+) OF
F(V) (+)
Manitol(+) Col.αhem F(X) (-) Pigmentos
F(X) (+)
Lac(+) Taxo P(S) IND IND
16mm ORN ORN
OPT 5ug URE URE
Sol. en bilis (+) OX(+ ó -)
OX(-) OX(+)
OF: (+/-)
OF: (+/+) OF: (+/+)
OF: (-/-)
Staphylococcus aureus
AB. CLSI
S. pneumoniae
Serotipificar H. parainfluenzae
AB. CLSI H. influenzae Serotipificar FENOTIPO
Serotipificar AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
Coag(-) AB CLSI Citrato,LD,OD,SIM,
Manitol (V) URE, FD
Lac(V)
Gram: Criterios de
Murray-Bartlett
PMN =>25 CE <=10
Presencia de cel. ciliadas
GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dextrosa Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC
CGP racimos
Col. β óγhem CGP BGN BGN LAC (+ ó -) INV. Hongos más comunes
Cat(+) Cat(-) Pleomórficos
Furazolidona(S) F(V) F(X)
Oxidasa (-)
Agar Nutritivo
OX
Coag(+) DCGP F(V) (+) OF
F(V) (+)
Manitol(+) Col.αhem F(X) (-) Pigmentos
F(X) (+)
Lac(+) Taxo P(S) IND IND
16mm ORN ORN
OPT 5ug URE URE
Sol. en bilis (+) OX(+ ó -)
OX(-) OX(+)
OF: (+/-)
OF: (+/+) OF: (+/+)
OF: (-/-)
Staphylococcus aureus
AB. CLSI
S. pneumoniae
Serotipificar H. parainfluenzae
AB. CLSI H. influenzae Serotipificar FENOTIPO
Serotipificar AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
Coag(-) AB CLSI Citrato,LD,OD,SIM,
Manitol (V) URE, FD
Lac(V)
• LCR
• Sangre
• Médula ósea
• Líquidos diversos:
L. Pleural
L. Sinovial
L.Peritonial
4.- L íq uid o c efa lo rraquíd eo
(L CR)
• El líquido cefalorraquídeo (LCR) es la muestra clínica
representativa cuando hay sospecha de meningitis
séptica.
GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dex. Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC
S. pneumoniae H. parainfluenzae
H. influenzae Serotipificar
Serotipificar
Serotipificar AB CLSI FENOTIPO
Coag(-) AB. CLSI
AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
Manitol (V)
Citrato,LD,OD,SIM,
Lac(V)
URE, FD
• El estudio bacteriológico de la
sangre debe realizarse
principalmente en pacientes
con neumonía, meningitis o
fiebre de origen desconocido,
entre otros síndromes.
DEFINICION
Bacteriemia: es la presencia de
bacterias viables en el torrente
sanguíneo, evidenciada por la
obtención de cultivos en sangre, sea
por punción venosa o por aspiración a
través de un catéter intravascular.
DEFINICION (NOM-045-SSA2–2005 )
Este diagnóstico se establece en un paciente con
fiebre, hipotermia o distermia con hemocultivo
positivo.
RHOVE-DGE
Material necesario
• Guantes, jeringuilla, aguja, ligadura,
torundas, contenedor de
punzocortantes, botella de cultivo,
tintura de yodo, alcohol isopropílico al
70%.
Monitoreo de producción
ó consumo de gas,
hemólisis y turbidez
Durante las 6 -18hrs posteriores
Incubando la botella 35ºC
Monitoreo de producción
ó consumo de gas,
hemólisis y turbidez
Diariamente si se mantiene negativo
ID. Bacteriana
AB CLSI
Médula ósea
Inoculación de la botella
Incubar a 35ºC
Monitoreo de producción
ó consumo de gas,
hemólisis y turbidez
Durante las 6 -18hrs posteriores
Incubando la botella 35ºC
Monitoreo de producción
ó consumo de gas,
hemólisis y turbidez
Diariamente si se mantiene negativo
ID. Bacteriana
AB CLSI
LIQUIDOS
Centrifugar
3000 RMP/15min
SEDIMENTO:
Tinciones
Gram
Ziehl Neelsen
GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dex. Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC
S. pneumoniae H. parainfluenzae
H. influenzae Serotipificar
Serotipificar
Serotipificar AB CLSI FENOTIPO
Coag(-) AB. CLSI
AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
Manitol (V)
Citrato,LD,OD,SIM,
Lac(V)
URE, FD
• Cultivo de secreción de
herida
• Cultivo de absceso
GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dex. Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC
H. aphrophilus
E. corrodens Serotipificar
Serotipificar AB FENOTIPO
Coag(-) AB KIA, ONPG,RM-VP
Manitol (V)
Citrato,LD,OD,SIM,
Lac(V)
URE, FD
AGAR NUTRTIVO
Caldo BHI
Rodarlo sobre toda la
Superficie del agar
Incubar de 8 a 12 Hrs
Incubar por 24 -48hrs Hrs 35 – 37ºC
35 – 37ºC
Agar Nutritivo
35 - 37ºC x 24 – 48 hrs
COCOS GRAM POSITIVOS
BACILOS GRAM NEGATIVOS
BGN
AGAR NUTRITIVO