TÉCNICAS DE

CÉLULAS TOTALES INTEGRANTES

Alan Enrique Alonzo Patiño

Aldrid Manuel Carrillo Mancera

Carlos Daniel Cortes Figueroa

Jocelyn Karina González Rodríguez

Karla Pamela Hernández Morales

Sofía Marcela Hernández Sánchez

Ruth Laguna Arriaga

Cristina Alejandra Ruteaga Ramírez

Profesor: Francisco Javier Yépez Ramírez

INTRODUCCIÓN
 Cuantificación de biomasa
La determinación de la biomasa es una de
las variables mas importantes de un
bioproceso, ya que la cuantificación de la
biomasa ofrece valores de referencia de la
eficiencia del bioproceso.
Se pueden cuantificar mediante diversas
variables:
• Taza de producción
• Consumo de nutrientes
• Balance de masas
 Clasificación de los métodos para la
cuantificación de biomasa
Directos Indirectos
• Se basa en la cuantificación directa • Se basan en la determinación de
del microorganismo, puede ser algún componente celular especifico,
mediante conteo en cámara, en la cuantificación de alguna
gravimetría, epiflourescencia, actividad enzimática, en la taza de
espectrofotometría, conteo en consumo de un sustrato o la
placa, numero mas probable, etc. formación de algún producto
Conteo de microorganismos totales
Estos métodos se basan en poner
en evidencia la presencia de los
microorganismos vivos y muertos
los cuales no se pueden distinguir.
Son rápidos pero se requiere contar
en algunos casos con curvas de
calibración.
MÉTODO DE BREED
(CUENTA DIRECTA)
• Este método de Conteo Directo al Microscopio(CMD) es
usado para estimar el grado de contaminación bacteriano.
 Procedimiento
• En un portaobjetos limpio y desengrasado, marcar un área de 2 cm2, e
invertir el portaobjetos.
• Tomar con una pipeta estéril, 0.01 mL de muestra y transferir al
portaobjetos
• Extender en el área marcada de 2 cm2 con el asa.
• Dejar secar.
• Realizar tinción de Gram o tinción con azul de metileno
Determinación del área del campo microscópico

• Colocar en la platina del microscopio el objetivo micrométrico.

• Medir el diámetro del campo microscópico. La reglilla del objetivo
micrométrico está dividida en espacios de 10 m (0.01 mm ó 0.001 cm).
• Determinar el área del campo microscópico aplicando la siguiente fórmula:
Número de microorganismos por campo microscópico

• Colocar el microscopio la preparación previamente teñida y contar el

número de microorganismos que se observan en un campo
microscópico. Cambiar el campo microscópico y contar nuevamente el
número de microorganismos. Repetir hasta registrar 10 campos
microscópicos.
• Determinación del número de campos microscópicos
CÁMARA DE NEUBAUER
 Cámara de Neubauer
Es un portaobjetos de cristal grueso con el tamaño de un portaobjetos
de vidrio. (30 x 70 mm y 4 mm de espesor). Se usa para el recuento
celular en la determinación de la concentración de células en una
suspensión. También se le conoce como Hemocitómetro, porque se
pueden contar las células rojas y blancas.
 Aplicaciones
• Recuento de glóbulos.
• El conteo de espermatozoides.
• Cultivo celular.
• Elaboración de la cerveza.
• Procesamiento celular para el procesamiento posterior.
• Medición de tamaño de celda.
Dimensiones
 Procedimiento

 Coloque el cubreobjetos sobre el área gobernada.

 Aplique la muestra entre cubreobjetos y cámara de Neubauer.
 Observar bajo el microscopio.
 Reglas del Recuento
• Siga este patrón cuando un mayor número de células están ahí
• No contar las células que tocan las líneas derecho e inferior
 Fórmula
•Número
  de Esporas por mL=
Ejemplo:
Para una dilución 1: 10. Dilución = 0,1 Para un 1: 100. Dilución = 0,01
1 mm longitud ×1 mm ancho ×0.1 mm
profundidad = 100 nano litros
100 nano litros = 0,0001 mL
1/0.0001 = 10,000
Características Específicas
Ventajas:
• Rápido
• Exacto
• Barato
• Fácil 
Desventajas:
• No se puede distinguir las células vivas y muertas.
• Partículas similares también se cuentan
CÁMARA PETROFF HAUSSER
 ¿Que es?
• Es una cámara de recuento
• Recuento microscópico de partículas
• Es de manera directa
• Las cámaras más utilizadas son las de Hawksley y la de Petroff-Hausser. La
primera tiene la ventaja que puede ser utilizada con objetivos de inmersión,
aunque la mayoría de los recuentos se realizan con objetivos secos. Una de las
mayores ventajas del recuento microscópico es brindar información adicional
sobre el tamaño y la morfología de los objetos contados.
• Se utiliza para medición del crecimiento microbiano
Cámaras de recuento
• Son porta excavados modificados sobre cuya
superficie esta marcada una rejilla con pequeños
cuadros de área conocida.
• Se utilizan para contar el numero de células por
unidad de volumen de suspensiones bacterianas
 Utilidad
• Esta se utiliza para contar
bacterias. La excavación
mide 0.02mm de
profundidad y esta dividida
en 25 cuadros grandes,
subdivididos a su ves en 16
pequeños un total de 400
celdillas en un mm²
 Como se realiza
• La muestra, una vez dispensada entre el porta y el cubre, se deja
reposar sobre la plataforma del microscopio durante unos minutos, y se
cuenta el número de células en varias celdillas (normalmente en 16,
equivalentes a uno de los cuadros grandes). Se anota el número n de
células observadas en esas 16 celdillas. Entonces, la concentración
celular es fácil de establecer:
• n x 25 x 50 x 1000 = concentración en células/ml.
 CUANTIFICACIÓN DE
BIOMASA POR PROTEÍNA
• La proteína esta relacionada con
el crecimiento de la bacteria, por
lo cual se genera un incremento
en la cantidad de proteína en el
compuesto celular lo que indica
que hay mayor concentración
celular.
 Método de Lowry
• Es un método colorímetro de valoración cuantitativa de las proteínas, en la cual
a la muestra se le añade un reactivo que forma un complejo coloreado con las
proteínas siendo la intensidad de color proporcional a la concentración de
proteínas de acuerdo con la ley de Lambert- Beer.
 Preparar una solución patrón de albúmina y las
soluciones a analizar.

Se prepara un reactivo a partir de las soluciones de

Na2CO3 al 2%, NaOH 0,1 M

Se añade la solución en las muestras y se deja

reposar por 15 min.

Añadir reactivo de Folin 1:4

Imagen. Curva de soluciones estándar para la evaluación de
proteínas por el método de Lowry

Leer absorbancia a 750 nm

 CUANTIFICACIÓN DE
BIOMASA POR PESO SECO
La biomasa es una de las variables más importantes de un
bioproceso, ya que su determinación nos lleva a la
comprensión de la eficiencia del mismo.
Este se trata de una variable clave para establecer:

Tasas de
producción

Para la determinación hay métodos

directos e indirectos. Consumo
Balance de
de
masas
nutrientes
 Métodos directos
La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede
medirse en términos de peso seco o húmedo.

Peso seco
Peso húmedo

Centrifugación,
lavado y
desecación
Centrifugación /
pesado de un
volumen de cultivo
Filtración en filtros
gravimétricos, y
seca hasta peso
constante
 Métodos indirectos
Estiman algún componente celular o alguna actividad metabólica
específica.
– No requieren el examen visual de los organismos ni su
incubación.
Desventajas

MO Polímeros
Materia
Material
muertosextracelula
y orgánica
inerte
activos resabsorbida

No puede aplicarse cuando los sustratos a degradar son insolubles.

Técnica
BIOMASA MICROBIANA
(ESCALA MCFARLAND)
 Escala de MacFarland

Patrones de turbidez en la preparación de

suspensiones de microorganismos

Estándares= escala de MacFarland (cantidad

conocida de bacterias)
Comparar la turbidez del medio que
contiene las bacterias en suspensión
con unos estándares de turbidez.

H₂SO₄ + BaCl2 → BaSO4 + 2HCl

MEDICIÓN DE LOS GRADOS BRIX
Brix o contenido total de sólidos solubles
• La escala Brix se utiliza en el sector
de alimentos, para medir la
cantidad aproximada de azúcares
en zumos de fruta, vino o líquidos
procesados dentro de la industria
agroalimentaria ya que en realidad
lo que se determina es el contenido
de sólidos solubles totales.
• 1 grado Brix (°Bx) = 1 g de sacarosa  / 
en 100 g de solución
Se le conoce como
azúcares a los glúcidos que
generalmente tienen sabor
dulce, como son los
diferentes monosacáridos, 
disacáridos y polisacáridos.
Un solido soluble es aquel que
tiende a formar un sistema
homogéneo con otros sólidos.
Como por ejemplo el azúcar.
¿Con que se miden los grados Brix?

Una especie de microscopio

llamado refractómetro es el aparato que se
utiliza para medir los grados Brix en las frutas
en conserva. Este aparato mide la refracción de
la luz en el jugo de la fruta, de forma
que cuanto mayor es la cantidad de azúcar
disuelta, mayor es también el ángulo de
refracción.

• Ejemplo: una solución de 25 °Bx tiene 25 g de azúcar (sacarosa) por

100 g de líquido
Refractómetros
 Referencias
• Martínez, Y. (2012). Determinación de biomasa . 19 de Junio del 2019, de Universidad Nacional
de Trujillo. Sitio web: https://es.scribd.com/doc/95027430/Determinacion-de-Biomasa
• Naga, M. (s/f).La cuantificación de la células bacterianas o esporas de hongos mediante el uso
de cámara de Neubauer. Universidad estatal amazónica, Ecuador. Sitio web: http://
repositorio.educacionsuperior.gob.ec/bitstream/28000/4816/10/Anexo%2010.pdf
• Desconocido . (2011). Grados Brix y la alimentación del cultivo. 19 de junio 2019 , de
Agromática. Sitio web: https://www.agromatica.es/los-grados-brix-en-la-agricultura-
moderna/
• Desconocido . (2018). ¿Qué son los grados Brix?. 19 de junio de 2019 , de AGRICULTORERS
Sitio web: https://agriculturers.com/que-son-los-grados-brix/
• Morales, J. (2016). Métodos de crecimiento microbiano. Universidad Juárez Autónoma de
Tabasco.