Centro de Investigación y Estudios Avanzados del IPN

Departamento de Biomedicina Molecular

 Antecedentes
Modelo de autoinmunidad

Establecer inflamación

IL23

Sistema inmune innato

Psoriasis, Artritis psoriasica

y EC.
Ustekinumab, anti-P40.

SIMULA esclerosis múltiple humana

Figura 1: Las células T CD4 + Il23ra - / -  no se acumulan en el SNC inflamado.

1 cola flácida
IL-23ra -/-
2 reflejo de enderezamiento deteriorado y
debilidad de las extremidades posteriores
3, parálisis parcial de las extremidades
posteriores
4 parálisis completa de las extremidades
posteriores
EAE
*MOG 5,parálisis de las extremidades posteriores con
*M. tuerculosis parálisis parcial de las extremidades anteriores
*Toxina pertusis 6 moribundo.

IL-23 necesaria para la señalización in vivo

( a ) Puntuaciones clínicas de los ratones Il23ra - / - , Il23ra +/− e Il23ra + / + después

de la inducción de EAE.

MOG:glicoproteína oligodendrocitica de mielina  

Evaluar el efecto de IL-23 en el SNC

b ) Puntuaciones clínicas de quimeras de médula ósea mixtas después

de la inducción de EAE. La clave indica genotipos de médula ósea del
donante (WT, tipo salvaje)
 Evaluación de reclutamiento, 11 días después

9 días 11 días
c ) Citometría de flujo de células CD4 + obtenidas del SNC de quimeras de médula ósea mixtas (genotipo, gráfico anterior) 11 días después de la inducción de EAE.
d ) Relación de Células T CD4 + Il23ra - / - (CD45.1 - ) a tipo salvaje (CD45.1 + ) en el SNC de quimeras de médula ósea mixtas (tiempo relativo a EAE, eje horizontal
e ) Número absoluto de células T CD4 + en el SNC el día 9 (antes del inicio) y el día 11 (inicio) de EAE
Figura 2. Las células T Il23ra - / - tienen una producción de IL-17 más baja
después del priming de las células T.

¿Presentan otros defectos las células del SNC il23ra-/-? Medición de citocinas en respuesta a estímulo
Medio
GolgiPlug
MOG 20 horas
0
Quimera EAE Células mononucleares SNC Citometría de flujo
11 d. después inmunización
MOG + IL23
In vitro

(MOG) glicoproteína de mielina de oligodendrocito

(GolgiPlug) inhibidor transporte proteínas
IL23 promueve la diferenciación a Th17 y no así para la respuesta Th1

IL-23 a cultivos Células WT CD4+ IL-17+ Células Th17+ Ganglios linfáticos

Producción por WT
Producción de IL-17 en ganglios afectada
La señalización es en etapas tempranas diferenciación
Figura 3: La activación temprana de las células Th-17 es normal,
pero las respuestas efectoras se ven afectadas por las células
T IL23ra - / -
Identificar directamente las células específicas de antígeno que responden in vivo Capacidad funcional
Ganglio
LT CD4+ IL-23ra-/-

Receptor transgénico
especifico para OT-II
de LT CD4+

LT CD4+ IL-23ra-/- OT-II

LT CD4+ IL-23ra-/- OT-II

(CD45.1)
CD45.2

a ) Frecuencia de células T de tipo salvaje o Il23ra - / - CD45.1 + CD4 + OT-II después de la transferencia a ratones receptores de tipo salvaje inmunizados con
OVA (323–339), presentados como el porcentaje del total de CD4 + T células.
b) Reacción DTH en receptores inmunizados de tipo salvaje de células de tipo salvaje o Il23ra - / - OT-II, presentado como el aumento en el grosor del pie en
relación con el pie retado con solución salina contralateral
 Producción de IL-17

Ganglios

 c ) Citometría de flujo del curso temporal de células OT-II productoras de IL-17 intracelular a partir del drenaje de los ganglios linfáticos después
de la estimulación ex vivo con forbol 12-miristato 13-acetato e ionomicina
d ) Expresión intracelular de Foxp3 en células OT-II evaluadas en los días 5 y 7 después de la inmunización.
 ¿IL-23 puede inducir la fosforilación de STAT3
en el desarrollo de células Th -17 in vivo?

No se perdió STAT3

Células de Ganglios

e ) Citometría de flujo de STAT3 fosforilado (p-STAT3) en células OT-II después de 15 minutos de estimulación con IL-23 o IL-6 a los 4 días después de la inmunización. Los números
en las áreas delineadas indican el porcentaje de células CD45.1 + con STAT3 fosforilado
f ) Citometría de flujo de IL-17 estimulada por IL-23 en células CD4 + después de la infección con retroviros de control (Control) o retrovirus que expresa la recombinasa Cre (Cre)
para mediar la eliminación de Stat3 flanqueado por Plox
Figura 4. La diferenciación completa de las células efectoras TH-17 requiere
IL 23R in vivo.

¿Marcadores tempranos de activación células Th?

Inmunización con OVA

Interacción
Supervivencia
célula célula,
CD44 hi células vírgenes
adhesión y IL-7Ra Progresión de
migración
maduración
WT Receptor
Il-23ra-/- OTII CD62Llow selectina, Inmunización con OVA
adhesión

Quimiciona 7 días
CCR7low ubiquitinacion
proteínas en Células nodos linfáticos:
nucleo WT, Il-23ra-/- OTII

Marcadores RT-PCR

Células OT-II
Figura 5: IL-23 promueve el perfil de citocinas efectoras de T H -17

La expresión de IL-2 en células T H -17 que se desarrollan in vivo no se ha caracterizado

bienc
¿En sangre?

Sangre
Ganglio
Inmunización OVA
5 días dsps.
Figura 6. IL-23R no se requiere para el desarrollo de células efectoras TH1

T.gondii

WT
IL23RA-/-
Figura 7: Se requiere señalización de IL-23R temprana durante la diferenciación
Th-17
¿En qué punto del proceso de diferenciación a
Th-7 se requiere IL-23?

Mab neutralizador de IL-23R

Inmunización OVA
Ratón SJL

Ganglio Sangre
¿IL-23 puede impulsar la diferenciación de las células
efectoras durante el reconocimiento de antígeno en
los tejidos?

IL-23p19
Células OT-II de LT
deficientes
CD4+
( Il23a - / - )

d ) Respuesta de DTH en almohadillas de pie de receptores de tipo salvaje y deficientes en p19 (p19-KO) de células OT-II de tipo salvaje a los 10 días
después de la inmunización con OVA (323–339)
Figura 8. La proliferación de células IL 17+ es menor en ausencia de IL-23R.

nodulos linfáticos flow Tinción

10 d despues inmunización cytometry, intracelular
nodulos
linfáticos