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REPLICACIÓN

DEL DNA
III. DIRECCIÓN DE LA
SÍNTESIS
◦ ¿Cuál es la dirección de la SÍNTESIS?

5’ 3’
Siempre
IV. TIPOS DE
POLIMERASAS
◦ ¿Cuáles son los tipos de POLIMERASAS?
DNA polimerasas en procariotas (E. coli)

Actividades DNA Pol DNA Pol II DNA Pol III


Enzimáticas I
Polimerasa 5’3’ ✔️ ✔️ ✔️
3’-exonucleasa ✔️ ✔️ ✔️
5’- exonucleasa ✔️ ✖️ ✖️

Existen DNA Pol I-V


DNA Pol III – realiza la mayor parte de la replicación.
Los centros activos polimerasa y exonucleasa son diferentes.
Sentido de la polimerización es
◦ ¿Qué funciones realizan las DNA POLIMERASAS? 5’ 3’
1. Actividad polimerasa = ELONGACIÓN. Sentido de la correción es
Dominio C terminal 3’ 5’
2. Actividad 3’-exonucleasa = CORRECCIÓN DE PRUEBAS
Dominio central
3. Actividad 5’-exonucleasa = CORRECCIÓN DE CEBADORES
Dominio N-terminal

Las DNA polimerasas corrigen sus propios errores.


Actividad 3’ - DNA pol-I, DNA pol-II, DNA pol-III
exonucleasa
(Exonucleasa 3’ 5’)
actividad correctora de pruebas
o exonucleasa revisora
Permite HIDROLIZAR el nucleótido situado en el
extremo 3’ de la hebra de DNA, sólo un nucleótido
cada vez.

Con esta propiedad, mejora la fidelidad de


la replicación, aumentándola entre 102 y 103 Esta eliminación es inmediata, cuando el nucleótido recién
veces sobre la que aporta la incorporación de incorporado por polimerasa es erróneo (no empareja
nucleótidos complementarios por la polimerasa correctamente con el de la hebra molde de DNA).
(que tiene una tasa de error de un nucleótido La polimerasa es así capaz de reconocer el error, detener
por cada 104 o 105). la adición de más nucleótidos y liberar ese último dNMP
mal incorporado.

Los centros activos polimerasa y exonucleasa son diferentes.


DNA pol-I
Actividad 5’ -
exonucleasa
(Exonucleasa 5’ 3’)
Eliminación de cebadores
Actividad de reparación

Permite HIDROLIZAR secuencialmente DNA o RNA


a partir del extremo 5’ de la hebra.

• Papel fundamental en la replicación del DNA procariótico, al


eliminar el RNA cebador y sustituirlo por DNA durante la síntesis
discontinua de la hebra retardada.
• También complementa la actividad 3’-exonucleasa corrigiendo
errores.
• Interviene en la escisión de los dímeros de pirimidina que se
forman por exposición del DNA a luz UV.
• Experimentalmente, se aprovecha la actividad 5’-exonucleasa,
por ejemplo, para la preparación de sondas marcadas.
DNA polimerasas en EUCARIOTAS

Núcleo Núcleo Mitocondria Núcleo Núcleo


Actividades DNA pol DNA pol DNA pol DNA pol DNA pol
Enzimáticas 𝛂 β 𝛄 𝛅 𝜺

Primasa (inicio) ✔️ ✖️ ✖️ ✖️ ✖️
Polimerasa 5’3’ ✔️ ✔️ ✔️ ✔️ ✔️
3’-exonucleasa ✖️ ✖️ ✔️ ✔️ ✔️
5’- exonucleasa ✖️ ✖️ ✖️ ✖️ ✖️
Polimerasa de DNA Gracias a su actividad primasa se encarga de formar un RNA
cebador –necesario para iniciar la replicación– y, por su
DNA pol 𝛂 actividad polimerasa, de la elongación inicial de ese cebador.

Primasa (Polimerasa de RNA)

Esta tarea luego se cede a: DNA pol β

No interviene en replicación,
DNA pol 𝛅 Implicada en la reparación de errores o
responsables de la
daños en el DNA (donde también participan
mayor parte de la
otras polimerasas, incluyendo 𝛅 y 𝜺)
elongación de ambas
DNA pol 𝜺 hebras
Llenan hueco con DNA

cuatro enzimas responsables de la replicación, reparación y


recombinación del DNA nuclear
V. VELOCIDAD DE
REPLICACIÓN
◦ ¿Cuál es la VELOCIDAD DE REPLICACIÓN en PROCARIOTAS?
1,000 nucleótidos/seg.
◦ ¿Porqué en EUCARIOTAS no es tan rápido?
Por la existencia de múltiples orígenes de replicación en cada cromosoma.

Polimerasas de Polimerasas de
MAYOR MENOR
procesividad procesividad
Número de nucleótidos
que son incorporados Intervienen en la Son auxiliares
PROCESIVIDAD a la hebra antes de elongación de las (síntesis y
que la enzima se cadenas de DNA eliminación de
separe del molde. cebadores, su
sustitución por DNA
¿Cómo logran mayor procesividad?
y la reparación).
Por abrazadera deslizante (moléc.
que rodea a cadena de DNA,
evitando que pol se separe)

Un valor elevado de procesividad en una polimerasa es mucho más


importante para la replicación que una velocidad alta de catálisis.
ETAPAS EN EL PROCESO DE
REPLICACIÓN

I. INICIACIÓN
◦ ¿Dónde ocurre la replicación en PROCARIOTAS?
MEMBRANA CELULAR, pues el único cromosoma está anclado a ella en la zona nucleoide

◦ ¿Dónde ocurre la replicación en EUCARIOTAS?


En MATRIZ NUCLEAR. DNA se replica una vez por ciclo, fase S.

◦ ¿Qué es el REPLICÓN?
Unidad funcional de replicación. Es la región de DNA que se replica a partir de cada origen.
 Cada replicón contiene un origen de replicación y se replica mediante dos horquillas.
En Procariotas hay uno.
En Eucariotas hay muchos, sufren replicación simultánea.

Delante de la horquilla
Detrás de la horquilla, deben
de replicación debe
reutilizarse histonas y proteínas
producirse la
no histónicas para la
descondensación de Cr,
reasociación de nucleosomas,
disociación de
volverse a condensar la
nucleosomas y separación
cromatina, etc.
de histonas y proteínas no
histónicas.
La definición de los puntos de inicio depende de
dos regiones en el DNA:

El REPLICADOR El ORIGEN

Punto donde
Incluye zonas donde la doble hélice puede comienza la
Zona que determina apertura desenrollarse con facilidad (secuencias ricas en
síntesis sobre el
inicial de la doble hebra. pares AT) y otras que interaccionan con
proteínas iniciadoras. molde de la
molécula abierta.

En eucariotas, proteínas iniciadoras


La unión de estas proteínas
se unen a regiones palindrómicas que
provoca flexión de DNA
pueden formar estructuras
(tensión superhelicoidal
cruciformes  reducen tensión de
negativa)  separación de las
superenrollamiento  facilitan
hebras.
apertura de doble hélice.
◦ En PROCARIOTAS el origen de la

replicación es ÚNICO: oriC


ETAPAS EN EL PROCESO DE
REPLICACIÓN

II. ELONGACIÓN
Conexión entre la iniciación y la elongación:
proteínas necesarias

1. Se forma complejo de
Avance
iniciación.
2. Desenrollamiento de doble
hélice  hace accesibles las
bases como molde para formar
las nuevas hebras. Complejo de
3. El desenrollamiento inicial en el elongación asociado a
origen de replicación, gracias a Desenrrollamient la horquilla.
proteínas iniciadoras, avanza por
delante de la polimerasa,
o o relajación
REPLISOMA
encabezando la horquilla de
Complejo multiproteico
replicación.
formado por proteínas
4. Al sintetizarse hebras nuevas se especializadas y por DNA
va recuperando el enrollamiento polimerasas, que viaja
en las dos dobles hélices recién Enrrollamiento o asociado a cada horquilla
formadas. compactación realizando la replicación.
Conexión entre la iniciación y la elongación:
proteínas necesarias

PROTEÍNAS
HELICASAS LIGANTES DE DNA TOPOISOMERASAS PRIMASAS
MONOCATENARIO
• Hexámeros de • Evitan • Alivian tensión de • En procariotas
forma anular. reemparejamiento torsión, alteran forma parte del
• Rodea hebra del de las hebras, para estado de primosoma.
DNA cuando éste que éstas acojan superenrrollamient • En eucariotas
se ha abierto en el nucleótidos o. forma parte del
origen. • En procariotas: • Modifican número DNA pol-a
• Propaga proteínas SSB de enlace en DNA.
separación de las (single strand • Intervienen en
dos hebras  con binding proteins). recombinación y
hidrólisis de ATP. • En eucariotas: transposición.
• Las 2 horquillas de proteína de • Tipo I- corta una
replicación avanzan replicación A hebra.
en sentido opuesto, (RPA). • Tipo II- corta dos
cada una liderada hebras.
por una helicasa
seguida por el resto
del replisoma.
etría de la replicación en ambas hebras

◦ Síntesis de hebra retardada  Fragmentos de Okazaki


◦ Maduración de estos fragmentos se logra con la eliminación de cebadores,
elongación del fragmento adyacente para rellenar con DNA el hueco dejado por cada
RNA cebador y la unión o empalme de los extremos resultantes para dar una hebra
continua
Mecanismo de la elongación
ETAPAS EN EL PROCESO DE
REPLICACIÓN

III. TERMINACIÓN
Final de la elongación

◦ FINALIZACIÓN DE LA ELONGACIÓN por la DNA polimerasa, que se verifica en las


dos horquillas de replicación de cada replicón, previsiblemente cuando en su
avance alcancen a las horquillas respectivas de replicones adyacentes. El relleno de
huecos y la unión de los dos tramos de nueva hebra pueden resolverse de la misma
forma que la maduración y unión de los fragmentos de Okazaki.
◦ ¿cuál es el número de replicones implicados de forma simultánea en la replicación
de cada cromosoma?, ¿mecanismos de control que coordinan el proceso en todos
ellos?

◦ Pp 156

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