República Bolivariana de Venezuela

Universidad de Carabobo
Escuela de Medicina “Dr. Witremundo
Torrealba”
Núcleo Aragua
CROMATOGRAFIA

Bachilleres:

Profesor:  Cárdenas Carlos

 Castel Luis
Oscar Montaner
 CONTENIDO :

♦ Cromatografía Plana:
- En papel
- En capa fina

♦ Cromatografía en Columna:
- Cromatografía de exclusión molecular.
- Cromatografía de afinidad.
- Cromatografía de intercambio iónico.
 LA CROMATOGRAFIA
Conjunto de técnicas de separación en la que
los componentes de una muestra se separan en
dos fases: Una fase estacionaria, y una fase
móvil

 Fase Estacionaria: Sustancia que está

fija en una posición durante la
cromatografía.

 Fase Móvil : Sustancia que se mueve

en una dirección definida.
LA CROMATOGRAFIA / OBJETIVOS ;

 Separar proteínas con diferencias de

carga, tamaño, afinidad de unión y
otras propiedades de las mismas.

• Separar los componentes de la mezcla,

para obtenerlos.

• Medir la proporción de los

componentes de la mezcla.
¿POR QUE SE SEPARAN LOS COMPONENTES?

Se mueva la mezcla por un soporte

y los componentes se mueven a
diferentes velocidades debido a las Adsorción √
diferentes fuerzas de adsorción que
ejerce el soporte sobre cada
elemento Absorción X

La adsorción: Es un fenómeno superficial,

la sustancia adsorbida no se introduce en el
volumen del cuerpo, sino solo se adhiere
(pega) a su superficie.
 TIPOS DE CROMATOGRAFIA
-Cromatografía plana
Se realiza sobre papel u otro material sólido.
Suele llamarse “en capa fina” o “en capa
delgada.

Cromatografía de papel.

Cromatografía de capa fina.

- Cromatografía en columna

En este tipo de cromatografía, la

fase estacionaria utilizada, es decir,
el absorbente, se coloca en el
interior de una columna de vidrio,
la cual finaliza con una llave para
controlar el paso de sustancias
 COMPONENTES

Cromatógrafo : es el equipo que permite

una separación sofisticada.
Analito
ó
Fase movil
o Cuando la sustancia emerge por la salida de la
columna se llama efluente
Resina
Tipos de Resina
o La fase móvil se llama eluyente.

o El proceso que consiste en hacer pasar un

líquido o un gas a lo largo de la columna de
cromatografía se llama elución.

Efluente

Volumen de
elución
 COMPONENTES

Cromatograma

Para cromatografía de exclusión molecular:

• Resinas de polímeros entrecruzados:
Microporosas, Macroporosas, Isoporosas

• Para cromatografía de intercambio iónico:

resinas de polímeros sintéticos que tienen unidos
Tipos de Resina grupos cargados: catiónicas de acido fuerte y de
ácido débil , aniónicas de base fuerte y base
débil

• Para cromatografía de afinidad: ligando.

CROMATOGRAFIA DE EXCLUSIóN MOLECULAR

Cromatografía que separa proteínas según su tamaño. Y su tiempo de elución

es proporcional al peso molecular de los mismos.

Partículas
poliméricas
porosas
Se añade la mezcla de
proteínas a la columna que
contiene un polímero
entrecruzado
Las moléculas de proteínas se separan
por tamaños; las moléculas mayores
pasan más libremente, apareciendo en
las primeras fracciones
 La fase estacionaria se
compone de partículas
muy porosas

No existen
interacciones
físicas o
químicas entre
el analito y la
fase
estacionaria. En los poros pueden
entrar las moléculas
de pequeño tamaño

CROMATOGRAFIA
DE EXCLUSIOSN
MOLECULAR
CARACTERISTICAS.
 CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD
Separa sustancias utilizando interacciones moleculares altamente
específicas, reteniendo en las columnas las proteínas que se unen a un
ligando.

Mezcla de Solución
proteínas de
ligando

Se añade la mezcla
de proteínas a una
columna que
contiene un ligandoLas proteínas no La proteína de interés se
especifico para ladeseadas se lavan a
eluye por medio de una
proteína de interéstravés de la solución de ligando
unido al polímero columna
CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD / CARACTERISTICAS:

La proteína que ha
quedado retenida en la
columna se eluye o libera
mediante el empleo de una
solución que contiene bien
ligando libre u otro compuesto
que rompa la interacción
entre el ligando y la proteína.
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

CATION POLO NOMBRE

CÁTODO

ANION POLO NOMBRE

ÁNODO
 CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO
Proceso que permite la separación de iones y moléculas polares basado en las
propiedades de carga de las moléculas.

La Fase Móvil es generalmente

una Solución Amortiguadora de
pH.

La Fase Estacionaria es una

resina de Intercambio Iónico y tiene
la propiedad de separar especies
ionizadas.
 La cromatografía de intercambio
catiónico retiene cationes debido a
que
la fase estacionaria muestra un grupo
funcional cargado negativamente.

 La cromatografía de intercambio de
aniones retiene aniones usando
grupos funcionales cargados
positivamente.
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

Partículas poliméricas
con grupos funcionales
cargados negativamente

Se añade la mezcla de proteínas a

la columna que contiene
intercambiadores de cationes
Las proteínas se desplazan a través de la columna a
velocidades determinadas por su carga neta al pH
que se esta utilizando.
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

Solución
salina

Las proteínas que

quedan atrapadas en la
fase inmóvil se eluyen,
agregando una solución
salina para que compita
con la proteína.
 GRACIASPOR
GRACIAS PORSU
SU
ATENCION
ATENCION