INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS

Métodos instrumentales basados en la interacción de la radiación electromagnética, u otras partículas,

con un analito para identificarlo o determinar su concentración

Se dividen en

Espectroscópicos No Espectroscópicos

Aprovechan diferentes propiedades de la radiación

Son aquellos en los que existe intercambio de
electromagnética, como el índice de refracción o la
energía entre la r.em. y la materia. El analito sufre
dispersión
absorción, emisión o luminiscencia

No se producen transiciones entre los diferentes

estados energéticos, sino que ocurren cambios en la
Se diferencian según la forma en la que radiación o en las propiedades físicas de la r.em.
se encuentra el analito en el proceso
espectroscópico, dando lugar a la
espectroscopia atómica y a la
espectroscopia molecular
INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS
MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS MÉTODOS NO ESPECTROSCÓPICOS

OTROS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS

 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA
Spectrum (latín): imagen
Skopos (griego): observador
Espectroscopista = observador de imágenes

• Es el estudio de las interacciones entre la materia y la radiación electromagnética.

• Históricamente, la espectroscopia se originó a través del estudio de la luz visible dispersada por un prisma
en función de su longitud de onda. Más tarde se amplió enormemente el concepto para constituir cualquier
interacción con la energía radiante como función de su longitud de onda o frecuencia.

• Los datos espectroscópicos suelen representarse por un espectro, que es una gráfica de la respuesta de
interés en función de la longitud de onda o la frecuencia.
 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA

t u ra
tr uc
Es
Medición e
interpretación de
fenómenos como:
absorción, dispersión
o emisión de Interacción
radiación
electromagnética que
ocurre en átomos,
moléculas u otras
especies químicas.
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ESPECTROSCOPÍA
ANTECEDENTES HISTÓRICOS

1666 1802 1812 1853 1859 1868 1882

Sir Isaac William Hyde Joseph von August Beer Gustav Kirchhoff Anders J. Abney y Festing
Newton Wollaston Fraunhofer identifica la y Angstrom mide obtienen
descubre el identifica líneas estudia estas relación entre la Robert Bunsen las longitudes espectros de
espectro solar oscuras en el líneas negras absorción de la observan de onda de unas absorción
espectro solar mediante un luz y la diferentes colores 1.000 líneas de infrarroja de
espectroscopio concentración a partir de Fraunhofer más de 50
elementos compuestos
calentados
hasta su
incandescencia
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ESPECTROSCOPÍA
ANTECEDENTES HISTÓRICOS

1666 Observación del espectro visible Kirchhoff y Bunsen observaron diferentes colores a
partir de elementos calentados hasta su
incandescencia

Pasaron un rayo de luz a través de la sal metálica

calentada y obtuvieron líneas de absorción de
Wollaston y Fraunhofer, de manera independiente, Fraunhofer
descubren líneas negras en el espectro solar
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ESPECTROSCOPÍA
CONCEPTOS CLAVES

Espectroscopia Espectrómetro

La medida de la interacción de la muestra con la luz de Instrumento para tomar medidas relativas en la
diferentes longitudes de onda de diferentes regiones del región del espectro óptico, utilizando luz
espectro electromagnético. espectralmente dispersada por un elemento
dispersador.

La medida de dichas señales

como función de la longitud de onda
genera un espectro y origina el término “espectroscopia”. I0 I
l

Fuente Mono- Detector

de luz cromador Muestra de luz
 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA
CONCEPTOS CLAVES: El espectro electromagnético

• Distribución energética del conjunto de las

ondas electromagnéticas.

• El espectro electromagnético abarca

numerosos órdenes de magnitud en cuanto
a frecuencia y longitud de onda.

• El espectro electromagnético se extiende

desde la radiación de menor longitud de
onda, como los rayos gamma y los rayos X,
pasando por la radiación ultravioleta, la luz
visible y la radiación infrarroja, hasta las
ondas electromagnéticas de mayor longitud
de onda, como son las ondas de radio.
 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA

CONCEPTOS CLAVES: El espectro electromagnético

 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA
CONCEPTOS CLAVES: La Luz

La luz puede describirse de dos maneras:

• Propiedades de ondas Suelen emplearse términos como longitud de onda y frecuencia.

• Propiedades de partículas Se expresan en términos de paquetes de energía llamados fotones.
• Estos términos son válidos en todo el espectro electromagnético.

Tiene naturaleza ondulatoria, pues consta de

campos eléctrico (E) y magnético (M) oscilantes
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ESPECTROSCOPÍA
CONCEPTOS CLAVES: La Luz

La energía asociada con la radiación electromagnética puede definirse como sigue:

E  h 

E Energía (J)
La frecuencia está relacionada con la longitud de onda según:
h Constante de Planck (6,62 10-34 Js)
n Frecuencia (s-1)
c Velocidad de la luz (3108 ms-1)
c  Longitud de onda (m)


 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA
CONCEPTOS CLAVES: Absorción y Emisión

Las interacciones de la radiación electromagnética con la materia se pueden clasificar de modo general en:

• Procesos de absorción:
La radiación electromagnética de una fuente es absorbida por la muestra y origina una disminución de la
potencia radiante que llega a un detector

• Procesos de emisión:
La radiación electromagnética emana desde la muestra, lo que origina un aumento de la potencia radiante
que llega a un detector
 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA
CONCEPTOS CLAVES: Absorción y Emisión

Los procesos de absorción y emisión implican transiciones entre diferentes niveles o estados de energía.
Para que se produzca una transición, el fotón incidente deberá tener una energía igual a la diferencia de
energía entre los dos estados. En tal caso, la energía puede absorberse y se produce una transición a un
estado excitado.

Dichas transiciones pueden implicar cambios en

• Energía electrónica
• Energía vibracional Eelectrónica > Evibracional > Erotacional
• Energía rotacional

Los cambios en los niveles de energía del núcleo pueden observarse con energías muy elevadas (rayos ),
mientras que los cambios en los estados de spin del núcleo pueden observarse con energías muy inferiores
(microondas y ondas de radio).
 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA
CONCEPTOS CLAVES: Absorción y Emisión

Estas transiciones originan bandas

de absorbancia muy estrechas
a longitudes de onda muy
características de la diferencia
en los niveles energéticos
de la especie que absorbe.

Transiciones electrónicas en el formaldehído

 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA
CONCEPTOS CLAVES: Absorción y Emisión

Los átomos pueden absorber cantidades discretas

de energía:
• Calor
• Luz a longitudes de onda discretas

Un electrón puede cambiar de nivel de energía:

• Energía para cambiar de nivel = energía de la luz
absorbida
• Los átomos se “excitan”
• El electrón pasa a un nivel de energía superior: E1,
E2, ... En

Diagrama de niveles de energía para el plomo (Pb)

 INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA
CONCEPTOS CLAVES: Absorción y Emisión

La longitud de onda de la luz () es inversamente proporcional a la

separación entre los niveles de energía:
c
 (separación más amplia = longitud de onda más corta)
E
Cada transición tiene una separación y una energía diferentes y,
en consecuencia, una longitud de onda diferente.

Los átomos también muestran líneas de emisión. El átomo se relaja

al estado base liberando energía como luz emitida.
INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS:
ESPECTROSCOPÍA

• Los electrones de las

moléculas se encuentran Transiciones • Es el relajamiento de
inicialmente en el estado electrónicas
de mínima energía los electrones hacia
(máxima estabilidad). Al • La excitación producida niveles menos
hacer incidir energía los energéticos, que
por un fotón hace que
electrones son excitados y
llevados a un estado más
el electrón se producen la
desplacen hacia liberación de
energético.
orbitales antienlazantes
(estados electrónicos). energía.
Absorción Emisión
 ESPECTROSCOPÍA
ULTRAVIOLETA-VISIBLE
Técnica espectroscópica que sirve para la detección cualitativa y
cuantitativa de especies cromóforas (sustancias que absorben
en las longitudes de onda dentro del espectro visible).
 ESPECTROSCOPÍA
ULTRAVIOLETA-VISIBLE
Longitudes de onda: 195 a 400nm

¿Qué sustancias puedes ser reconocidas?

Los compuestos con dobles enlaces
aislados, triples enlaces, enlaces
Alta energía peptídicos, sistemas aromáticos, grupos
carbonilos y otros heteroátomos tienen su
máxima absorbancia en la región UV.

Lámpara de deuterio
 PRINCIPIOS UV-VIS: TRANSICIONES
ELECTRÓNICAS

 𝝀=𝟏𝟗𝟎 −𝟕𝟖𝟎 𝒏𝒎

TOM
 PRINCIPIOS UV-VIS: TRANSICIONES
ELECTRÓNICAS
λ150 nm . Este tipo de transiciones se dan sobre todo
en hidrocarburos que únicamente poseen enlaces σ C-
H o C-C. La energía requerida para que tenga lugar
esta transición es relativamente grande, perteneciente
a la región espectral denominada ultravioleta de vacío.

λ entre 200-700 nm. La mayoría de las aplicaciones de espectroscopia

UV-Visible están basadas en transiciones que ocurren en esta zona.
Se requiere que las especies participantes aporten un sistema  de >E<
electrones π (grupos cromóforos: compuestos con insaturaciones,
sistemas aromáticos multicíclicos, etc.).

Las energías de excitación en las transiciones π→π* son

medianamente altas, correspondiendo a la región UV Lejano y
Próximo.

Las n→π* son considerablemente menores, correspondiendo a la

región visible del espectro.
 PRINCIPIOS UV-VIS: LEY DE BEER-
LAMBERT
Expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de longitud de onda fija)
y concentración de un cromóforo en solución.

 
𝑨 =𝜺 . 𝒃 . 𝒄
A: es la cantidad de radiación
absorbida por la muestra.
ε: Absortividad molar que
dependen de la longitud de
onda y del disolvente. A depende de la distancia que
atraviesa la luz a través de la
solución cromófora y de su
concentración.
EQUIPO DE ESPECTROSCOPÍA DE
ABSORCIÓN UV-VIS
 • La radiación incidente sea monocromática.

• La incidencia de la radiación sea perpendicular.

• La lámpara emita radiación electromagnética de

intensidad constante.

• El compartimiento donde se ubica la celda no

permita el paso de la luz del ambiente.

La linealidad de la gráfica y sus

• La longitud del trayecto sea igual para blancos y
aplicaciones solo se dan para < [0,02M]
estándares (celdas iguales).

• Las soluciones absorbentes estén formando una

solución homogénea.
ESPECTROS DE ABSORCIÓN UV-VIS
 APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA
UV/VIS: ANÁLISIS CUALITATIVO

Técnica secundaria para identificar y

determinar detalles estructurales

Proporciona información de ausencia/presencia de agentes

cromóforos: distinguir entre dos colores morados de un
compuestos
 APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
ANÁLISIS CUANTITATIVO
Por su versatilidad, precisión y sensibilidad es la herramienta más útil para determinar la concentración
desconocida de una sustancia conocida

Análisis de sustancias no
absorbentes que reaccionan con Análisis de mezclas, donde la
Análisis de sustancias que otras que sí absorben absorbancia total: suma
absorben por sí mismas absorbancia de la mezcla
 APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
TOXICOLOGÍA FORENSE
Análisis UV VIS del CN: Método de microdifusión de Feldstein-Klendshoj
 
--

  𝟐+ 𝟐 𝑯 𝟐 +𝟒 𝒆− → 𝟐 𝑯 𝟐 𝑶
𝑶
 APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
TOXICOLOGÍA FORENSE
Análisis UV VIS del CN: Método de microdifusión de de Feldstein-Klendshoj
 
--

 
 APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
TOXICOLOGÍA FORENSE
Análisis UV VIS del CN: Método de microdifusión de de Feldstein-Klendshoj
 
--

MUERTE POR ACIDOSIS

 APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
TOXICOLOGÍA FORENSE
Análisis UV VIS del CN: Método de microdifusión de de Feldstein-Klendshoj
Cámara de
Conway

Homogenizar y
dejarlo 3 a 4h

Cl de
cianógeno

Cl de
cianópiridina

Ácido glutacónico +
Ácido barbitúrico
580nm
APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
TOXICOLOGÍA FORENSE
Intoxicación con CO
APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
TOXICOLOGÍA FORENSE
Intoxicación con CO
 APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
TOXICOLOGÍA FORENSE
Análisis UV VIS del CO
 APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
TOXICOLOGÍA FORENSE
Análisis UV VIS del CO

Agente reductor
 APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA UV/VIS:
TOXICOLOGÍA FORENSE
Análisis UV VIS del CO

Agente reductor