Universidade Federal de Minas Gerais

Instituto de Ciências Biológicas

Departamento de Microbiologia
Pós Graduação – Microbiologia

O papel dos anticorpos induzidos pela

microbiota comensal na responsividade
inflamatória do hospedeiro

Daniel Cisalpino
► Profa. Dra. Danielle da Glória de Souza
Cooperação Conflito

Mutualismo Comensalismo

Protocooperação Parasitismo

Ulvestad, APIMS, 2009

• 1013-1014: 10 x mais células;
• ~1000 espécies;
• 106 genes;
• Capacidade metabólica do fígado
humano.
Adaptado de Pennisi, Sicence,
2010
Maturação do sistema imune

Hooper and Macpherson, Nat Rev Immunol 2010

Fiona Powrie
Hooper and Macpherson, Nat Rev Immunol 2010
Souza et al, 2004
Amaral et al, 2008
 Reid et al, 2002
Chan et al, 2004
 Zhang et al, 2004

Zhang et al, 2006

 A ausência de colonização do TGI está associada à
marcante redução nas concentrações de IgA
secretadas, no intestino (Moreau, et al., 1978;
Hooper, L.V., 2009; Round & Masmanian, 2009)

 A concentração de imunoglobulinas circulantes é

bastante reduzida, tanto imunoglobulinas da classe
IgM (Fahey & Sell, 1965), quanto da classe IgG
(Wostmann & Gordon, 1960; Arnason, et al., 1964;
Ikari, N.S., 1964; Hooijkaas, et al., 1984; Hooijkaas,
et al., 1985; Bos, et al., 1987; Bos, et al., 1988;
Freitas, et al., 1991, Smith, et al., 2007).
• A diferença no repertório de
imunoglobulinas e na atividade de
linfócitos B presente em animais GF
estaria associada à hiporresponsividade
inflamatória destes indivíduos?
 Objetivo geral
• Estudar o papel do repertório de
imunoglobulinas na hiporresponsividade
inflamatória de animais isentos de
microbiota.
 Objetivo específico 1
• Verificar a possibilidade de transferência da
hiporresponsividade inflamatória de animais
isentos de germes a isquemia e reperfusão
intestinal por fatores presentes no soro, através da
injeção de soro de animais GF para animais CV;

• Verificar a possibilidade de transferência da

habilidade de responder a estímulos inflamatórios
induzidos por isquemia e reperfusão intestinal para
animais GF, através da injeção de soro de animais
CV em animais GF;
Estratégia experimental 1:
Resultados:
Resultados:
Resultados:
Resultados:
Sumário:
• A injeção de soro de animais GF em animais
CV não altera a resposta destes últimos à
IRI;

• A injeção de soro de animais CV em animais

GF reverte a hiporresponsividade
inflamatória dos últimos à IRI;
– Lesão local , remota e sistêmica;
– Produção de mediadores pró-inflamatórios;
– Recrutamento de neutrófilos;
– Redução da produção de IL-10.
 Objetivo específico 2
• Avaliar quais os componentes do soro
são responsáveis pela alteração do
fenótipo hiporresponsivo de animais
GF a isquemia e reperfusão intestinal
após receberem soro de animais CV;
Estratégia experimental 2.1:
Fatores solúveis (como fatores do sistema
complemento) seriam responsáveis pela reversão
do fenótipo não inflamatório de animais GF
associada à administração de soro de animais CV?
Resultados:
Resultados:
Resultados:
Sumário:

 A reversão da hiporresponsividade inflamatória de

animais GF após injeção de soro de animais CV
não se deve à presença de fatores termolábeis
(fatores do sistema complemento) neste soro.
Estratégia experimental 2.2:
A resposta inflamatória presente no nosso modelo
de IRI é dependente da presença de anticorpos
circulantes?
Resultados:
Resultados:
Resultados:
Sumário:

O modelo estudado é dependente da

presença de imunoglobulinas
circulantes.
Estratégia experimental 2.3:
São mesmo as imunoglobulinas presentes no soro
o fator responsável pela reversão do fenótipo não
inflamatórios de animais GF após administração de
soro de animais CV?
Resultados:
Resultados:
Sumário:

 A reversão da hiporresponsividade inflamatória de

animais GF após injeção de soro de animais CV é
dependente da presença de imunoglobulinas
neste soro.
 Objetivo específico 3
• Verificar a possibilidade de transferência da
habilidade de responder a estímulos inflamatórios
induzidos por isquemia e reperfusão intestinal para
animais GF, através da injeção de soro de animais
recém convencionalizados em animais GF;
Estratégia experimental 3:
É realmente a microbiota quem leva à produção
das Igs “inflamatórias”?
Resultados:
Resultados:
Sumário:
 A injeção de soro de animais CGF em
animais GF reverte a hiporresponsividade
inflamatória dos últimos à IRI
Conclusões Parciais:
• A hiporresponsividade inflamatória de animais
GFs deve-se a diferenças no repertório de
imunoglobulinas. A reposição deste restabelece
a habilidade destes animais em montar uma
resposta inflamatória:

– IL-10 -> PMN -> lesão tecidual.

Souza et al, 2007
Yang et al, 2009

Ayroldi et al, 2009

Objetivo específico 4
• Verificar a possibilidade de transferência
da habilidade de responder a estímulos
inflamatórios induzidos por isquemia e
reperfusão intestinal para animais GF,
através da injeção de anticorpos
purificados do soro de animais CV
Estratégia Experimental 4

24 horas 60 40
Reposição de minutos minutos
Igs: Isquemia: Reperfusão:
CV
ou Administração Oclusão total da Restabelecimento
GF de Igs AMS do fluxo pela
purificadas AMS Sacrifício
estéreis
(400mL, i.p.)

qPCR: ANXA-1, GILZ ,

TNFa, IL-6 , IL-10

MPO: Neutrófilos

Azul de Evans: Permeabilidade

Vascular
Objetivo específico 5
 Estudar o mecanismo associado com a alteração
fenótipo hiporresponsivo de animais GF a isquemia
e reperfusão intestinal, tendo como alvo as vias de
transdução de sinal associadas.
Estratégia Experimental 5
Resultados:
Resultados:
CV GF
Sham IRI Sham IRI

Núcleo p65/RelA

P-IB-
Citoplasma
-actina

IRI
CV GF CV→GF

p65/RelA

P-IB-

-actina
Sumário:
 A injeção de soro de animais CV em animais GF
inibe a transcrição de moléculas anti-
inflamatórias nos ultimos animais após IRI;

 Este acontecimento está associado ao

restabelecimento da ativação do fator de
transcrição pró-inflamatório NF-kB após IRI.
Conclusões Parciais:
 A hiporresponsividade inflamatória de animais
GFs deve-se em parte a diferenças no repertório
de imunoglobulinas. A reposição deste
restabelece a habilidade destes animais em
montar uma resposta inflamatória:

 Deposição de CIs -> inibição da produção de moléculas

anti-inflamatórias;
 Ativação de NF-kB;
 Produção de mediadores inflamatórios e recrutamento de
leucócitos.
Perspectivas:
 Há deposição de complexos imunes e ativação da via
clássica do sistema complemento após IRI em animais GF
que receberam soro de animais CV?

 Anticorpos purificados de animais GF recém-colonizados

são capazes de restabelecer a resposta inflamatória
induzida por IRI ou por IP em animais GF?

 O bloqueio da ação de GILZ restabelece a responsividade

inflamatória de animais GF submetidos à IRI ou a IP?