ARN

Equipo 5. Falcon
INTEGRANTES:
Gamboa Aguirre Maria Guadalupe
González Mares Nadia Cecilia
Perez Zavala Ulises Antonio
Martínez Gutiérrez Eneida Concepción
COMPOSICIÓN DEL ARN.
El ácido ribonucleico (ARN) es una molécula similar a la de ADN. A diferencia del
ADN, el ARN es de cadena sencilla. Una hebra de ARN tiene un eje constituido por
un azúcar (ribosa) y grupos de fosfato de forma alterna. Unidos a cada azúcar se
encuentra una de las cuatro bases adenina (A), uracilo (U), citosina (C) o guanina (G).
Hay diferentes tipos de ARN en la célula:

● ARN mensajero (ARNm),

● ARN ribosomal (ARNr)
● ARN de transferencia (ARNt)

Más recientemente, se han encontrado algunos ARN de pequeño tamaño que están
involucrados en la regulación de la expresión génica.
 ARN
Fig. No. 1 Estructura del ARN
Los ácidos nucleicos, el ADN y ARN reciben su nombre del hecho de ser moléculas
con características acídicas (como la carga negativa en soluciones acuosas) y
haberse localizado inicialmente en el núcleo celular, aunque ahora se sabe que
también se encuentran en la mitocondria.

Para su estudio los ácidos nucleicos deben aislarse del resto de los componentes
celulares, como lípidos y proteínas, más abundantes que los ácidos nucleicos.
Asimismo, dependiendo del objeto de estudio debe aislarse de preferencia el ADN o
ARN; así, para estudios de niveles de expresión génica se extraerá ARN, mientras
que para la búsqueda de modificaciones o alteraciones genéticas, ADN.
 Fig. No. 2
Comparación
entre ARN y
ADN
 El ARN es la molécula que se encarga de dirigir las
etapas intermediarias de la sintesis de proteinas, ya
que traduce la información proveniente del ADN que
determina la estructura de estas. El ARN es lábil, la
temperatura y el pH influyen en la degradación del
mismo.Para extraer ARN se utiliza como reactivo el
Trizol, que es una solución monofásica de fenol e
isotiocianato de guanidina que causa la lisis celular,
desnaturaliza las proteínas de interferencia de la
muestra y mantiene la integridad del ARN por la
inhibición efectiva de las RNAsas que son enzimas
estables que no requieren cofactores para su acción.
Fig. No. 3 Reactivo
Trizol
Metodología
 ● Buffer de extracción (Tris pH
7.5 100 mM, NaCl 700 mM,
EDTA pH 8.0 50 mM y CTAB al
1%)
Fundamento ● Cloroformo-alcohol isoamílico:
24:1 v/v
● Solución de lavado: Etanol al
76% y NaOAc 0.2M
● TE pH 8.0: Tris pH 8.0 10mM y
EDTA pH 8.0 1mM.
Extracción de ARN (sangre)
Fig No. 4
Comparación de
estructura de
ribosomas en
eucariontes y
procariontes.
 Resultados 10037

Fig No. 5
8000
6000
5000
Resultados de 4000
3000
electroforesis, gel 2500
2000
de Agarosa al 1.2% , 1500-1517
1000
análisis de ARN de 800
600
levadura. 400
200
Discusión
● El resultado de la muestra de sangre no es viable debido a un posible mal
manejo de esta misma, esto siendo posible por el exceso de tiempo, variación de
la temperatura y/o mal almacenamiento de la muestra.
● Se identifica en el gel de agarosa tres bandas diferentes, perteneciendo a los
diferentes tipos de ARN que conforman al ribosoma. Estas son las
correspondientes a 28S, 18S.
● Al ser diferente la concentración del gel de agarosa las bandas no coinciden con
la longitud de los ARN según bibliografía.
● Todo lo observado menor a 200 pb es identificado como ARNt.
Cuestionario.
TIPOS DE ARN
Mensajero
Ribosomal
Transferencia
Tipos de ARN en la célula y qué funciones cumplen.
ARN de mensajero (mRNA)

el mRNA explica el apenas 5% del ARN total en la célula. el mRNA es el más heterogéneo de los 3 tipos de ARN en términos de serie baja y talla.
Lleva la clave genética elogiosa copiada, de la DNA durante la transcripción, bajo la forma de tríos de los nucleótidos llamados los codones.

ARN Ribosomal (rRNA)

los rRNAs se encuentran en los ribosomas y explican el 80% del ARN total presente en la célula. Los ribosomas se componen de una subunidad
grande llamada los años 50 y de una pequeña subunidad llamada los años 30, que se compone de sus propias moléculas específicas del rRNA.
Diversos rRNAs presentes en los ribosomas incluyen los pequeños rRNAs y los rRNAs grandes, que pertenecen a las subunidades pequeñas y
grandes del ribosoma, respectivamente.

ARN de la transferencia (tRNA)

el tRNA es el más pequeño de los 3 tipos de ARN, poseyendo alrededor 75-95 nucleótidos. los tRNAs son un componente esencial de la traslación,
donde está la transferencia su función principal de aminoácidos durante síntesis de la proteína. Por lo tanto, se llaman transferencia RNAs.
Pequeño ARN nuclear (snRNA)

el snRNA está implicado en el tramitación del ARN de premensajero (pre-mRNA) en el mRNA maduro. Son muy cortos,
con un largo medio de solamente 150 nucleótidos.

RNAs regulador

Varios tipos de ARN están implicados en la regla de la expresión génica, incluyendo el ARN micro (miRNA), el pequeño
ARN de interferencia (siRNA) y el ARN antisentido (aRNA).

ARN del Transferencia-mensajero (tmRNA)

Encontrado en muchas bacterias y plastids. la etiqueta del tmRNA las proteínas codificadas por los mRNAs que faltan los
codones de parada para la degradación, y evita que el ribosoma se atasque debido al codón de parada faltante.
¿Como pueden aislarse los diferentes tipos de ARN con técnicas de Ing.
Genética?

ARNm: A partir de ARN total Este método consiste en aislar el ARN mensajero (ARNm) a partir de una muestra
de ARN total. El ARNm tiene en el extremo de su secuencia una estructura llamada poli-A, que es una secuencia repetida de un
nucleótido ( adenina). Para que el aislamiento se lleve a cabo, se agrega una secuencia corta de repetidos de timinas, llamada
oligo-dt, que se une al poli-A. Después, usando una proteína llamada transcriptasa reversa (o RT) se genera una cadena de ADN
llamado complementario (ADNc).
mediante extracción fenólica
¿Cual es la finalidad de extraer ARN en biotecnología?
● ARNm o ARN mensajero, que transmite la información codificante del ADN sirviendo de pauta a la síntesis de
proteínas.
● ARNt o ARN de transferencia, que transporta aminoácidos para la síntesis de proteínas.
● ARNr o ARN ribosómico que, como su nombre indica, se localiza en los ribosomas y ayuda a leer los ARNm y
catalizan la síntesis de proteínas.

¿Cual es la función del 16SrRNA y 18SrRNA?

● ARNr 16S

El ARN ribosomal 16S (ARNr 16S o 16S rRNA) es el componente de la subunidad menor (30S) de los ribosomas procariotas que se une a
la secuencia de Shine-Dalgarno. Los genes que lo codifican son conocidos como genes del ARNr 16S, y se utilizan para la reconstrucción
de filogenias debido a sus bajas tasas de evolución.
¿Cual es la función del 16SrRNA y 18SrRNA?

Función del 16SrRNA

● ARNr 16S Fig. No.4 Estructura de 16SrRNA

● El ARN ribosomal 16S (ARNr 16S o 16S rRNA) es el componente de la subunidad menor (30S) de los ribosomas procariotas que
se une a la secuencia de Shine-Dalgarno. Los genes que lo modifican son conocidos como genes del ARNr 16S, y se utilizan para la
reconstrucción de filogenias debido a sus bajas tasas de evolución.
● Del mismo modo que el ARN ribosomal 23S, de gran tamaño, tiene una función estructural, sirviendo como un soporte para
definir la posición de las proteínas ribosomales.
● El extremo 3' contiene la secuencia anti-Shine-Dalgarno, que se une aguas arriba con el codón de inicio AUG en el ARNm. El
extremo 3' del 16S RNA se une a las proteínas S1 y S21, de las que se sabe que están implicadas en el inicio de la síntesis
proteica.
● Interacciona con el 23S rRNA, favoreciendo la unión de las subunidades 50S y 30S.
● Estabiliza el correcto apareamiento codón-anticodón en el sitio A, a través de la formación de un puente de hidrógeno entre el
átomo N1 de los residuos 1492 y 1493 de Adenina y el grup 2'OH de la cadena del mRNA.
Función del 18SrRNA

● Los genes que codifican 18S rRNA se denominan genes 18S rRNA. Los datos de secuencia de estos genes se usan ampliamente
en el análisis molecular para reconstruir la historia evolutiva de los organismos, especialmente en los vertebrados, ya que su lenta
tasa evolutiva lo hace adecuado para reconstruir divergencias antiguas.
● El gen de la subunidad pequeña (SSU) 18S rRNA es uno de los genes más utilizados en estudios filogenéticos y un marcador
importante para la reacción aleatoria en cadena de la polimerasa (PCR) en la detección de la biodiversidad ambiental. En general,
las secuencias de genes de rRNA son de fácil acceso debido a las regiones flanqueantes altamente conservadas que permiten el
uso de cebadores universales.
● Su disposición repetitiva dentro del genoma proporciona cantidades excesivas de ADN de plantilla para PCR, incluso en los
organismos más pequeños. El gen 18S es parte del núcleo funcional ribosómico y está expuesto a fuerzas selectivas similares en
todos los seres vivos. Por lo tanto, cuando se publicaron los primeros estudios filogenéticos a gran escala basados ​en secuencias
18S.
¿Como obtengo ARNm y que funcion tiene?

Funcion .
El ARN mensajero (ARNm) es una molécula de ARN de cadena simple, complementaria a una de las cadenas de ADN de un
gen. El ARNm es una versión del ARN del gen que sale del núcleo celular y se mueve al citoplasma donde se fabrican las
proteínas. Durante la síntesis de proteínas, un orgánulo llamado ribosoma se mueve a lo largo del ARNm, lee su secuencia
de bases, y utiliza el código genético de traducir cada triplete de tres bases o codón, en su aminoácido correspondiente.
¿Que es la transcriptómica?

Estudio de todas las moléculas de ARN en una célula. El ARN se copia de piezas de ADN y contiene información para
elaborar proteínas y realizar otras funciones importantes en la células. La transcriptómica se usa para aprender más de
cerca la manera en que los genes se transforman en diferentes tipos de células y cómo esto puede ayudar a la
presentación de ciertas enfermedades como el cáncer.
¿Qué son los miRNA y los siRNA, cuál es su
función?
Son herramientas de proteómica utilizadas para estudiar varios aspectos de la
expresión génica. La proteómica es el estudio de proteínas mediante el cual se
examina el complemento completo de proteínas de una célula a la vez.

Hay ligeras diferencias entre los dos

El proceso de interferencia de ARN (ARNi) puede ser moderado por ARNip o

miARN, y existen diferencias sutiles entre los dos. Como se mencionó, ambos son
procesados dentro de la célula por la enzima Dicer y se incorporan al complejo RISC.
Conclusiones
● El protocolo para extracción de ARN fue realizado en sangre, debido a posible
desnaturalización por un mal manejo de muestra.
● Se realizó el análisis de una ,muestra de levadura, en las cuales se comprobó la
presencia de ARN en sus diversa presentaciones.
● El gel de agarosa muestra presencia de ARN ribosomal de 28S, 18S, ARNt.
Referencias
Tomás López, Daniela Silva, Susana López y Carlos Arias “RNA de interferencia: el
silencio de los genes”. UNAM. Recuperado de:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/libro_25_aniv/capitulo_10.pdf

Sambrook, J., Russel, D. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3a ed.).
Cold Spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press

Alberto Checa Rojas. (2017). Aislamiento de ARNm y síntesis de ADNc. 2019,

Noviembre 20, Conogasi.org Sitio web: http://conogasi.org/articulos/aislamiento-
de-arnm-y-sintesis-de-adnc-2/
ANEXO
 Resultados de
practica 8-9-10
 ● Resultado práctica
agrotransformación.

Fig. No. 5 Crecimiento de planta,

corresponde a jitomate y verdolaga en
medio MS.
 ● Resultado práctica
agrotransformación.
Fig. No. 6 Crecimiento de planta, en
algunas un crecimiento normal, en
otras presencia de cayo, señal de un
correcto protocolo y resultado.

Se tiene una contaminación, se

especula puede ser de penicillium.
RESULTADOS
EXTRACCIÓN
ADN EN MAÍZ
Equipo Carril de Tipo de maíz
electroforesis
1 2 Palomero

2 3 Criollo (Valle de
Toluca)

Tipos de maíz utilizados por los

3 4 Amarillo (Valle de
diferentes equipos para la
Chalco)
realización de la práctica. 4 5 Azul

5 6 Palomero

6 7 Blanco de Toluca

7 8 Blanco (Vallo de
Chalco
RESULTADOS Equipo Muestra A260/A280 Concentración
EXTRACCIÓN DE Pureza [μg/μL]

ADN DE MAÍZ
1 A 1.954 2.003
B 1.603 0.293
Tabla de pureza en extracción de 2 A 2.5 4.640
ADN de cada uno de los diferentes
B 1.778 4.435
equipos.
3 A 2 0.0045
B 1.357 0.0047
4 A 1.679 2.317
B 1.66 0.745
5 A 2.042 3.625
B 1.983 2.613
6 A 1.710 0.51
B 1.449 1.449
7 A 1.83 3.047
B 1.751 2.250
Resultados
1 2 3 4 5 6 7
extracción ADN
en maíz
gel de agarosa al 1%

● En todos los carriles se nota

una banda clara, por lo que
se cuenta con ADN viable.

● Se observa que en los pozos

quedan restos de ADN, el
genoma es muy grande.

● Todos cuentan con

presencia de ARN.
Resultados
extracción ADN
en maíz (PCR)
● Los equipos 1 y 5 deberían ser
parecidos, ya que ambos usaron
maíz palomero. Sin embargo, no
cuentan con bandas que
demuestren que el ADN tiene la
misma longitud.
● Sin embargo, los equipos 2 y 7
que cuentan con muestra
procedente de Valle de Chalco
cuentan con bandas similares o
iguales, por lo que sí tienen la
misma procedencia.