SEPARATION METHODS

METODE PEMISAHAN
 Ilmu pemisahan (Separation Science)
Ilmu yang mempelajari gejala fisika dan kimia yang
terlibat dalam proses atau pencapaian pemisahan,
pengembangan dan penggunaan berbagai proses
pemisahan.

 Definisi pemisahan :
Cara kerja atau pengerjaan sehingga suatu campuran
dibagi menjadi sekurang-kurangnya 2 fraksi yang berbeda
susunannya
SISTEM PEMISAHAN
TERDIRI DARI 2 FASE :
 FASE 1
 FASE 2

METODE FASE 1 FASE 2

Kromatografi Fase Diam Fase Gerak
ECC Rafinat Ekstraktan
Dialisis Retentat Difusat
TAHAPAN ISOLASI
3 (tiga) tahapan utama dalam isolasi :
 Ekstraksi
 Fraksinasi
 Pemurnian

Bahan Tumbuhan

Ekstraksi Fraksinasi Pemurnian

The aims of extraction
Isolation a compound  structure

Isolation of identity Compound (marker)

Standardization of extract

Pharmacology effect test

Preparation of dosage form

 2 STRATEGI RISET BAHAN ALAM
DALAM ISOLASI
1. Older strategies:
a. Focus on chemistry of compounds from natural sources, but not on activity.
b. Straightforward isolation and identification of compounds from natural
sources followed by biological activity testing (mainly in vivo).
c. Chemotaxonomic investigation.
d. Selection of organisms primarily based on ethnopharmacological information,
folkloric reputations, or traditional uses.
2. Modern strategies:
a. Bioassay-guided (mainly in vitro) isolation and identification of active ‘‘lead’’
compounds from natural sources.
b. Production of natural products libraries.
c. Production of active compounds in cell or tissue culture, genetic
manipulation, natural combinatorial chemistry, and so on.
d. More focused on bioactivity.
e. Introduction of the concepts of dereplication, chemical fingerprinting, and
metabolomics.
f. Selection of organisms based on ethnopharmacological information, folkloric
reputations, or traditional uses, and also those randomly selected.
Structure of active compound
Isolation a compound 
Natural Product
structure

Phytochemistry Crude drug

Screening
Extraction
Extract
Fractionation
Fraction
Separation -
Purification
Isolate
Characterization
& Identification
Molecular
structure
b
Natural Product

Phytochemistry Crude drug

Screening
Extraction

Phytochemistry Extract
Screening
Standardization

Standardized
Extract
 Natural Product
c
Crude drug
Extraction
Extract
Fractionation

Fraction
Separation -
Purification
Isolate
Characterization
& Identification
Marker
d
Natural Product

Crude drug

Extraction

Phytochemistry Extract
Screening
Standardization

Standardized
Extract
Pharmacology test

Pharmacology
Effect
d
Natural Product

Crude drug

Extraction

Phytochemistry Extract
Screening
Standardization

Standardized
Extract
Formulation

Dosage Form
EXTRACTION

 Extracting of component in
crude drug – selectively with
suitable solvent

Criteria of solvent :

• Dissolve solute
• Selective
• Volatile
• Non toxic
• Non corrosive
• Non expensive relatively
• Viscosity
 PELARUT
 Banyak digunakan :
n-heksana, benzene, diklormetan (CH2Cl2), kloroform
(CHCl3), aseton, etilasetat, metanol, etanol dan air
 Pelarut yang digunakan sebaiknya teknis yang di re-distilasi
atau pa (pro analisis)
Tujuan redistilasi :
Untuk menghilangkan bahan kimia lain yang seringkali ada
dalam pelarut teknis yang dapat mengacaukan proses isolasi
Alkaloid kulit kina :
 Oleh senyawa peroksida dalam pelarut eter
(technical grade) diubah menjadi bentuk
turunan N-oksida oleh senyawa peroksida.
 Senyawa hasil oksidasi relatif mudah larut
dalam air dibanding senyawa awalnya.

HO
N HO
N

O
R
R
N
N
Alkaloid kina Turunan N-oksida dari alkaloid
PENGGOLONGAN PELARUT
A. BERDASARKAN KEPOLARAN

N-Heksana

Kepolaran meningkat
Benzena
Dietileter
Diklorometan
Kloroform
Etilasetat
Aseton
Etanol
Metanol
air
B. BERDASARKAN GUGUS FUNGSI
 Pelarut Hidroksi : Alkohol
 Pelarut Oksigen : Eter, Aseton
 Pelarut Belerang : Cs2
 Pelarut Klor : Kloroform
 Pelarut Hidrokarbon : N-heksana
 Pelarut Nitrogen : Piridin
 Pelarut Asetat : Asam Asetat
C. BERDASARKAN BAHAN ORGANIK / NON ORGANIK
PELARUT ORGANIK : PELARUT NON ORGANIK :

KEUNTUNGAN : KEUNTUNGAN :
 Melarutkan Lebih Slektif  MURAH
 Mdan Mudah Terbakarudah
Diperoleh Kembali KERUGIAN :
KERUGIAN :  Tidak selektif
 Harga Mahal  Tidak tahan lama
 Beberapa Toksik
 PEMILIHAN PELARUT
ATURAN UMUM
Pelarut non-polar (petroleum eter dan heksana) akan larut
senyawa non-polar (lemak dan lilin).
Sedangkan pelarut polar (metanol, etanol dan air) melarutkan
senyawa polar (garam dan gula alkaloid).
(that mean like dissolve like)
Afinitas zat terlarut terhadap fase organik akan meningkat dengan
menggunakan pelarut campuran daripada pelarut tunggal
(kadang-kadang digunakan campuran pelarut untuk meningkatkan
kelarutan).
Example: solublization of an aliphatic carboxylic acid in
ethanol, acetone and a mixture of both.
O------------H-O-CH2-CH3

In ethanol -R-C Hydrogen

bond
O-H

In acetone R-C Hydrogen

CH3
bond
O-H---------O=C
CH3
In a mixture of acetone and ethanol
O HO-C2H5 (ethanol)

R-C CH3
OH O=C (acetone)
CH3
KONDISI YANG HARUS DIPERHATIKAN
PADA WAKTU EKSTRAKSI
1. SUHU
2. PENGADUKAN
3. PENGGANTIAN PELARUT
4. PERBANDINGAN PELARUT – LINARUT
5. UKURAN MATRIKS
SUHU

MEMPENGARUHI BANYAK SOLUT YANG

TEREKSTRAKSI
 SEMAKIN TINGGI SUHU KELARUTAN SEMAKIN
TINGGI
PENGADUKAN
SEL PECAH SEL YANG MASIH UTUH :

PELARUT MUDAH PELARUT

MASUK SEL SOLUT BERDIFUSI KE
MUDAH MASUK LUAR SEL
SEL

DI SEKITAR DINDING
TERJADI SEL TERJADI GRADIEN
KESEIMBANGAN KONSENTRASI
KONSENTRASI
DI ALAM DAN DIFUSI BERHENTI
LUAR SEL

TUJUAN PENGADUKAN :
AGAR TIDAK TERJADI KESEIMBANGAN KONSENTRASI
PERBANDINGAN PELARUT – LINARUT
 CONTOH MASERASI :
BPOM RI 2011
 10 bagian serbuk simplisia dituangi dengan 75
bagian cairan penyari, tutup, biarkan 5 hari sambil
sesekali diaduk, serkai, peras, dengan cairan
penyari secukupnya hingga diperoleh 100 bagian.
2. KEMENKES RI 2013
 Satu bagian serbuk simplisia dalam maserator
ditambah 10 bagian pelarut. Rendam selama 6 jam
pertama sambal sesekali diaduk, diamkan selama
18 jam. Pisahkan maserat
 Ulangi penyarian sekurang-kurangnya 2 kali dengan
jenis dan setengah kali jumlah pelarut
KELARUTAN
(FARMAKOPE INDONESIA)
Jumlah bagian pelarut yang
Istilah kelarutan diperlukan untuk melarutkan
satu bagian zat
Sangat mudah larut Kurang dari 1
Mudah larut 1 - 10
Larut 10 - 30
Agak sukar larut 30 - 100
Sukar larut 100 - 1000
Sangat sukar larut 1000 - 10.000
Praktis tidak larut Lebih dari 10.000
BENTUK EKSTRAK

 EKSTRAK KERING
 EKSTRAK KENTAL
 EKSTRAK ENCER

EKSTRAK ENCER

TIDAK BOLEH DISIMPAN

DALAM WAKTU LAMA
CAHAYA

ARTEFAK DEKOMPOSISI
SUHU PEMEKATAN DENGAN ROTAVAPOR

SUHU < 40⁰C

UNTUK MENGHIDARI DEKOMPOSISI KOMPONEN
TERMOLABIL
Classification of extraction
1. Based on Form

Liquid Solid Extraction

Reflux Continuos extraction

(Soxhlet)
Maceration :
Soaking the crude drug with solvent in certain time

Percolation :
Wetting the crude drug with solvent and flowing the solvent
through the crude drug in certaine time

Continuous extraction (Soxhlet):

The solvent evaporate, condensation, condensate through
the crude drug, get substance from the crude drug.
Liquid-liquid extraction

Gradually extraction
(separation funnel)

Continually extraction (Craig

apparatus)
2. Based on contact time

Gradually extraction

maceration

reflux

LLE
(separation funnel)
Continullay extraction

LLE (craig apparatus)

Continuous extraction
(Soxhlet)
Based on energy

Cold extraction

for thermolabil compound  Senyawa yang

sudah diketahui
to prevent dan termolabil
decomposition/artefact  Mengekstraksi
senyawa yang
component in crude drug belum diketahu
have not know yet

for soft material

Hot extraction

For thermostabil compound

for hard material

Extraction
Using suitable solvent

Extraction

Non polar Polar

solvent solvent
N-Hexana Semi polar EtOH, MeOH
solvent
EtOAc, CH2CL2, CHCl3
When will extraction be finished ?
Extraction will be finished :
1. until colorless
2. extracted > 98 %
EKSTRAKSI CAIR - PADAT
 PROSES PENARIKAN KOMPONEN DARI MATRIKS PADAT

KELARUTAN

PATOKAN EKSTRAKSI CAIR PADAT

‘LIKE DISSOLVE LIKE
PELARUT POLAR melarutkan komponen polar
PELARUT NON POLAR melarutkan komponen non polar
FRACTIONATION
 Pemisahan kandungan kimia ekstrak berdasarkan
polaritas.
 Pemisahan suatu campuran menjadi beberapa bagian
dengan ciri yang berbeda

Fractionation methods :

Liquid-liquid extraction

Chromatography
LIQUID LIQUID EXTRACTION

Substance removal from any liquid to

the other liquid that immiscible, by
shaking repeatedly

1.Separation Funnel
2.Craig apparatus
Terms in LLE

Extractant : Solvent that is

used to extract

Raffinate : Material/liquid that

to be extracted

Solute : Active compound in

raffinate
ONE STEP
LIQUID – LIQUID EXTRACTION
Partition coefficient (Kp) :
C raff
Kp =
C extr
C raff = solute concentration raffinate
C extr = solute concentration in extractant
Jika :
p = fraksi solut tak terekstraksi
q = fraksi solut terekstraksi
V raf = volume rafinat
V ekstr = volume ekstraktan

V raf
U=β=
V ekstr
 jumlah solut tak terekstraksi
p=
Jumlah solut total

C raf . V raf
p=
C raf . V raf + C ekstr . V ekstr

Kp . U
p=
1 + Kp . U
 jumlah solut terekstraksi
q=
Jumlah solut total

C ekstr . V ekstr
q=
C ekstr . V ekstr + C raf . V raf

1 q = 1 - p
q =
1 + Kp . U Prosen solute terekstrasi
% q = (1 - p)x100%
Jika volume ekstraktan = volume rafinat

β=1 U=1
Maka :

Kp 1
p = q =
Kp + 1 1 + Kp
Jika ekstraksi dilakukan n kali
Maka :
Fraksi solut tak terekstraksi = pn
Fraksi solut terekstraksi = qn

Untuk menghitung fraksi solut terekstraksi n kali

jangan langsung menghitung dari qn tapi
menghitung dulu pn baru dicari qn

qn = 1 - pn
 KERJAKAN SOAL BERIKUT INI
1. Jika suatu solut diekstraksi dengan sistem air – heksan
mempunyai nilai koefisien partisi 0,55. Volume air 25 ml,
sedang volume heksan 40 ml. Berapakah % solut
terekstraksi setelah 4 kali ekstraksi dengan masing-masing
tahapan menggunakan volume heksan 40 mL?

2. Jikakoefisien partisi suatu solut dalam sistem air – n-

heksan 0,47 dan solut terlarut dalam air 25 mL
diekstraksi dengan masing-masing 40 mL n-heksan
sebanyak 3 kali. Berapakah % solut terekstraksi setelah 3
kali ekstraksi. Berapakah % solut terekstraksi jika
diekstraksi dengan sekaligus 120 mL n-heksan (1 kali)?
3. Jika koefisien partisi suatu solut 0,49 diekstraksi dengan
sistem air – heksan dimana solut terlarut dalam heksan 50
mL diekstraksi dengan air 60 mL. Berapakah % solut
terekstraksi setelah 4 kali ekstraksi dengan masing-masing
tahapan menggunakan volume air 60 mL?
 Petunjuk mengerjakan soal
 Jika mau menghitung harus ditentukan dulu mana yang
rafinat dan mana yang ekstraktan
 Umumnya yang disebut didepan rafinat
Misal :
Kp = 0,48 pada sistem air – heksan, maka :
Air  rafinat
Heksan  ekstraktan
tetapi jika ada pernyataan Kp = 0,48 pada sistem air –
heksan, solut terlarut pada heksan 50 ml diekstraksi
dengan air 60 ml, artinya :
Heksan  rafinat
Air  ekstraktan
 Hubungan log Kp dan q
 Kurva log Kp
PARAMETER KEEFISIENAN PEMISAHAN
EKSTRAKSI CAIR CAIR
PATOKAN 2 KOMPONEN :
 KUOSIEN PEMISAHAN
 FAKTOR PEMISAH
PATOKAN 2 KOMPONEN
KUOSIEN PEMISAHAN = NISBAH KOEFISIEN PARTISI

 Dalam ekstraksi umumnya yang teribat tidak hanya 1 solut saja

 Ekstraksi akan berhasil memisahkan solut satu dg lainya jika masing-
masing solut mempunyai Kp yang sangat berbeda
 Daya pemisah 2 substansi dinyatakan dg faktor pemisah (α ) :

Kp 1

Kp 2
α>1
 Makin besar α ekstraksi makin baik
Contoh : Campuran X : KpA = 2, Kp B = 0,5
α = 4,0

Kp yang lebih besar  pembilang

FAKTOR PEMISAH
Faktor perolehan kembali B
S B/A =
Faktor perolehan kembali A

S RA
B/A =
R B

Banyaknya A yang terisolasi

R A=
Banyaknya A total

W A yang terisolasi
R A=
(W A ) TOTAL
Ekstraksi Craig
 Menggunakan peralatan Craig yang
diatur fase cair ringan (bj kecil)
ditransfer dari satu tabung ke yang
berikutnya.
 untuk memisahkan dua zat atau lebih,
dengan perbedaan Kp < 0,1.
EKTRAKSI CAIR-CAIR BERKESINAMBUNGAN
 ALAT CRAIG
Contoh soal
 Senyawa A mempunyai Kp = 3,4 dipisahkan dengan alat Craig, Volume rafinat
sama dengan volume ekstraktan. Berapa % fraksi yang terekstraksi pada
tabung no 4, setalh 7 kali ekstraksi.
 Campuran mengandung senyawa X (Kp = 0,32) dan Y (Kp = 0,29) dipisahkan
dengan alat Craig. Volume rafinat sama dengan volume ekstraktan. Bera % X
dan Y dalam tabung no 1, 2, 3, 4, 5 setelah 8 kali transfer. Buat kurva f n,r vs
no tabung untuk kedua senyawa dalam gambar 1