Quimioluminiscencia

2016
 Luminiscencia

 La luminiscencia es definida como la emisión de luz

asociada con la disipación de energía de una sustancia
electrónicamente excitada.

 Si los electrones de un componente luminiscente son

estimulados por una luz en estado normal, estos dan
energía en forma de luz cuando ellos regresan al estado
fundamental.
 Tipos de luminiscencia

 Fotoluminiscencia (fluorescencia): la sustancia es estimulada

por fotones de luz.

 Bioluminiscencia: una reacción química mediada por enzimas es

responsable de la excitación.

 Quimioluminiscencia: se define como la emisión de luz,

normalmente en la región visible o infrarrojo cercano, causada
por los productos de una reacción específica química, en la cual
se involucran las siguientes sustancias según el sistema
automatizado que sea utilizado: éster de acridina, peróxido-
ácido, hidróxido de sodio, fosfatasa alcalina.
 Quimioluminiscencia

 Es la producción de luz a partir de una reacción

química.

 Dos compuestos químicos reaccionan para formar un

intermediario en estado excitado (alta energía), que
se desexcita liberando parte de su energía como
fotones de luz para alcanzar su estado fundamental.
 Las reacciones quimioluminiscentes no suelen
liberar calor, porque en su lugar la energía se
libera en forma de luz.
 Inmunoensayos quimioluminiscentes

 Emplean como sonda moléculas sintetizadas o compuestos

naturales que generan quimioluminiscencia.

 Para que se dé la quimioluminiscencia es necesario que la

reacción produzca un exceso de energía, lo cual es bastante
frecuente sobre todo en reacciones redox.

 Pero el hecho de que el exceso de energía se disipe con emisión

de quimioluminiscencia depende en gran medida de la
estructura molecular de los intermedios o productos de
reacción.
 El inmunoensayo enzimático, que emplea enzimas como
sondas, se desarrolló y rápidamente obtuvo gran
popularidad.

 Las enzimas pueden amplificar las señales dependiendo de la

actividad catalítica de la enzima.

 En un intento de mejorar los sustratos y aumentar la

sensibilidad, se han introducido compuestos cromóforos,
fluoróforos, y más tarde, compuestos quimioluminiscentes.

 Dependiendo del sustrato elegido, el método de ensayo se

podría definir como IEF O IEQ.
 A diferencia de los fluoróforos , la mayoría de
los compuestos quimioluminiscentes
requieren una estimulación química, en lugar
de energía lumínica, para generar una
emisión de luz.

 La reacción de óxidación-reducción es un
proceso común en los ensayos
quimioluminiscentes.
 La amplificación de la señal no se espera de las
sondas quimioluminiscentes porque las moléculas
quimioluminiscentes generan un solo fotón por
descomposición molecular.

 Las sustancias quimioluminiscentes de enzimas

pueden amplificar el número de eventos en un
orden de magnitud 6 veces mayor que el I125. Esto
se le atribuye a la capacidad de amplificación
catalítica que poseen las enzimas.
 Quimioluminiscencia directa

 Generalmente un sustrato y un oxidante en presencia de

algunos cofactores reaccionan para formar un producto o
intermedio de la reacción, algunas veces en presencia de una
catalizador.

 Alguna fracción del producto o intermedio podrá formarse en

un estado electrónico excitado que puede a continuación
relajarse a su estado fundamental con emisión de fotón.
 Quimioluminiscencia indirecta

 El mecanismo es el mismo para la formación del intermedio

electrónicamente excitado, pero este intermedio no puede
emitir directamente el fotón para dar quimioluminiscencia y
requiere la presencia de un fluoróforo al cual le transfiere la
energía, de forma que el fluoróforo se excita y al volver a su
estado fundamental emite un fotón.
 El catalizador, enzima o ión metálico, reduce la energía de
activación y proporciona el ambiente adecuado para la
producción de una alta eficiencia quimioluminiscente
durante el proceso.

 Los cofactores necesarios en ocasiones para convertir uno

o más de los sustratos en una forma capaz de reaccionar e
interaccionar con el catalizador o para proporcionar un
grupo saliente eficaz cuando requiere un marcado para
producir el emisor excitado.
 Instrumentación

 La luz emitida en el transcurso de una reacción química o

bioquímica esta relacionada con la concentración de las
especies participantes y por tanto, es proporcional a la
concentración de las especies participantes.

 Por esta razón, la medida de luz emitida es un indicador de la

cantidad de analito presente y al instrumento básico que es
capaz de realizar estas medidas se llama luminómetro.
 Una de las ventajas más importantes de la
quimioluminiscencia como técnica analítica es la simplicidad
de la instrumentación, que incluye como componentes
principales:

1. Una célula de reacción

2. Un compartimiento cerrado de luz

3. Un dispositivo de inyección y mezcla de reactivos

4. Un detector de luz

5. Un procesador de señal
Fundamento de CLIA
 CLIA

 Es la cuantificación de una sustancia, utilizando una reacción antígeno

anticuerpo, un marcador como indicador de la reacción que puede
ser un éster de acridina u otro que en combinación con peróxido
ácido o hidróxido de sodio, en contacto con la muestra y el analizador
proporcionan la reacción quimioluminiscente.

 El peróxido-ácido provee el agente oxidante para el éster de acridina.

El hidróxido proporciona un cambio de pH necesario para que la
reacción de oxidación ocurra.
 La emisión de luz es causada por los productos de una

reacción química específica. La combinación de las

propiedades de aplicación de una enzima y una reacción de

detección usando quimioluminiscencia o bioluminiscencia

proporciona una alta sensibilidad analítica

 El ensayo de CLIA es de tipo sándwich, en el cual, el antígeno en la

muestra del paciente es sometido en la reacción sándwich, el

anticuerpo se encuentra covalentemente unido a partículas

paramagnéticas y el anticuerpo secundario está marcado con éster

de acridina. Una reacción directa existe entre la concentración de

antígeno en la muestra del paciente y la cantidad de luz emitida

durante la oxidación del éster de acridina.

 Beneficios de los sistemas
quimioluminiscentes

 Los inmunoensayos por quimioluminiscencia evitan los desechos

tóxicos y los resultados que se obtienen son equiparables con RIA.
 Cuentan con refrigeración integrada, conservando los reactivos en
buen estado con el mínimo de manipulación por parte del operador.
 Cuentan con un lector para evitar confusiones y disminuyendo el
tiempo de programación.
 El rango de tiempo para la obtención de los resultados de perfiles.
 La estabilidad de las calibraciones es de 28 días optimizando el costo
de la prueba y la estabilidad de los reactivos va de 8 a 12 meses.
 Tiene la capacidad de procesar un promedio de 60 muestras
simultáneamente.
 Monitoreo de la cantidad de reactivos disponibles
 Las curvas de calibración pueden ser consultadas en cualquier
momento.
 Equipos con tecnología
quimioluminiscente

Architect i1000SR IS 1200 ThunderBolt

Hitachi CLA-1
AccuLite TSH Bio-Flash
Muchas gracias…