Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Bioquímica y Biología Molecular
“Efecto de la concentración del sustrato sobre la velocidad de la reacción”
Juárez Castillón Luis Enrique Moreno Hernández Leonardo
Grupo 3IV1 Sección 4

Introducción: Resultados:
Tubo No. Testigo Problemas
La cinética enzimática estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios 1 2 3 4 5 6
proporcionan información directa acerca del
mecanismo de la reacción catalítica y de la Sacarosa 0.5 0.1 0.2 0.3 0.5 0.8 1
especificad del enzima. Si la concentración de 0.2M (ml)
sustrato se aumenta y todas las demás condiciones Regulador 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
permanecen constantes, la velocidad aumenta hasta de acetatos
un máximo; incrementos posteriores en la 0.005 M, pH
concentración del sustrato no producen efecto sobre 4.7 (ml)
la velocidad de reacción.
A nivel biológico, claramente nunca se va a contar
con una concentración infinita de sustrato ni de Agua (ml) 0.5 0.9 0.8 0.7 0.5 0.2 0
enzimas por lo que las velocidades de las reacciones
Preincubaci 5 minutos a temperatura ambiente
van a estar limitadas a ellas. A pesar de una alta
on
concentración de sustrato que puede ser
.
Enzima 0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
transformado a través de las enzimas, la velocidad de
reacción tendrá un tope a lo cual se le conoce como 10μg/ml
saturación de la reacción, y es el momento en el cual (ml)
se alcanza una velocidad máxima en la reacción, es Incubación 5 minutos a temperatura ambiente
decir, la velocidad se vuelve constante debido a la
diferencia en la proporción enzima-producto Inactivación 0.5ml 0.5 ml de 3,5-DNS a cada tubo
existentes. No existe la concentración suficiente de 3,5-
para poder catalizar todas las reacciones y la DNS+0.
velocidad se estanca, por lo que se afirma que 5ml de
la velocidad de la reacción será directamente enzima
proporcional a la concentración del sustrato. Desarrollo 5 min a 92°C (en baño María)
de color
Objetivos: Dilución Colocar en baño con hielo y diluir con 2.0ml de agua
destilada en cada tubo
•Analizar el efecto de la concentración del sustrato Leer en un espectrofotómetro a 540nm
sobre la velocidad de la reacción enzimática .
•Determinar y calcular la constante de Michaelis- Absorban
Menten de forma gráfica por los métodos de cia
Michaelis-Menten y Lineweaver-Burk. Azúcar 5μM 1μM 2μM 3μM 5μM 8μM 10μM
reductor
(μmoles)/
2.0ml
Velocidad 0 0.1 0.2 0.3 0.5 0.8 1
(unidades
de
invertasa)
Concentra 1M 2M 3M 5M 8M 10M
ción de
sustrato
(moles/L=
M)
Cálculos:
•Cálculos de la concentración del sustrato.
•Cálculos azúcar reductor.
Y= mx + b
Y= 1/V0
Tubo 1. Tubo 2. Tubo 3.
m= Km/VMAX
1000ml - 1000ml - 1000ml – x= 1/S
b= 1/ VMAX
0.005M 0.005M 0.005M

0.10ml - X (2)M 0.20ml – X (2) 0.30ml – X •Interpolando

M (2) M X Y
X= 1 μM
(1/S) (1/V0)
X= 2μm X= 3μM
0 0
Tubo 4. Tubo 5. Tubo 6.
1 1.50
1000ml – 1000ml – 1000ml –
0.005M 0.005M 0.005M 0.5 1.25
0.50ml – X (2) 0.8ml – X (2) M 1.0ml – X (2) 0.3 1.166
M M
X=8μM 0.2 1.100
X=5μM X= 10μM
0.125 1.062
•Cálculos velocidad (unidades de invertasa).
0.1 1.050

b= 0.714
m=0.9548

Discusión.
Realizando la observación de las gráficas que se
obtienen en los resultados, se puede apreciar la forma
en que interactúa Vo con cada uno de los datos
obtenidos, en la realización de la práctica, o bien, en
los cálculos realizados para poder hacer las gráficas.
Se observa que todos los datos afectan de manera
directa la acción de la velocidad de la reacción
•Ecuación de Michaelis-menten
modificando Vo si se modifica alguno de estos datos.
Por otra parte, se obtuvieron los valores de la velocidad
de reacción de la enzima, en una gráfica que al
principio se describe como lineal, porque a bajas
concentraciones de sustrato la enzima permanece en
equilibrio constante, pero con el aumento de la
concentración se va curvando, identificando por varios
métodos, como el de Michaelis-Menten, la velocidad
inicial o media a partir de la Vmax que se usa como un
valor constante, y la afinidad de la enzima sobre los
sustratos (Km); la diferencia entre estos es la facilidad
que hay dentro de sus ecuaciones para distinguir a Km
y Vmax.
Conclusiones:

Las enzimas son moléculas de naturaleza

proteica, que catalizan reacciones químicas,
siempre que sean termodinámicamente posibles.
Una enzima hace que una reacción química que
transcurre a una velocidad muy baja sea
cinéticamente favorable, es decir que transcurra
a mayor velocidad que sin la presencia de
enzima. En estas reacciones, las enzimas actúan
sobre unas moléculas denominadas sustratos.
Un sustrato es una molécula sobre la cual actúa
la enzima, los cuales se convierten en moléculas
diferentes denominadas productos. Casi todos
los procesos en las células necesitan enzimas
para que ocurran a unas tasas significativas,
además se pudo notar que la velocidad de
reacción enzimática tiene una relación
proporcional directa con la concentración de
enzima y a mayor cantidad de enzima mayor
velocidad de reacción hasta alcanzar su
velocidad máxima.

Bibliografía:

•Acevedo F., Gentina J.C., Illanes A. (Eds.) 2002.

Fundamentos de Ingeniería Bioquímica.
Ediciones Universitarias de Valparaiso,
Universidad Católica de Valparaíso, Chile, 273
pp.
•Barredo J.L. 2005. Microbial Enzymes and
Biotransformations. 1aEd. Humana Press. USA.
319 pp
•Karkas T., Onal S. 2012. Characteristics of
invertase partitioned in poly(ethylene glicol)/
magnesium sulfate aqueous two-phase system.
Biochemical Engineering Journal, 60: 142-150.