UROCULTIVO

DEFINICION
• Urocultivo: Es un estudio de orina,
que por medio de cultivo
controlado, busca diagnosticar
infección urinaria sintomática o
asintomática en una población de
riesgo.
TOMA DE MUESTRA
 La muestra para Si el traslado al Este

Conservación y urocultivo debe

refrigerarse a
laboratorio
demora más de 15
procedimiento
permitirá que el

trasporte de la 4- 8 ºC
inmediatamente
minutos, debe
colocarse el
número de
microorganismos

muestra: después de
recolectada.
recipiente con la
orina dentro de
permanezca
relativamente
un contenedor constante por un
con hielo. tiempo no mayor
de 24 horas.
 Antes de iniciar el estudio de
la muestra, debe conocer
algunos datos concernientes
a la misma.

TENER EN CUENTA
PROTOCOLO
EXAMEN MACROSCOPICO
color, aspecto, pH, densidad.
 EXAMEN
MICROSCOPICO
OBSERVACION AL MICROSCOPIO
 TINCION GRAM

1 2 3 4 5

9 8 7 6
LO QUE OBSERVAREMOS…
AGARES PARA UROCULTIVO
• Agar Azida ( Gram positivos)
• Agar Macconkey (Gram Negativos)
• Agar Muller Hilton (Para hacer
positividad de medicamentos)
 El asa se introduce y se saca
verticalmente del bote con
orina

El asa toca el centro de de

SIEMBRA la placa a partir del cual el

inoculo se extiende en forma
de una línea a lo largo del
diámetro de la placa

Sin agregar mas orina, con la

misma asa se hacen estrías
sobre la placa cruzando
varias veces la línea del
inoculo inicial
 MEDIOS DIFERENCIALES O BIOQUIMICAS

1. CITRATO 2. TSI 3. LIA 4. UREA 5. MIO

 MODO DE SIEMBRA

. Se siembra en forma de estría desde el

CITRATO
fondo hacia el pico

TSI . Se siembra haciendo 1 punzada y estría

 MODO DE SIEMBRA

. Se siembra haciendo 3 punzadas

LIA mas estría

. El modo de siembra es haciendo

UREA
estría
 MODO DE SIEMBRA

. Se siembra haciendo
MIO punzada
 DIAGNOSTICO DE
LAS BACTERIAS

S.
E. COLI PROTEUS KLEBSIELLA
FAECALIS
STAPHYLOCOCCUS SAPROPHYTICUS

- Es un coco Gram positivo

- Anaerobio facultativo
- No formador de cápsula
- No formador de espora
- Inmóvil.
- Coagulasa Negativa
- Catalasa positiva
- Oxidasa negativa
- Causa frecuente de infecciones del tracto
urinario en mujeres jóvenes
 CULTIVO
Crece en agar sangre o chocolate, Agar Sales y Manitol.
ELISA, PCR, IFI. Agar Sal y Manitol:
- Crecen
acidificando
medio circulante a
Agar sangre: la colonia.
- No produce beta
hemolisis.
- Sus colonias lisas,
elevadas, convexas
y brillantes de
color blanco
grisáceo.
 IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICAS
PRUEBA DE LA CATALASA

Fundamento: La enzima catalasa descompone el peróxido de

hidrógeno (H2 O2 ) en agua y oxígeno. De esta manera las bacterias se
protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del
metabolismo aerobio de los azúcares.

Procedimiento:
Se coloca una gota de H2O2 al 3% sobre un portaobjetos y luego se transfiere
una porción de colonia sobre el H2 O2 realizándose una emulsión.
En lo posible debe tomarse la colonia a partir de un medio sin sangre, ya que los
eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden falsear los resultados. Esta
prueba también puede realizarse a partir de un cultivo en tubo, simplemente
colocando unas gotas de H2 O2 dentro del mismo.

Interpretación de resultados: el desprendimiento de burbujas se

considera una prueba positiva.
PRUEBA DE LA COAGULASA

Test en tubo Procedimiento:

Se emulsionan varias colonias en un tubo con
0,5 ml de plasma citratado de conejo. Se incuba
a 35 ºC y se chequea la formación del coágulo a
las 4 horas.
Si es negativo se re incuba toda la noche y se
procede a su lectura a las 18 horas. La lectura a
las 4 horas es fundamental porque en alguna
oportunidad puede suceder que las
fibrinolisinas de S. aureus lisen el coágulo luego
de 18 horas de incubación y de esta manera se
produzcan un test falso negativo.

Interpretación de resultados: Se observa la

formación de un coágulo total o parcial si el test
es positivo.
 SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA
Objetivo:
Separar S. saprophyticus (resistente a la novobiocina) de los demás
estafilococos coagulasa negativos.
Fundamento:
Varias especies del género Staphylococcus son resistentes a la
novobiocina (disco de 5 µg.) dentro de las cuales se encuentra S.
saprophyticus.
Procedimiento:
Se siembra una placa de agar sangre o agar Mueller-Hinton como si se
fuera a realizar un antibiograma. Se utiliza un hisopo embebido en una
suspensión, con una turbidez equivalente a un Mc Farland 0,5, de la
cepa a estudiar. Luego se aplica el disco de novobiocina y se incuba a 35
ºC por 18 horas.
Interpretación de resultados:
Un halo de inhibición de crecimiento menor o igual a 16 mm
corresponde a S. saprophyticus. Un halo de inhibición mayor de 16 mm
corresponde a otros estafilococos coagulasa negativos.
 ENTEROCOCCUS FAECALIS

- Es un coco Gram positivo, agrupadas en

pares o cadenas cortas, diplococos y cocos
simples.
- Anaerobias facultativas
- Catalasa negativa
- Es resistente a muchos agentes
antimicrobianos de uso común
- En los pacientes, los lugares de infección
mas frecuente son el aparato urinario, las
heridas infectadas, etc.
 CULTIVO Agar Columbia :
Colonias de Enterococcus
faecalis cultivadas en agar
Columbia con 5% de sangre de
oveja desfibrinada, 24 horas en una
Crece en Agar sangre, Agar bilis de Esculin (BEA),
atmósfera aeróbica, 37 °
Agar Columbia con 5% de sangre de oveja desfibrinada. C. E.faecalis generalmente exhibe
hemólisis gamma en agar de
sangre de oveja, pero algunas
cepas son alfa-hemolíticas o
incluso beta-hemolíticas (una
Agar sangre: hemolisina codificada por un
- Sus colonias lisas, plásmido, llamada citolisina ).
elevadas, convexas
color blanco grisáceo.
- Colonias no
hemolíticas (gamma-
hemolíticas).
- Cultivo 24 horas,
ambiente aeróbico, 37
° C.
Agar bilis de Esculin (BEA):

Los miembros del

género Enterococcus son capace
s de crecer en presencia de bilis
al4% e hidrolizar la esculina a
glucosa y esculetina. Esculetin
se combina con iones férricos
para producir un complejo
negro visible como zonas negras
alrededor de las
colonias. Cultivo 24 horas en
atmósfera aeróbica, 37 ° C.
Las pruebas bioquímicas que permiten el diagnóstico de género son:
- Catalasa (negativa),
- Hemolisis (y)
- NaCl 6,5% (+)
- Bilis esculina (+)
- PYR (+)

Para el diagnóstico de especie se aconseja determinar:

- Acidificación de arabinosa (ya sea el azúcar disuelta en caldo o por medio de tabletas
comerciales)
- Tolerancia al telurito (agar telurito al 0,04% o tableta comercial).
- La determinación de movilidad en medio MÍO (mo-vilidad-indol-ornitina) y la presencia de
pigmento amarillo, observado tomando cultivo con tórula de una placa de agar sangre, son
pruebas complementarias para la diferenciación de especies sin relevancia desde el punto de
vista de diseminación de resistencia.
 ANTIBIOGRAMA
Se puede utilizar método de difusión por disco (Kirby-Bauer) o determinación de CIM (E-test, microdilución,
o métodos automatizados).
El método Kirby-Bauer (método de difusión en agar) es empleado para determinar la sensibilidad de
un agente microbiano frente a un antibiótico o quimioterápico. Este método comprende lo que se
denomina un antibiograma o prueba de susceptibilidad bacteriana frente a drogas específicas.

En el test de Kirby-Bauer, los filtros blancos

que contienen antibiótico son colocados en
una placa con bacterias (Agar Müller-Hinton).
Los halos blancos donde se observa un
escaso crecimiento bacteriano indica
susceptibilidad al antibiótico testado.
 ESCHERICHIA COLI

CARACTERÍSTICA DE LA BACTERIA
- Bacilos Gram negativo
- No espuralados
- Oxidasa negativo
- Catalasa positivo
- Móviles por flagelos perítricos
- Miden 0.5 µ de ancho por 3 µ de largo
- No exigente
- Fermenta glucosa y lactosa con producción de gas
- Anaerobio facultativo
- Agente etiológico de septicemia, infecciones del tracto
urinario, meningitis neonatal y gastroenteritis
- Las infecciones son endógenas, mientras que las
gastroenteritis son exógenas.
- Temperatura de crecimiento preferentemente es 37 °C
(mesotermo).
 CULTIVO

(Medios de cultivo generales o selectivos)

Las colonias de E. Coli en agar E.M.B. (eosina

y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm de
diámetro, un centro grande de color oscuro e
incluso negro, y tienen brillo verde metálico
cuando se observan con luz refleja.
En agar MacConkey las colonias son rojas
con halo turbio, colonias circulares, convexas
y lisas con bordes distintivos. Lactosa (+).
Medio no selectivo agar sangre, algunas
cepas produce hemolisis.

Agar Sangre
TINCIÓN GRAM

Bacilos Gram negativos

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
(PRUEBAS BIOQUÍMICAS)
ANTIBIOGRAMA
En el urocultivo se aíslan más de 105
ufc/mL de Escherichia coli con el siguiente
antibiograma, resistente a ampicilina,
amoxicilina/clavulánico,
piperacilina/tazobactam , cefuroxima y
cefepima; sensible a cefoxitina, cefazolina,
carbapenemas, aztreonam, cefotaxima y
ceftazidima. También era sensible a
aminoglucósidos, quinolonas,
nitrofurantoína y fosfomicina, y resistente a
cotrimoxazol.
 Proteus
Características
•Oxidasa Negativo
•No fermentan Lactosa
•Ureasa Positivo
•Motilidad (algunos)
•Pleomorficos
•No esporulados
•No encapsulados
•Producen fenilalanina desaminasa
•Producen indol (menos el P. Mirabilis)
 CULTIVO
Las muestras se pueden sembrar
en medios de agar nutriente
simple o en agar donde sus
colonias tienden a diseminarse
por la superficie. Se siembra en
medio diferencial de McConkey
y en medios semisólidos
muestra movilidad.
Agar McConkey:
- Produce colonias
blandas o incoloras,
ya que no ataca a la
lactosa
Agar Sangre:
- Proteus vulgaris en agar
sangre se observa
claramente el efecto de
swarming, lo que
evidencia la gran
motilidad de la bacteria.
 IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICAS

Se determina la
fermentación de azúcares,
hidrólisis de la urea,
producción de indol y
sulfhídrico, crecimiento en
el medio de citrato.
Diferenciación de especies de Proteus mas
comunes en clínica
 Antibiograma Método Kirby-Bauer

Sobre la superficie de una placa de agar Müller-Hinton (medio de cultivo

rico) se inocula una cantidad estandarizada de bacterias , sembrándolas
de forma uniforme para obtener después de la inoculación un "césped"
bacteriano. A continuación se colocan discos de papel de
filtro impregnados con concentraciones conocidas de los
diferentes antibióticos. Se incuba la placa durante 18-24 horas a 37 °C y
luego se miden los halos de inhibición de desarrollo.
Los resultados se expresan
como: Sensible (S), Intermedio o Moderadamente sensible (I)
y Resistente (R).
Microorgani
Fenotipo Amp AMC TIC KZ CXM FOX CTX CAZ CEP IMP
smo
Proteus
Salvaje S S S S S S S S S S
mirabilis

Proteus
Salvaje R S R R R S S S S S
vulgaris
Desrepri
R S R R R S R S S S
mido

AMC: amoxicilina/clavulánico; Amp: ampicilina; CAZ: ceftazidima; CEP: cefepima; CTX: cefotaxima; CXM:
cefuroxima; FOX: cefoxitina; IMP: imipenem; KZ; cefazolina; R: resistente; r: sensibilidad disminuida; S:
sensible; TIC: ticarcilina.
 Klebsiella
Características morfológicas:
Bacilos gram negativos cortos 1-2um por 5um.
Capsulados
Inmóviles
No forman edosporas
Se disponen en cadenas cortas o pares
Propiedades metabólicas
Anaerobio facultativo
Temp. Óptima de cultivo 37°C
No exigentes para cultivo
Hidrolizan Urea
Poseen enzimas betalactamasas
Especies:
K. pneumoniae, K. oxytoca, K. ozaenae, K.
rhinosclerinatis.
 CULTIVO
Estas bacterias se desarrollan en
muchos medios de cultivo, tanto Agar McConkey:
líquidos como sólidos de base - Colonias mucoides
agar, entre los que destacan: de color rosado (por
• Agar Nutritivo la fermentación de la
• Agar Mc. Conkey fructosa)
- Mas selectivo
• Agar Sangre
agregando inositol y
• Agar Chocolate carbenicilina.
• Caldo agar infusión cerebro
corazón, etc.
 IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICAS

 Fermentan la glucosa
 Reucen los nitratos
 Son catalasa positivos
 Oxidasa negativos
 Fermentan la lactosa
 Son Urea positivos
K. Pneumoniae
Antibiograma de K. Pneumoniae
 LINKOGRAFIA
• http://codeinep.org/wp-content/uploads/2017/02/Enterococcus.pdf
• http://www.cect.org/certstr/CECT481es.pdf
• https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-10182007000400009
• https://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-
articulo-lectura-interpretada-del-antibiograma-cocos-S0213005X10000844
• https://www.who.int/drugresistance/infosharing/WHO-
CDS_CSR_RMD_2003_6_Manual_Laboratorio.pdf
• http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioAntibioticos.htm
• https://www.ecured.cu/Proteus_(bacteria)
• http://microbitosblog.com/2010/06/14/morfologia-colonial-bacteriana/
• http://antimicrobianos.com.ar/ATB/wp-content/uploads/2013/02/Grupo-KES-boletin-
13.pdf