OBSTETRICIA Y REPRODUCCIÓN

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES (ET/MOET)

DEFINICIÓN:

“Recogida, manejo y transferencia”

FASES:
1. Selección de hembras donantes.
2. Selección de hembras receptoras.
3. Aplicación de tratamientos de superovulación (donantes) y
sincronización de celos (receptoras).
4. Recogida de blastocistos.
5. Valoración y selección de blastocistos.
6. Conservación de blastocistos.
7. Splitting o sexaje.
8. Transferencia de blastocistos.
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BREVE RESEÑA HISTÓRICA:

1ª ET Heape, 1890 Conejos belgas y de

angora
1ª ET en vacuno Willet el al, 1951 Piezas de matadero
1ª ET en porcino Kvasnickii et al, 1951 Quirúrgica
Polge y Day, 1968 No quirúrgica

1ª ET en ovejas y Warwick et al, 1934

cabras

1ª ET en caballos Orugi y Tsutsumi,

1974
1ª ET en humanos Steptoe y Edwards, Bebé probeta
1978

1º ET en gatos Kraemer et al, 1979

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INDICACIONES:

•Control de enfermedades: permite el tratamiento de embriones.

•Explota el material genético de reproductoras excelentes.
•Facilita de difusión de material de alto valor genético y libre de enfermedades.
•Adelanta la obtención de descendencia en hembras.
•Permite superar algunos casos de infertilidad.
•Preservar especies en peligro de extinción.
•Producción de gemelos idénticos para investigación.
•Producir descendencia del sexo deseado.
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OTRAS TÉCNICAS RELACIONADAS:

-OPU (Ovum pick-up): recogida de oocitos mediante punción-aspiración

vía transvaginal de los folículos.

IVP (Producción in vitro) = IVM-IVF-IVC

ET fresco o congelado

SEXAJE: transferir fresco o congelado

SPLITTING: división y ET fresco

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Día 1 Celo OPU, IVM
2 IVF
3 IVC
4 OPU, IVM
5 IVF
6 IVC
7 OPU, IVM
8 IVF
9 2 Embr. IVC
10 OPU, IVM
11 2xHormon IVF
12 2xHormon 2 Embr. IVC
13 2xHormon OPU, IVM
14 2xHor.+PG IVF
15 2 Embr. IVC
16 Celo, IA OPU, IVM
17 IVF
18 2 Embr. IVC
19
20
21 2 Embr.
22
23 5 Embr.
24 2 Embr.
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SELECCIÓN DE HEMBRAS DONANTES

• Valor genético alto.
• Buen estado de salud, sin enfermedades.
• Aptas como reproductoras.
• Fáciles de manejar, en la medida de lo posible
• Mejores resultados en hembras adultas.

SELECCIÓN DE HEMBRAS RECEPTORAS

• Buen estado de salud, sin enfermedades.
• Aptas como reproductoras y ciclicidad normal.
• Fáciles de manejar.

Vacuno: las novillas tienen mejor fertilidad pero es más difícil atravesar el
cuello. En vacas hay que esperar unos 60-70 días postparto,
comprobando así que los ciclos son de duración normal.
Yegua: entre 3 y 10 años. No usar el celo del potro.
Cerda: Nulíparas o multíparas.
Pequeños rumiantes: A partir de un año, siendo mejor durante la estación
reproductiva.
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SUPEROVULACIÓN Y SINCRONIZACIÓN DE CELOS:

OBJETIVO:

1. Superovulación:
Obtener el máximo número de blastocistos viables.
FSH-------------------eCG
DONANTES

2. Sincronización:
Conseguir ambientes uterinos similares/sincronizados.
RECEPTORAS
PGF2a (cuando hay CL)

PROGESTÁGENOS (implantes o espirales intravaginales):

cuando no hay CL o se hace a ciegas.

**Controlar la formación de CLs antes de la transferencia

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TRATAMIENTO 1 (FSH): DONANTES RECEPTORAS

0 PGF2a

11 PGF2a

13-14 celo

PGF2a 16

25 pm 6 mg FSH

26 am 6 mg FSH

26 pm 4 mg FSH

27 am 4 mg FSH PGF2a 27

27 pm 2 mg FSH

28 am 2 mg FSH + PGF2a

28 pm 2 mg FSH + PGF2a

29 am 2 mg FSH

CELOS (detectar y anotar) 28-32

30 am celo

30-31 IA a las 12 y 24 h post-celo

37 LAVADO Y RECOLECCIÓN TRANSFERENCIA 37

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TRATAMIENTO 2 (eCG): DONANTES RECEPTORAS

0 CELO

PROGESTAGENOS 2

9-10 2500-3000 UI eCG

12 PGF2a RETIRADA PROGEST. 12

14-15 IA a las 12 y 24 h post-celo CELO 14-15

17 ANTI-eCG

21 LAVADO Y RECOLECCIÓN TRANSFERENCIA 21

DONANTES RECEPTORAS
0 PROGESTAGENOS PROGESTAGENOS 0

8 2500-3000 UI eCG

10 RETIRA PROGEST+ PGF2a RETIRADA PROGEST. 10

12 IA a las 12 y 24 h post-celo CELO 12-13

15 ANTI-eCG

19 LAVADO Y RECOLECCIÓN TRANSFERENCIA 19

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TÉCNICAS DE RECOGIDA DE BLASTOCISTOS

A)METODOS QUIRÚRGICOS (Rowson et al., 1969- Cambridge)

- ANESTESIA GENERAL---Laparotomía media ventral

- ANESTESIA LOCAL-------Laparotomía por el flanco

B) METODOS NO QUIRÚRGICOS

-Anestesia epidural-------lavado uterino vía transcervical

•¿Qué material usamos? Sondas tipo Foley de dos (Catéter de Rush) o tres
vías
•¿Cuándo?: en el día 7 del ciclo.
•¿Qué esperamos recoger? Blastocistos
•¿En qué parte del útero se encuentran? En la parte distal.
•¿Con qué líquido lavamos el útero?
DPBS*, PBD, M16, Ham´s F10, TCM 199, TALP-HEPES.
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PAUTA:
1- Anestesia epidural (5ml. procaína 2%) y limpieza aparato genital externo
2- Dilatar cuello uterino (no siempre)
3- Fijar la sonda en el cuerno ipsilateral
4- Introducir 300-500 ml. de líquido de lavado templado, pH = 7,2-7,5 (DPBS
+ 1% suero fetal bovino) y recoger.
-Mediante jeringa, decantando en botella.
-Mediante sistema cerrado de lavado con filtro (0,75 microm.).
5- Lavar filtros sobre placa de Petri o decantar en botella.
6- Búsqueda de blastocistos, valoración, selección y envasado
(opcional la criopreservación, sexaje, splitting…)
7- Tratar a las donantes para evitar que queden gestantes mediante PGF2a.
Iniciar un nuevo tratamiento de superovulación a los 60-70 DÍAS (2 ciclos).
DQTA (donor quick turn around): 40 DIAS
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VALORACIÓN Y SELECCIÓN DE LOS BLASTOCISTOS RECOGIDOS:

CRITERIOS MORFOLÓGICOS/MORFOMÉTRICOS

CIGOTO: 1 célula (día 0-1 postcelo)

BLASTOCITO: fase de desarrollo de 2/4/8 blastómeros (día 1-5 postcelo)

MÓRULA: 16 blastómeros (día 5-7 postcelo)

TEMPRANA: blastómeros de forma esférica
COMPACTA: blastómeros de forma poligonal

BLASTOCISTO: aparece cav. blastocélica

TEMPRANO (7-8 postcelo): tiene 100 células
EXPANDIDO (8-10 postcelo): tiene 120 células y la zona
pelucida se adelgaza.
ECLOSIONADO (9-11 postcelo): tiene 160 células.
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GRADO 1=EXCELENTE-----------------> 60-80% GESTACIONES

Perfectamente simétrico
Granulación uniforme
Coincide su estado de desarrollo con la edad
Espacio perivitelino uniforme

GRADO 2= BUENO-----------------------> 50-70% GESTACIONES

Ligeras asimetrias (p.e. zona pelucida oval)
Granulación uniforme
Coincide su estado de desarrollo con la edad
Espacio perivitelino no totalmente uniforme

GRADO 3= REGULAR-------------------> 30-40% GESTACIONES

Signos de degeneración en algunos blastómeros
No es simétrico
Menor tamaño que el que le corresponde por su desarrollo
Blastocele colapsado

GRADO 4= POBRE------------> 12-20% GESTACIONES. NO SE TRANSFIERE.

No es simétrico
Granulación no uniforme
Blastómeros vesiculados
Ausencia de compactación en los blastómeros
Menor tamaño

GRADO 5= DEGENERADO------------> NO SE TRANSFIERE

Degeneración pronunciada
Puede que no sea posible determinar su fase de desarrollo
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CONSERVACIÓN DE BLASTOCISTOS

CONSERVAR TRANSFERIR FRESCOS

•REFRIGERADOS: 0-4ºC durante 24 h.
•CONGELADOS:

CONGELACIÓN CONVENCIONAL: Método lento (0,5ºC/min)

Etilenglicol 1,5 M, equilibrar 20 min. y cargar en pajuela de 0,25 ml.

Glicerolización: Glicerol 10% en PBS + 0,4% BSA, equilibrar 20 min y cargar en paj. de 0,25 ml

PAUTA DE CONGELACIÓN

-5,5ºC durante 1-3 min. (baños de metanol)

Seeding
Equilibrado a –5,5 ºC /15 min
Descenso a 0,5ºC/min hasta llegar a –32ºC
Meter en NL

VITRIFICACIÓN
Método rápido (30.000ºC/min)-----------NL + presión negativa
Método Lento (8.000ºC/min)-------------NL
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DESCONGELACIÓN DE BLASTOCISTOS

- Etilenglicol: descongelar 20 seg. a 30ºC y hacer transferencia directa.

- Glicerol: descongelar 20 seg. a 30ºC, pasar el blastocisto a:

a) soluciones decrecientes de glicerol (6,6%, 3,3% y 0% en PBS + 10% Suero fetal

bovino) + 0,3 M sucrosa, durante 5 minutos.

b) única solución de sucrosa 34,2 p/v (hipertónica) durante 1 minuto y lavamos 3

veces en DPBS.

-Vitrificación: descongelar 5-10 seg. a 20ºC y transferir.

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TÉCNICA DE TRANSFERENCIA

- Método no quirúrgico (transcervical).

- Anestesia epidural (opcional)
- Limpieza de recto y zona vulvar.
- Colocación de funda de protección.
- Introducción del catéter con aperturas laterales.
Metálico
Funda desechable
- Técnica similar a la IA.
- Tasa de gestación: 50-60%

CUIDADOS:
- Reducir al máximo el stress.
- Evitar cambios de alimentación, de ubicación, antiparasitarios, etc. Al menos 3
semanas antes
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TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN CERDA

•DIFUSIÓN DE MATERIAL GENÉTICO ENTRE GRANJAS

•ELIMINAR EL RIESGO SANITARIO AL INTRODUCIR NUEVAS LÍNEAS GENÉTICAS

•ADAPTACIÓN DE LOS LECHONES AL NIVEL DE ENFERMEDAD

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Selección de donantes
Nulíparas (esperar al 3º celo)
Multíparas (mayor número de embriones)

Selección de receptoras

Superovulación
eCG: dosis única 1000 UI/A en el día 15-16 (inicio fase folicular)
Altrenogest (18 días) + eCG (d19) + HCG (d22)

Recogida de embriones
Método quirúrgico: lavado de trompas (d2) o de cuernos (d 5-6). Puede hacerse
cada 3 semanas.

Transferencia
Método no quirúrgico:
Catéter Universidad de Murcia-Missouri, Colorado
Acortando los cuernos.
Método quirúrgico:
Laparotomía media ventral.

Congelación
Vitrificación, delipidación, congelación lenta.
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TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN OVEJA Y CABRA

Selección de donantes
Jóvenes (4-6 años), buen estado reproductivo, en la estación.
Selección de receptoras
En el mismo estado que la donante, buen estado reproductivo
Superovulación
eCG: 1.000 UI – 24 h. antes de retirar las esponjas
FSH:
20 mg de FSHp repartida en 3 días (cada 12 h.)
8 mg de FSHo repartida 3 días (cada 12h).
Recogida de embriones
Sacrificio y lavado de cuernos y oviductos.
Quirúrgico: laparotomía y lavado retrógrado de oviductos.
No quirúrgico: laparoscopia y exteriorización o transcervical.
Transferencia
Quirúrgica: laparotomía media ventral
No quirúrgica: laparoscopia
Congelación
Ver vacuno
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TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN YEGUA

DEFECTOS REPRODUCTIVOS-SUBFERTILES
POTRAS DE DOS AÑOS: UNA CRIA POR AÑO
YEGUAS DE GENÉTICA SUPERIOR
YEGUAS DE COMPETICIÓN
YEGUAS QUE PAREN AL FINAL DE LA ESTACIÓN
Selección de donantes
Buen estado reproductivo, jóvenes.
Selección de receptoras
Yeguas de entre 3-10 años, cíclica, sin patologías reproductivas
Fácil manejo, buena capacidad maternal y lactacional
Superovulación
Malos resultados
Recogida de embriones
No quirúrgico (flushing)-día 7
Transferencia
Yeguas ovariectomizadas
No quirúrgica-cuerpo del útero
Congelación.
Muy limitada