Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir
según cómo esté dispuesta la fase estacionaria: Cromatografía plana. La FE se fija sobre una placa plana o a los intersticios de un papel y la FM se desplaza a través de la fase estacionaria por capilaridad o por gravedad.. Las principales técnicas son: ◦ Cromatografía en papel ◦ Cromatografía en capa fina Cromatografía en columna. la FE se introduce en una columna estrecha a través de la cual pasa la FM por efecto de la gravedad o de una presión aplicada.Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen: ◦ Cromatografía de líquidos ◦ Cromatografía de gases ◦ Cromatografía de fluidos supercríticos Según el procedimiento de separación ENSANCHAMIENTO DE BANDA Y EFICACIA DE UNA COLUMNA CROMATOGRÁFICA
La eficacia de la separación de los componentes de una
mezcla en una columna cromatográfica guarda una estrecha relación con la forma y la separación de los picos cromatográficos que se reflejan en el cromatograma. Teoría de los platos teoricos Considera que una columna cromatográfica está constituida por una serie de capas estrechas, discretas pero contiguas, denominadas platos teóricos, en los cuales se establece el equilibrio de distribución de cada soluto entre la fase móvil y la fase estacionaria.
Podemos definir, entonces, plato teórico como la longitud de una
columna en la que el soluto experimenta un equilibrio completo entre las dos fase. El número de platos teóricos N de una columna de longutid L será:
Cuantos más platos teóricos formen una columna, mayor será su
eficacia (o lo que es lo mismo, cuanto menor sea la altura de plato mayor será la eficacia). Teoría cinética de la cromatografía Difusión en remolino o difusión de Eddy: A menor velocidad de flujo, la mayoría de las partículas prueban muchos caminos, llegando en promedio muy próximas al valor medio, no originando ensanchamiento de banda Difusión longitudinal: Migración de las moléculas o iones desde la zona más concentrada hacia las mas diluidas. A menor flujo de la fase móvil incrementa el ensanchamiento, debido a que el analito tiene más tiempo para realizar difusión Resistencia a la transferencia de masa entre la fase móvil y la fase estacionaria. Estos tres factores se relacionan con la altura de plato mediante la ecuación de van Deemter: Aplicaciones Cromatografía de exclusión molecular La cromatografía de exclusión molecular (Size Exclusión Chromatography, SEC) es el nombre general para los procesos de separación de biomoléculas de acuerdo a su tamaño cuando una solución fluye a través de una cama empacada con un medio poroso Cromatografía de intercambio iónico La cromatografía de intercambio iónico (Ion Exchange Chromatography, IEC) separa las moléculas en base a su carga ionica neta. Cromatografía de fase reversa La cromatografía de fase reversa (Reversed Phase Chromatography, RPC) es una técnica de purificación capaz de separar componentes con características muy similares, como proteínas que difieren en solo un aminoacido e isomeros conformacionales de péptidos