Tatiana Rendón R.

- Fitoquímica

Bioensayos aplicables a
productos naturales
High Throughput Screening
(HTS)
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¿Qué es un bioensayo? Lenteja de agua

Herramienta de diagnóstico para Una prueba de toxicidad usada para

determinar el efecto de agentes y/o determinar la dosis o concentración de
compuestos, sobre organismos un tóxico que provoca una cierta
prueba bajo condiciones de respuesta en una colección de
laboratorio. organismos.

Es el uso de un organismo vivo como

un agente de prueba para la
determinación de la presencia o
concentración de un compuesto
químico o un efecto ambiental que
puede ser perjudicial..
.
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“CUALQUIER SUSTANCIA PRODUCIDA POR LA

VIDA”

Este término engloba todos los materiales extraídos de la naturaleza para usos
antrópicos. Estos son compuestos formados principalmente por carbono, que se
obtienen de la flora, fauna, tierra, entre otros; y que pueden poseer diversas
propiedades de interés par la explotación humana.

PRODUCTOS NATURALES
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Relación dosis - respuesta

Entonces…
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Los biensayos se pueden llevar cabo

utilizando diferentes organismos y
células
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¿Qué espero al realizar

estas pruebas?
- Evaluar si el compuesto produce efectos de
inibición o magnificación.

- Tener en cuenta diferentes condiciones que

pueden potenciar el efecto de la sustancia.

- Hallar puntos finales  CL50 - CI50 - CE50

- Predicción, control, monitoreo, diagnóstico

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Concentración mínima de la sustancia que causa el 50% de la muerte,

inhibición, efectividad… en la población de estudio.
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CLASIFICACIÓN SEGÚN DURACIÓN Y ESPECIES

» Ensayo de toxicidad Aguda: (24-96 h) » Ensayo multi especies:

- No se alimenta al organismo. - Se evalúa el efecto del compuesto en más de una
- Pruebas estáticas o semi estáticas. especie.
- Permite evaluar rápidamente CL50 - CI50 - CE50 - Organismos pueden interactuar entre si.

» Ensayo de toxicidad Crónica: (días – meses)

- Efectos a largo plazo.
- Se alimenta al organismo durante el ensayo.
- Cambio periódico de la sln.
- Evaluación de efectos subletales.
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SE DEBE CUMPLIR CON:

» Organismo de prueba identificado.
- N° considerable de organismos por prueba y réplicas.
- Volumen de muestra definido.
- Determinación de frecuencia de observación.
- Condiciones de prueba.
- Cultivo del organismo o células (de necesitarse)
- Duración del ensayo.
- Controles positivos y/o negativos.
- Análisis estadístico
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Bioensayos y
productos
naturales
Desde su descubrimiento hasta su aplicación
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El proceso que lleva de la planta a la obtención de un

constituyente puro biológicamente o
farmacológicamente activo es muy diferente y requiere
de un enfoque multidisciplinario. El descubrimiento de
extractos prometedores y el posterior aislamiento de los
componentes guiado por su actividad imponen
requisitos específicos a los bioensayos que se utilizarán

El ensayo debe ser:

para este fin.

• Rápido
• Simple
• Reproducible In-vivo
• Útil con bajas cantidades
• No tan costoso In-vitro
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CLASIFICACIÓN DE BIOENSAYOS EN PN

Bioensayos
Bioensayos para Screening para
Screening General Especializado Screening
Primario
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Bioensayos para
screening general

No son selectivos. Solo indican si la muestra es

biológicamente activa o no.

Útiles cuando se evalúan de forma aleatoria si existe

alguna sustancia bioactiva entre diferentes plantas.
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BIOENSAYOS MÁS IMPORTANTES EN

ESTA CATEGORÓA

» Screening hipocrático.

» Método de órgano aislado con íleon de cobaya

(GPI assay)

» Prueba de letalidad de camarones de salmuera

GPI: Glucosa 6 P- Isomerasa

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Bioensayos Específicos
Brindan información de bioactividad específica (antiinflamatorio,
antioxidante, etc)

Útiles como segundo ensayo para las fracciones que muestran

actividad en ensayos preliminares.

Normalmente estos ensayos se desarrollan en diversos organismos,

conociendo ya valores de letalidad e inhibición en estos.
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Bioensayos para
Screening Primario

Se diseñaron específicamente para los químicos, botánicos,

farmacólogos, dado que tiene la suficiente experticia para
realizarlos.

En este se descubre, de forma especializada, una amplia cantidad

de compuestos activos en una muestra.
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USOS DE BIOENSAYOS EN
ESTUDIOS DE PN

» Control de calidad
» Actividades combinadas
» Test de estabilidad
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High Throughput Screening
(HTS)
Detección de alto rendimiento
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» Proceso de descubrimiento de fármacos que permite la

prueba automatizada de grandes cantidades de
compuestos químicos y / o biológicos para un objetivo
biológico específico.

Aceleran el análisis de objetivos, ya que las bibliotecas de

compuestos a gran escala se pueden examinar rápidamente de

HTS
forma rentable.

Útil para evaluar, por ejemplo, objetivos farmacológicos,

agonistas y antagonistas de perfiles farmacológicos para
receptores y enzimas.
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Objetivo de la prueba

Identificar a través de evaluaciones de bibliotecas

compuestas, los candidatos que afectan al objetivo de la
manera deseada, los llamados "hits" o "leads". Esto
generalmente se logra empleando dispositivos de manejo
de líquidos, robótica, lectores de placas como detectores
y software dedicado para el control de la instrumentación
y el procesamiento de datos.

HTS NO evalúa toxicidad ni biodisponibilidad

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PASOS BÁSICO PARA EL

DESARROLLO DE HTS

1. Preparación de las muestras y bibliotecas compuestas.

2. Establecimiento de un método adecuado para la
automatización del laboratorio.
3. Configuración de una estación de trabajo de robótica.
4. Obtención y manejo de datos.
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Preparación de las muestras y

bibliotecas compuestas.

» Las muestras son generalmente de naturaleza

celular o bioquímica

» Soporte: microplaca  placas de 384, 1536 o

3456 pocillos.

» Bibliotecas compuestas: "placas de inventario".

Las placas de reserva no se usan directamente en
experimentos.
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Establecimiento de un método
adecuado para la automatización
del laboratorio
» Idealmente, un ensayo HTS se realiza en un solo
pocillo, con una baja cantidad de reactivos
(miniaturización) y una manipulación mínima o
nula más que la inyección de la muestra /
compuesto a analizar.

» Cuanto más clara sea la distinción entre

controles negativos y positivos, mayor será la
posibilidad de obtener datos de alta calidad con
un número despreciable de resultados falsos
negativos pero especialmente falsos positivos.
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Configuración de una estación de

trabajo de robótica.

» El alcance de una plataforma robótica es

gestionar de forma autónoma múltiples placas
simultáneamente, acelerando significativamente
la adquisición de datos.
» Brazos mecánicos.
» Adición, mezcla, incubación y detección de
reactivos.
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Obtención y manejo de datos

» Medición óptica, cuantificando la

cantidad de luz "producida" por la
muestra.
» Detección fluorescente o
luminiscente, colorimetría o
dispersión de luz (turbidez):
» Métodos comunes: intensidad de
fluorescencia y polarización, FRET,
fluorescencia resuelta en el tiempo
(por ejemplo: HTRF®, LANCE®,
etc.), luminiscencia (por ejemplo:
NanoBRET) y AlphaScreen®.
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¡GRACIAS!
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REFERENCIAS

1. O N. ¿Qué son los Productos Naturales y Por qué el Concepto se Confunde?. http://www.organicosas.com/que-son-
los-productos-naturales-y-porque-el-concepto-se-confunde/
2. Bermúdez W. Tipos de bioensayos. https://www.goconqr.com/mindmap/5222651/tipos-de-bioensayos
3. UNAM. Bioensayos.
http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/patt/7._Efecto_de_los_Contaminantes/BIOENSAYOS.pdf
4. Indus Extracts. ROLEOFBIOASSAYSINDEVELOPMENTOFNATURALPRODUCTS.
http://www.indusextracts.com/uploads/knowledge-room/role-of-bioassays-in-development-of-natural-products.pdf
5. Claeson, P., & Bohlin, L. (1997). Some aspects of bioassay methods in natural-product research aimed
at drug lead discovery. Trends in Biotechnology, 15(7), 245–248. doi:10.1016/s0167-7799(97)01051-2
6. BMG Labtech. High-throughput screening (HTS). Increase your output – decrease experiment costs and time.
https://www.bmglabtech.com/es/high-throughput-screening/