AVALIAÇÃO DAS MUDANÇAS NA LOCOMOÇÃO E

HISTOLOGIA DO NERVO CIÁTICO APÓS

ENCEFALOMIELITE AUTO-IMUNE EXPERIMENTAL
CHANG, SMW¹, WAI,SX¹, QUEIXO, PY¹, LIM, JT¹ e MITRA,N. K² J.
Morphol. Sci., 2017, vol. 34, no. 4, p. 241-246
 2

Roteiro
1. CARACTERIZAÇÃO GERAL DO SISTEMA NERVOSO
PERIFÉRICO (SNP)
2. ABORDAGEM DO ARTIGO EXPERIMENTAL
3. CONCLUSÃO
4. REFERÊNCIAS BIBLIOGÁFICAS
 3

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

 O (SNP)
 Formado pelos nervos e gânglios nervosos

 FUNÇÃO
 Veiculam informações sensitivas: Encéfalo e medula espinhal
 Ligar SNC a órgãos do corpo, realizar o transporte de informações

MOVIMENTOS SECREÇÃO DE
MUSCULARES GRLÂNDULAS
 4

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

 NERVOS
 Feixes de fibras nervosas envolvidas por tecido conjuntivo
 Responsáveis pela união do (SNC) a órgãos periféricos e transmissão dos
impulsos nervosos

 Divisão
Nervos Espinhais: 31 pares, conexão com a medula espinhal
Nervos Cranianos: 12 pares, são os que fazem conexão com o encéfalo
 5

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

TIPOS
Nervos Aferentes (Sensitivos): enviam sinais da periferia para o sistema
nervoso central.

Nervos Eferentes (Motores): enviam sinais do sistema nervoso central

para os músculos ou glândulas.

Nervos Mistos: formados por fibras sensoriais e fibras motoras

Exemplo: Nervos raquidianos
 6

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

 GÂNGLIOS
 São aglomerados de neurônios
 Situados fora do sistema nervoso central
 Espalhados pelo corpo
 É comum formarem uma estrutura esférica
 7

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

 DIVISÕES DO SNP
● Sistema Nervoso Somático:
• ​Regula as ações sob o controle da nossa vontade ações voluntárias
• Atua sob a musculatura esquelética de contração voluntária.
● Sistema Nervoso Autônomo​:
• Atua de modo integrado com o sistema nervoso central
• Geralmente exerce o controle de atividades de independem da nossa vontade
• Ações involuntárias.
• Atua sob a musculatura lisa e cardíaca
 8

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

 9

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

 10

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

 11

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

SISTEMA NERVOSO AUTONOMO

Sistema Nervoso Simpático que estimula o funcionamento dos órgãos

Sistema Nervoso Parassimpático que inibe o funcionamento dos órgãos
 12

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

 13

SISTEMA NERVOSO PERIFÉRICO (SNP)

 14

AVALIAÇÃO DAS MUDANÇAS NA LOCOMOÇÃO E

HISTOLOGIA DO NERVO CIÁTICO APÓS
ENCEFALOMIELITE AUTO-IMUNE EXPERIMENTAL
 15

INTRODUÇÃO

 A esclerose múltipla (EM)

Doença inflamatória

Associada com ataque imune a mielina

Leva a degeneração axonal e mielina

(Bhasin, Wu e TSIRKA, 2007)
 16

INTRODUÇÃO
 Um modelo animal de Esclerose Múltipla (EM) utilizado é encefalomielite auto-
-imune experimental (EAE)

O EAE não ocorre espontaneamente,

mas imita algumas das características patológicas histológicas de EM

1. Células T específicas de mielina tornam-se ativadas;

2. Migra para dentro do sistema nervoso central (SNC);
3. A inflamação auto-imune resulta na infiltração
do SNC
Células CD4 +, células T CD8 + e células B

(Bhasin, Wu e TSIRKA, 2007)

 17

INTRODUÇÃO

 Infiltração perivascular
Células imunitárias
Através da barreira sangue-cérebro
Característica patológicas da EM

 Doença desmielinizante
Inicio da idade adulta
Afeta o sistema nervoso periférico e central
(JAVED e REDER, 2006).
 18

INTRODUÇÃO
 A EAE pode ser induzida, como uma doença crônica
 Em ratinhos C57BL / 6 de ratinho
 Imunização com mielina de oligodendrócitos glicoproteína (MOG)

Desmielinização, Inflamação e Perda axonal,

 As alterações morfológicas Semelhante à EM humana

 A existência de casos de neuropatia periférica

 Pacientes EM que sugeriu um papel etiológico pode existir entre as duas condições.

Um modelo animal de EAE em ratos C57BL / 6 de ratinho por imunização com MOG.
Neste estudo Estimativa de locomoção foi realizado por análise de pegada
Alterações histológicas: observadas nas secções de nervo ciático e correlacionado com
da parte lombar da medula espinal.
 19

OBJETIVO
O objetivo deste estudo foi investigar as mudanças na locomoção em um
modelo de rato de encefalomielite auto-imune experimental (EAE) e
correlacionar com alterações histológicas, se for o caso, nas secções de
nervo ciático e parte lombar da medula espinal
 20

MATERIAIS E MÉTODOS
 Universidade Monash Sunway Campus Malásia

 Protocolo adaptado e aprovado pelo comitê de ética

 Produtos Químicos utilizados

Peptidio MOG, 21 MOG (ProspecBio) (Israel).
Péptidio MOG35-55
Adjuvante completo de Freund (CFA) (Sigma-Aldrich)

 Os animais foram adquiridos na própria universidade

 21

MATERIAIS E MÉTODOS

 EXPERIMENTO

 Dia 0 = 8 ratinhos receberam injeções subcutâneas de 300 ug do peptideo MOG35-55

misturado com 200 uL de CFA, sobre a prega da cauda, seguida pela administração de
intra- peritoneal de 400 ng de toxina da tosse convulsa(PT)

 Dia 2= foi administrada intra - peritoneal uma segunda dose pós - imunização de PT
 22

MATERIAIS E MÉTODOS
 A pontuação clínica usada para os sinais clínicos de EAE são:
0= Nenhum sinal
1= cauda mole
2=cauda flácida e paralisia ligeira dos membros traseiros
3= paralisia de membro posterior ou com incontinência urinária
4= paralisia dos membros posteriores com fraqueza dos membros anteriores ou com
bexiga atônica
5= tetraplegia
Os ratinhos foram divididos em dois grupos tratados de formas diferentes:
1. EAE
2. FORMA SIMULADA
 23

MATERIAIS E MÉTODOS
 As patas dianteiras e posteriores foram coradas com corante orgânicos vermelho e azul
por imersão

Depois deixou- se o rato correr através de um túnel de plástico de largura (10 cm x 50

cm) de comprimento, criando pegadas consecutivas do membro anterior e do posterior.

Uma folha de papel branco foi colocado no chão da pista

As medições da extensão da passada:

 Largura fore-base
 Largura traseira da base
 Deu uma indicação de marcha e o comprimento da passada foi medida por membro anterior
e membro posterior, com a média da distância de cada movimento para frente entre cada
passo e esses valores para análise.
 24

MATERIAIS E MÉTODOS
A análise estatística realizada para verificar diferença significativa da pegada:
 Dia 0, dia 5, dia 10, dia 15 e dia 20.
 Os ratos de cada grupo foram perfundidos transcardiacamente:
 Solução salina normal
 Ventrículo cardíaco esquerdo

 Medulas espinhais e nervos ciáticos

 Dissecados
 Embebimento em parafina.
 Os resultados
+- erro padrão da média
 O teste estatístico encontra diferenças entre os valores médios da pegada em diferentes dias
 25

ANALÍSE ESTATÍSTICA

 ANOVA
Avaliando o comprimento do passo pata traseira
Valor de p<0,05 foi considerado estatisticamente significante
 26

RESULTADOS
Figura 2. Significa o comprimento do passo da pata traseira esquerda (cm) (± SE) (A) e o comprimento médio da
pata traseira direita do passo (cm) (± SE) (B) no grupo de ratinhos de controle tratados de forma simulada e tratado
com MOG grupo ratinhos EAE, respectivamente.
 27

RESULTADOS
Figura 3. Fotomicrografia apresentando a substância branca de funículos laterais da parte lombar da medula espinal
no grupo tratado com sham controle de ratinhos (3A) e grupo de EAE tratados MOG de ratinhos (3B) corado com
Luxol Fast Blue (8? M, 3A, 3B 100X, 3C 40X, 50 bar? m).
 28

RESULTADOS
Figura 4. Fotomicrografia apresentando as secções transversais do nervo ciático esquerdo do grupo de controle
tratado com sham de ratinhos (4A) e do grupo tratado com EAE MOG de ratinhos (4B) coradas com H & E (8? M,
200X, 50 um bar).
 29

RESULTADOS
 No presente estudo
ratinhos EAE atingiu um resultado clínico médio de 1,8, no 10 dia da experiência após imunização com MOG.
 A deficiência motora
membros posteriores
evidenciado no estudo de locomoção pela análise da pegada.

 A análise estatística
 Comprimento da passada mostrou que o comprometimento apareceu mais cedo
 Foi mais severa na pata traseira esquerda do que a pata traseira direita.
Análise histológica qualitativa das secções da medula espinal na EAE
mostrou desmielinização nas secções lombar da medula espinal
Os neurónios motores do corno anterior das secções da espinal medula lombar
 mostrou alterações sugestivas de danos (picnose e perda de nucléolo)
 30

RESULTADOS
 No sistema nervoso periférico (SNP), ratinhos EAE mostraram evidência de alterações
inflamatórias no estudo histológico do nervo ciático na forma de acumulação de macrófagos na
epineural.

O nervo ciático do lado esquerdo mostrou alterações inflamatórias correspondentes para o

membro posterior esquerdo ser mais afetada nos ratinhos EAE.

Estudos anteriores, usando o modelo de EAE têm usado os testes comportamentais para avaliar o
comprometimento das funções motoras.

A área de contato de cada pegada do membro posterior foi usado no teste de pista curta para
avaliação do motor num estudo avaliou o tratamento de pregabalina no modelo de EAE

(SILVA, Pradella, Moraes et al., 2014).

 31

CONCLUSÃO
 O presente estudo foi capaz de produzir perda de função motora restrito para o membro
posterior de modelo de ratinho C57BL / 6 da EAE com danos para os axónios mielinizados em
funículo lateral do segmento lombar da medula espinal correspondente com MOG.

 Presença de células inflamatórias no nervo ciático indicando alterações inflamatórias no SNP.

 A falta de conformação imuno-histoquímica das células inflamatórias nas secções do nervo

ciático permaneceu uma limitação do estudo.

 Concluiu-se que no modelo de ratinho de EAE, a deficiência de locomoção devido a danos na

parte lombar da espinal medula pode ser associada com as alterações inflamatórias no nervo
ciático.
 32

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 CHANG, SMW¹, WAI,SX¹, QUEIXO, PY¹, LIM, JT¹ e MITRA,N. K² J. / Avaliação das
mudanças na locomoção e histologia do nervo ciático seguinte encefalomielite
autoimune experimental / Morphol. Sci., 2017, vol. 34, no. 4, p. 241-246

file:///C:/Users/Danrley%20Oliveira/Downloads/Artigo%20Anatomia.en.pt.pdf
 33

OBRIGADO!

Fonte: Arquivo pessoal