MAQUINARIA DE

DEGRADACIÓN ÓSEA DE
LOS OSTEOCLASTOS :
UN OBJETIVO DE VIH-1 QUE
CONTRIBUYE A LA PÉRDIDA
ÓSEA
Integrantes:
Reátegui Luque, Fiorela
Fernandez Ayala, Karine
Alcántara Joaquin
 In vitro, la infección de
osteoclastos humanos ocurre en
diferentes etapas de la
osteoclastogénesis a través de
virus libres de células y, más
eficientemente, por
transferencia de células T
infectadas
Losteoclastos soncélulas
hospedadoras para el VIH-1 y su
contribución patológica a los
trastornos óseos inducidos por
este virus, en parte a través de
Nef.

La proteína viral Nef está

involucrada en todos los efectos
inducidos por el VIH-1 en parte a
través de la activación de Src, un
regulador de los podosomas y de
su ensamblaje como una zona
de sellado
 La reducción de la
densidad mineral ósea es
una complicación frecuente
de los pacientes infectados
por el VIH-1
En el caso de
envejecimiento o infección
por VIH-1, este equilibrio
puede romperse en favor
de la pérdida ósea.

El uso de la terapia
antirretroviral de gran
actividad (TARGA) ha
mejorado significativamente
la vida útil de los pacientes

Los huesos se someten a una

remodelación continua, que se
basa principalmente en las
acciones secuenciales de los
osteoclastos (OC) y
osteoblastos formadores de
huesos.
 Se realizo un experimento
para comprobar la
aparición de OC infectados
en huesos de ratones
humanizados infectados con
VIH-1 y en sinoviales
humanos

Además, se demuestra que la

actividad exacerbada de los
resultados de OC infectados
de la estructura modificada y
la función de la SZ, se
correlaciona con la
activación de Src y es
dependiente de la proteína
viral Nef.
 Resultados

Se utilizaron estos ratones

Sorprendentemente, observamos que
infectados durante 14–21 d para
aproximadamente el 10% de estas
examinar la placa de
células eran positivas para viral. En
crecimiento de fémur y tibias, la
conjunto, estos datos muestran que la
zona enriquecida con OC. Para
infección de OC se produce tanto in
cada sección ósea,
vivo en ratones humanizados como
cuantificamos 85 ± 22 células
ex vivo en tejidos humanos.
que exhiben características OC
 Los OC humanos son permisivos a la
infección por VIH-1 por virus sin células en
diferentes etapas de diferenciación
Se recurre a OC
notamos la
humanas derivadas de
Se observa un rápido adquisición de
monocitos primarios
aumento de la integrina catepsina K en el
diferenciados in vitro en
de TRAP y β3 en el día 1 día 6
presencia de M-CSF y
RANKL

cuando las células

presentaron características de
OC maduras, incluido un alto
índice de fusión, altas
actividades de TRAP y MMP9 y
actividad de degradación
el nivel de expresión
para todas estas
proteínas aumentó en
el día 10

Las células se infectaron in
vitro con la cepa ADA del
VIH-1 R5 en los días 0, 1, 6 o
10 de diferenciación
Mientras que los monocitos
(día 0) fueron poco capaces
de sostener la infección, las
células se volvieron cada vez
más permisivas a la infección
a lo largo del proceso de
diferenciación
Además, las partículas virales
producidas por OC o MDM
infectadas tenían una
capacidad de infección
comparable lo que indica que
ambos tipos de células liberaron
virus infecciosos.
Brotes víricos en OC y
partículas de virus tanto
maduras como inmaduras que
se acumulan en componentes
intracelulares delimitados por
membrana mediante
microscopía electrónica (
Los OC humanos se infectan preferente por
la transmisión de células T infectas
La infección por VIH-1 mejora la migración del precursor
de OC y actividad de reabsorción ósea de OC
La infección por VIH-1 altera la arquitectura
de la SZ y activa la quinasa Src.
 El factor viral Nef esta involucrado en los efectos
inducidos por el VIH-1 en el OC in vitro como in vivo
Discusión

Conclusión: las OC son células diana del hospedador para el VIH-1 que se
vuelven más osteolíticas como consecuencia de una zona de sellado más
grande y más degradante. Proponemos que los OC infectados participen en
trastornos óseos encontrados en pacientes infectados con VIH-1 y pueden
constituir un reservatorio para el virus. La proteína viral Nef aparece como un
regulador clave de la actividad de resorción ósea de OC infectada VIH-1.
Este estudio proporciona una mejor comprensión de las causas subyacentes
de la perdida ósea después de la infección por VIH-1.
A B C D
180 *** ** 2 *** * 300 * * 25 ** *

Resorbed bone area (%)

p-Src/Src expression level
160
250 20

3D migration (%)
140

Cells with SZ (%)

120 200
15
100
1 150
80 10
60 100
40 5
50
20
0 0 0

Los efectos del

0
NI HIV-1 nef NI HIV-1 ne NI HIV-1 nef NI HIV-1 nef
HIV-1 f HIV-1 HIV-1
HIV-1

VIH -1 en la
250
**** **
Non infected HIV-1 nef HIV-1
200

Fusion index (%)

150

diferenciación
100

50

y la función de
0
F-actin, DAPI NI HIV-1 nef
HIV-1
F Non infected HIV-1 nef HIV-1
**** **

OC involucran
1000

SZ surface (µm2)
750

a la proteína
500

250
F-actin
0
NI HIV-1 nef
G

viral Nef.
HIV-1
H 0.3
****
Podosome area (µm )
2

0.25

0.2

0.15

0.1
F-actin , Nef-GFP, DAPI F-actin Nef-GFP

Control Nef
 SEE COM
A 40 B 200 C (70). SZ assembly and patterning are under the control of Src
* 3 (14, 38). Interestingly, we report that the Src kinase activity was

Resorbed bone area (%)

F-actin staining size (m)

activated in infected OC and that podosomes were enlarged, as
* * *

Fusion index (%)

30 150
2 visualized by an increase of F-actin staining. In human macro-
20 100 phages, modifications of the F-actin content in individual
1
podosomes have been correlated with fluctuations of protrusion
10 50 forces exerted onto the extracellular matrix by these cell struc-
tures (71). In OC, these modified podosomes may promote more
0 0 0
efficient sealing to bone surface. Indeed, we observed stronger

En ratones Nef-
Non Tg Nef-Tg Non Tg Nef-Tg Non Tg Nef-Tg

D Non Tg Nef-Tg

tg, la actividad
F-actin, vinculin, F-actin F-actin
DAPI

Vinculin Vinculin

osteolítica de
E Non Tg F OC y defectos
óseos aumenta
Bone trabecular surface
40

30

index (%)
**
20

10

0
Non Tg Nef-Tg

Nef-Tg

30 ****

20

10

0
Non Tg Nef-Tg
 Efectos
óseos
inducidos
por el VIH-
1 en
pacientes
 Materiales y métodos

Los materiales y métodos adicionales incluyen:

 Análisis de citometría de flujo.
 Inmunotransferencia
 Zimografia en gel
 Tinción TRAP
 Análisis de microscopia electrónica
 Migración 3D
 Ensayos de adhesión y reabsorción
 Químicos y anticuerpos
 Análisis estadísticos