1.

• Disponemos de microesferas de polietileno

con grupos sulfónico unidos covalentemente.
¿Para qué tipo de cromatografía podremos
utilizarlas como fase estacionaria?
(a) de exclusión; (b) de intercambio aniónico;
(c) de intercambio catiónico; (d) de reparto

• De intercambio catiónico, porque la

resina tiene carga negativa.
2.
• Una de las aplicaciones frecuentes de la cromatografía
de exclusión molecular es la determinación de la masa
molecular de proteínas globulares. Para ello, es preciso
disponer de proteínas patrón de masa conocida.
• Tras un proceso de purificación que partió de un
extracto celular, el cromatograma de exclusión
obtenido con la muestra resultante indicó la presencia
de 2 proteínas diferentes. Calcule cuál es su masa
molecular, a partir de los datos de volumen de elución
obtenidos con la mezcla de proteínas patrón
cromatografiada bajo las mismas condiciones.
 Calcular la concentración de las proteínas
sí el área bajo la curva es 10000 (15.5mL y
12000(20.0 mL)

muestra problema
15.5
20.0
• 3.
) Dado el Rf = 0.5 para una sustancia, cuál es la posición de la misma sobre la placa que se muestra a
continuación?

Frente de solvente

9 cm
Línea de siembra
Si el tiempo de retención de un componente A es mucho
mayor que el de un componente B, qué indica esto
acerca de los analitos en:
• a- Una cromatografía de exclusión en gel?
• b- Una cromatografía de fase reversa?
• - ¿Qué es un “gradiente” en CG y en HPLC?
Los siguientes datos fueron obtenidos por medio de
un cromatograma gas líquido, en una columna de
1.50 m, cuya fase estacionaria es de escualeno.

Compuesto
no retenido
benceno (PE 80 °C)
hexano (PE 68 °C)
Hexanol (P.E. 160 °C )
Observando la tabla grafique un cromatograma,
respetando las escalas. Considere que el hexano es
el compuesto que está en mayor concentración.
• Los siguientes tiempos de retención y ancho
de picos fueron observados en una columna
gas líquido de 1,50 m, rellena con FE muy
polar, de composición química del tipo del
etilen glicol.
Compuesto tr (min)
no retenido 0.40
hexano (PE 68 °C) 4.60
1 metil etil cetona (PE 68 °C) 5.00

Qué modificaciones hubiese observado en los tr si la fase estacionaria

hubiese sido no polar, por ejemplo escualeno?.
Y si la fase hubiese sido levemente polar, con una estructura del tipo de
ftalato de OR?
• Los cromatogramas de CG se obtuvieron bajo las condiciones
indicadas.
• a- ¿Cuáles cambios realizaría en cada caso para mejorarlos y
lograr la separación de los compuestos en la mezcla?
Muestra : 5 μL
Benceno y Etilbenceno
Columna oxido de aluminio
desactivado, (poco polar)
Columna 1,5 m
Tem75oC
Para la cromatografía de gases que se muestra discuta la
polaridad de las columnas DB 225 y DB1
 Estándar interno
• Se desea determinar la concentración de etanol
en sangre. Para ello se procesan (de la misma
manera) una serie de soluciones acuosas patrón
de etanol y una muestra de suero: una alícuota
de 0.01 mL de cada solución se diluyen con 0.1
mL de una solución patrón de 2-propanol
0.1mg/mL. Se inyectan 0.1 μL de cada solución en
un CG provisto de un detector FID (ionización de
llama), un integrador y una columna PEG-400
(polietilenglicol) a 80 °C. Los resultados obtenidos
fueron los siguientes:
 Patrones de etanol Medida del integrador
(mg/mL) Pico del etanol Pico del propanol
0.5 5518 12754
0.75 7563 11893
1.0 10350 12084
1.25 13935 12870
1.5 15628 12314
Muestra de sangre 9862 12604
- Construir el gráfico de calibración correspondiente y usarlo para determinar
la concentración de etanol en la muestra de sangre.
b- ¿Qué ventajas tiene emplear las áreas integradas de los picos en vez de sus
alturas para realizar la cuantificación?
 y = 0,8316x + 0,028
1,4 2
R = 0,9986
areaEtOH/areaPropOH

1,2

1
0,8

0,6

0,4
0,2

0
0 0,5 1 1,5 2
[EtOH] / [PropOH]
Una mezcla de fenil metil cetona, nitrobenceno,
benceno y metil benceno se separa en una columna
C18 con una fase móvil metanol: agua 60:40. En
estas condiciones la cetona eluye primero.
• a- En qué orden eluyen los otros solutos?
• b- Cómo se puede cambiar la composición de la
fase móvil para cambiar el tiempo de retención
de los solutos?
• c- Cómo se afectaría el tiempo de retención de
los solutos si se usa una columna ligada con
grupos fenilos en lugar de C18?
• a- Cuanto más polar es el soluto más rápido es
eluido. De manera que el orden será: fenil metil
cetona, nitrobenceno, benceno, metilbenceno.
• b- Se puede incrementar la polaridad de la fase
móvil, por ejemplo, aumentando la cantidad de
agua.
• c- La columnas con fase ligada de tipo fenilo son
ligeramente más polares que las de C18 y esto
podría causar que los solutos eluyan más rápido;
no afecta a todos los solutos de la misma manera,
depende en todo caso del tipo de compuesto.
b- Moléculas polares pueden ser fácilmente separadas por cromatografía de
adsorción. instrumental

c-El tiempo de retención de los solutos en cromatografía de exclusión gel o

por tamaño,puede ser alterado cambiando la polaridad de la fase móvil.

d- La exclusión molecular se usa sólo para separar moléculas grandes.

e- En cromatografía reversa la fase móvil es más polar que la fase

estacionaria.

b-Falso: Las moléculas polares se separan mejor por cromatografía de fase reversa.
Utilizando cromatografía de adsorción las moléculas polares tienen tiempos de retención
más largos y pueden presentar picos con “cola”
c-Falso: Un cambio en la polaridad de la fase móvil tiene un pequeño efecto sobre los
tiempos de retención ya que en el caso de cromatografía de exclusión la retención está
determinada por el tamaño y la forma de la molécula en relación con el tamaño y forma
de los poros de la fase estacionaria.
d-Falso: La exclusión molecular es usada para separar pequeñas moléculas de grandes
moléculas
e-Verdadero
Cromatografía?
Tipo de extracto
Polaridad?
Columna A o B ?
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