Escuela Nacional

De Ciencias
Bilógicas
Bioquímica Microbiana
Equipo 2 5IM1
Díaz Cruz Diana
Susano López Ariana
Téllez Carlos
FUNCIÓN DE
REACTIVOS
 Glucosa 4
mg/mL

2,4
dinitrofenol
(DNF) 2mM
N-etil
maleimida
Transporte (NEM) 4mM
de Glucosa Reactivos
en levaduras
NaOH 0.5N

DNS en
Tartrato de
sodio-potasio

Glucosa
500µg/mL
CONCENTRACIÓN FUNCIÓN
4 mg/mL Sustrato para
evidenciar el tipo
de transporte que
utiliza nuestra
levadura para su
transporte
500 µg/mL Reactivo para
realizar una curva
de calibración
2,4
dinitrofen
ol (DNF)
2mM
Inhibidor
N-etil maleimida Agente
(NEM) 4mM bloqueador
METODOLOGÍ
A
Suspensió
n celular
1) Se lavan de 6-8 veces
con agua destilada hasta
obtener una concentración
de 30 %
volumen/volumen.
 Agua
No. DNF NEM Suspensión Glucosa
destilada °C
Matraz (ml) (ml) celular (ml) (ml)
(ml)
Transporte
1* 6 - - 4 10 4 °C
de glucosa
2** 6 - - 4 10 ambiente 2) Preparar la siguiente
serie de matraces
ambiente
3** - 6 - 4 10

ambiente
4** - - 6 4 10

ambiente
5 16 - - 4 -
3) Preincubar glucosa y
células por separado
durante 20 min. Una vez
lista la mezcla mantener
en baño de hielo por 30
min
4) La mezcla de célula más
agua y la de células mas
inhibidores se preincuba a
temperatura ambiente por
20 min.
5) Tomar alícuotas de 2 ml
de cada matraz al tiempo
0, 10, 20 y 30 min; para
recibir en un tubo de
ensaye con 1 ml de NaOH
0.5 N
6) Tomar una alicuota del
sobrenadante de acuerdo
al nivel de azúcar
esperado, se coloca en un
tubo de ensaye de 16x150
mm y se lleva a un
volumen de 1 ml con agua
destilada .Adicionar 1 ml
de DNS y agitar.
7) Colocar los tubos a
ebullición en baño maria
por 10 min.

8) enfriar a temperatura
ambiente, agregar 2 ml de
agua destilada, agitar y
leer a 540 nm contra
blanco de reactivos.