BIOTECNOLOGÍA

“DETERMINACION DE
POLIFENOLES Y ÁCIDO
GÁLICO A PARTIR DE
TANINOS PRESENTES EN
POLVO DE CORTEZA DE
CIPRES CUPRESSUS
LUSITANICA MILL”

ALUMNOS: Díaz Delgado Bruno

Inga Baca Julhino
Loja Tafur Nerlin Juan
INTRODUCCIÓN

 En la última década se denota la importancia de investigación científica de las

especies vegetales de zonas áridas, estos productos son usados como materia prima
para la obtención de derivados y/o insumos para la industria de alimentos, curtiembre,
pinturas, etc., el Cupressus lusitanica Mill. es una planta que en su estructura contiene
taninos, gomas y otros, etc. (Ali, D 2012).
 (Ali D.,2012) nos dice que según estudios científicos en temas de la extracción
eficiente de los taninos de la corteza de pino en mención crean efectos en los
productores que buscan transformar la corteza en taninos en elementos más puros
como es el ácido gálico.
MARCO TEÓRICO

Taxonomía
Nombre científico: Cupressus lusitanica Mill.
Nombre común : Ciprés, ciprés mexicano.
Familia : Cupressaceae.
Origen : Exótica.
Es un árbol grande, de copa estrecha y de forma cónica. Su especie es monoica, siempre
verde, resinosa y aromática, pudiendo alcanzar hasta 40 m de altura y más de 100 cm de
diámetro. (Salazar, R., Soihet, C. y Méndez, J. M. 2000).
TANINOS

 Son sustancias muy complejas que producen las especies vegetales Los taninos son
sustancias amargas que se pueden encontrar en las cortezas, frutos, hojas, raíces o semillas
de una gran cantidad de especies de muchas familias del reino vegetal, son derivados del
ácido gálico, conocidos desde hace siglos en su forma bruta por su utilidad para curtir pieles,
ya que una solución de este ácido precipita a la albúmina. (Akú Ramirez , I. L.. 2001 ;Fritz U.
1985)
 Para (Haslam, 1996) los polifenoles o taninos vegetales se usan en la producción de
colorantes y tintas o como tratamiento versátil en medicina tradicional, estas sustancias
actúan como componentes comunes e inevitables en alimentos y bebidas de origen vegetal,
a los cuales contribuyen en el sabor y palatabilidad por su astringencia.
 Fritz U. 1985, define que los taninos son soluble en agua, alcohol y acetona y casi insoluble en
benceno, cloroformo, éter y éter de petróleo.
 MÉTODO UTILIZADO PARA LA
EXTRACCIÓN DE TANINOS

1. Método de aprovechamiento
De Cortezas y Raíces: la corteza para la manufactura de jugos curtientes suele despegarse de los
árboles, cortarse en longitudes de 1.20 m, apilarse y secarse al aire libre, se mantiene en
constante secado hasta llegar a una humedad del 20%.(Corporación de Fomento de la Producción,
1997)
2. Obtención de jugos curtientes vegetales.
La obtención continua de jugos curtientes vegetales tiene cuatro fases básicas: la molienda, la
extracción, la condensación y el almacenamiento o paso a depósitos de reserva. (Alvares C., 1968.)
3. Molienda.
La molienda consiste en abrir este material ya sea por corte o maceración, sirviéndose de morteros
y pilón de madera para machacar hojas, vainas raíces y cortezas hasta la obtención de virutas o
astillas de dimensiones reducidas que permitan la extracción completa del tanino. (Alvares C.,
1968.)
4. Extracción
Se hecha agua sobre el material desintegrado de la primera vasija (A) para su segunda
lixiviación. Al tercer día, el líquido de la segunda vasija (B) se pasa E la tercera (C). La
solución de la primera vasija (A) se vierte en la segunda (B), volviéndose a echar agua
dulce en la primera (A). Este ciclo se repite los días, cuarto, Quinto y sexto. Cada día se
hace uso de una más de las seis vasijas, hasta ponerlas todas en servicio. (Ortiz A.,1992)
METODOLOGÍA EXPERIMENTAL

Los procesos realizados son para obtención del material de análisis, experimentándose
respecto al tipo de solvente y los factores tiempo, cantidad de polvo de corteza de ciprés,
temperatura y porcentaje de solvente en el orden respectivo para posteriormente
analizar el rendimiento de la extracción de taninos y su concentración de ácido gálico.
PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN DEL MATERIAL
DE ANÁLISIS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
PARA EL TIPO DE SOLVENTE

La metodología para el procedimiento de extracción empleado se basa

fundamentalmente en los métodos descritos por Cadahia (1995); Pérez Tello (1990);
Walleska (1994); Saravia Molina, et al. (2002) y Hernández Ortega (2007).
 METODÓLOGIA DE LA PREPARACION DE
LA MUESTRA (POLVO DE CORTEZA DE
CIPRES)

Se pesaron 5 g del material seco de corteza de pino, se

colocó en una dilución de solvente agua (90% agua – 10%
etanol). Se llevó a un agitador magnético para homogenizar
el extracto acuoso de materia y solvente/agua, a una
temperatura de 50 ºC por un tiempo de 20 min. Pasado el
tiempo de agitación se pasó a enfriar a temperatura ambiente
colocándole sobre un material cartón corrugado con el fin de
evitar un shock térmico, generando al mismo tiempo la
decantación donde las partículas del material experimental se
asientan en la base de los materiales de laboratorio esto para
facilitar el proceso de filtrado. En el siguiente paso se realizó
el filtrado utilizando papel wathman Nº 40, que por la acción
de la presión atmosférica generó el filtrado.
 METODÓLOGIA PARA LA DETERMINACION DE
FENOLES TOTALES EN EXTRACTO DE
CORTEZA DE CIPRES CUPRESSUS LUSITANICA
MILL.

Se utilizó el método de método de Folin-Ciocalteu para determinar

los polifenoles por colorimetría. Este método opera reduciéndolos
en una solución alcalina, resultando la formación de un complejo
de coloración azul (Yildirim et al., 2001).
Se trabajó con diluciones muestra-agua 10:200, 10:300. El método
de Folin-Ciocalteu consiste en tomar 40 μL de extracto, a los cuales
se añade 3,16 mL de agua ultra pura, 200 μL de reactivo de Folin
Ciocalteu y 600 μL de carbonato de sodio anhidro (Na2CO35H2O)
20%, se agita y se deja en oscuridad por dos horas. Trascurrido el
tiempo leemos en el espectrofotómetro a una longitud de onda de
765 nm, tomando como blanco la solución con agua destilada. Los
resultados se expresan como equivalente de Ácido Gálico, que es la
referencia en la curva de calibración.
Resultado
DETERMINACION DE ACIDO GALICO EN
TANINOS PRESENTES EN CORTEZA DE CIPRES
POR FERMENTACION DE ASPERGILLUS
NIGER.

Dominio: Eukaryota
El Aspergillus es un género de
Reino: Fungi alrededor de 200 hongos. Puede
existir en dos formas
Filo: Ascomycota básicas: levaduras e hifas El
Subfilo: Pezizomycotina
Aspergillus es filamentoso
(compuesto de cadenas de células,
Clase: Eurotiomycetes llamadas hifas, el tipo de hongos
opuesto a las levaduras, que se
Orden: Eurotiales
componen de una sola célula
Familia: Trichocomaceae redonda). (Abarca, M., 2000)

Género: Aspergillus

Especie: Aspergillus niger

P.E.L. VAN TIEGHEM
 METODOLOGIA PARA LA SIEMBRA
DEL INOCULO (ASPERGILLUS NIGER)

 Para realizar la siembra del inoculo se siguió la metodología de

Silva, M., et al. (2014).
 Se fundió el agar Saburoud en una temperatura de 70 ºC.
 Se colocó sobre un cartón corrugado para evitar el shock térmico
hasta llegar a una temperatura de 30ºC.
 Se esterilizo el área de trabajo, con mechero.
 Se sirvió en placas Petri debidamente esterilizados.
 Se reposo por 10 min para que se solidifique el agar.
 Se sembró el microorganismo en puntos, debido a que su
crecimiento es de forma radical.
 Se llevó a incubo a 30 ºC por 72 horas con una humedad relativa de
45 %.
METODOLOGIA PARA REALIZAR EL
PROCESO FERMENTATIVO

 Para la preparación del medio fermentativo se realizó:

 Mezcla de polvo de corteza de ciprés de 6 mm de diámetro en una solución de 10:100
mL
 Se hidrolizo por un proceso de ultrasonido a 2000 Hz por 30min a una Tº de 20 ºC.
 Preparación del área de trabajo
 Selección de la población de aspergillus n. con su medio de sustrato.
 Siembra de aspergillus en el medio de fermento de taninos hidrolizado.
 Encubado en estufa a Tº 30ºC por 240 horas, en un proceso anaeróbico.
BIBLIOGRAFIA

 Abarca, M. L. (2000). Taxonomía e identificación de especies implicadas en la aspergilosis

nosocomial. Rev Iberoam Micol,17(3), S79-84.
 AKÚ RAMIREZ , I. L.. 2001. Evaluación del Contenido Tánico en la Corteza de dos Especies forestales
guatemaltecas, Mangle Colorado(Rhizophora mangle) y pino blanco(pinus ayacahuite) por medio de
dos métodos de extracción. Tesis Ingeniero Químico. Facultad de Ingeniería. USAC.
 ALVARES GUADAMUZ, C. 1968. Estudios sobre algunos materiales curtientes de Guatemala. Tesis
Ingeniero Químico. Facultad de Ingeniería. USAC.
 Ahn, M.J., et al., (2004).Inhibition of HIV-1 reverse transcriptase and protease by phlorotannins
from the brown alga Ecklonia cava. Biological & pharmaceutical bulletin, 27(4): 544-547.
 Corporación de Fomento de la Producción Chile. 1997. Optimización de Producción de taninos.
Universidad de Concepción. Fondo de Desarrollo Productivo. 
 FRITZ U. 1985. Enciclopedia de Química Industrial. Tomo V. pp. 808-815. XII pp 457-476 y XII pp 693-
703.
 González, J. G. Á., Murias, M. A. B., García, A. M., & Soalleiro, R. R. (2005). Estimación
 de la biomasa arbórea de" Eucalyptus globulus" y" Pinus pinaster" en Galicia. Recursos rurais:
revista oficial do Instituto de Biodiversidade Agraria e Desenvolvemento Rural (IBADER), (1), 21-30.
ANEXO
GRACIAS