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UNIDAD 3
Inventada Mikhail Tswett (1900) para
separar distintos pigmentos de la clorofila
pasándola por una columna de carbonato de
calcio.
Es la separación
de dos o más
compuestos
químicos en un
medio
Fase Móvil: Gas ó Líquido
Fase Estacionaria: Inmiscible; es
sólido o líquido fijado en un sólido.
La movilidad de los componentes de
la mezcla a separar depende de la
afinidad química o propiedades / FE
& FM
Cromatografía en columna.
Cromatografía en columna.
FE=Columna
Según el fluido empleado:
Cromatografía de Líquidos
Cromatografía de Líquida de Intercambio Iónico
Cromatografía de Líquida de alta eficiencia
Cromatografía de Líquida de Exclusión
Cromatografía de Líquida de Adsorción
Cromatografía de Líquida en fase Inversa y Normal
Cromatografía de Gases
Cromatografía de líquidos súper críticos
FE= papel de celulosa.
FM= disolvente y la mezcla de
varios líquidos que contiene
agua o solvente.
Se aplica la muestra sobre el papel
Introducción del papel en la cubeta que
contiene el disolvente.
Éste atraviesa el papel por capilaridad
arrastrando los componentes de la
mezcla.
Separación en función de la afinidad por las dos
fases, las más solubles en agua se quedarán cerca del
punto donde se aplicó la muestra, y las menos
solubles en agua y más solubles en el disolvente
llegarán más lejos.
Las sustancias separadas se identifican mediante
diversos procedimientos físicos o químicos.
• Transcurridos unos
• Con la ayuda de un
capilar de vidrio, 2 minutos, cuando el
frente del disolvente
una pequeña se encuentra próximo
cantidad de • Una vez depositada al extremo de la
muestra se la muestra, se placa, se saca ésta de
deposita sobre el introduce la placa la cubeta, se deja
adsorbente, muy en una cubeta de secar. Los diversos
cerca del extremo cromatografía, que compuestos se
inferior de la contiene en el localizan
placa. interior el directamente si son
disolvente con el coloreados, o con la
que va a ayuda de un
1 desarrollarse
cromatograma.
el indicador o luz
ultravioleta, si son
incoloros
3
Los compuestos que avanzan a lo largo
de la placa se ven atraídos por fuerzas
sobre la superficie del adsorbente,
interaccionando el disolvente con
ambos.
Pureza de los
disolventes
La separación por cromatografía de intercambio
iónico depende de la adsorción reversible de una
molécula de soluto cargada a un grupo de
intercambiadores iónicos inmovilizados de carga
opuesta.
Fin de la remoción
Regeneración de la
matriz
Fuertes: permanecen ionizadas en todo el
rango útil de pH.
Débiles: disminuyen su ionización en función
del pH.
-Gran sensibilidad
-Determinaciones cuantitativas exactas
-Determinación de compuestos no volátiles
(alto Peso Molecular, iones metálicos) o
termolábiles.
Pequeña Limita
capacidad purificaciones a
gran escala
Pureza de materias primas
Industria farmacéutica
Productos de degradación
Metabolitos en medicamentos en muestras biológicas
Análisis toxicológicos
Análisis de muestras medioambientales
-Fase Estacionaria:
El material que llena la columna (gel
o resina) está formado por partículas
con poros de un cierto intervalo de
tamaños.
DETERMINACIÓN DE ESTRUCTURA 3ª Y 4ª DE
PROTEÍNAS PURIFICADAS
Las moléculas se fijan sobre sustancias insolubles:
Alúmina (Al2O3)
Carbón activado
Tierra de Diatomeas (Kieselguhr)
Sacarosa pulverizada
Gel de sílice
Enlaces H O
Eluyente:
Hexano
Más empleados:
•octadecil (C18)
•octil (C8).
Purificacion de biomoleculas
proteínas y péptidos.
oligonucleótidos
Desalado
Analisis cuantitativo
Primera descrita, menos utilizada
Basada en interacción de los analitos con grupos
funcionales polares de la superficie de la fase
estacionarial originada por fuerzas eléctricas
entre dipolos permanentes o inducidos.
El componente menos polar se eluye primero,
debido a que es el más soluble en la fase móvil
Solventes muy
apolares:
Sílica con grupo: • hexano
grupo ciano • heptano
diol mezclados con
amino
solventes más
polares:
dietilamino
• isopropanol
• cloroformo
• etilacetato
Espectroscopía de
masas
Cromatografía líquidos supercríticos
La Tc de una sust. es la
temp. por encima de la
cual no puede existir en
fase liquida
independientemente de la
presión.
La Pc es presión de vapor de
una sust. a su Tc.
Una sustancia a T y P por
encima de su Tc y Pc
(punto critico) =
FLUIDOS SUPERCRITICOS
Es una modalidad híbrida entre cromatografía de
gases y de líquidos que combina mejores
características de cada una de ellas y permite la
separación y determinación de compuestos que no
son manipulados esas cromatografías.
* Fármacos * Tensoactivos
* Alimentos * Polimeros
* Pesticidas * Explosivos
* Herbicidas * Propelentes
FIN