Síntesis in vitro de péptidos

Método de Merrifield
Robert Bruce Merrifield
(1921 – 2006)

• Premio Nobel de Química 1984

''Por su desarrollo de la síntesis

química en una matriz fija"
 Robert Bruce Merrifield

• (1921- ) Bioquímico estadounidense, n. en Fort Worth, Texas, EEUU.

• Estudió en la Universidad de California (Los Ángeles),
• Fue investigador auxiliar en la Escuela Médica y docente del
Instituto Rockefeller (1949-66)
• Desde 1966 ocupó la cátedra de Bioquímica en esta institución,
donde desarrolló una serie de trabajos sobre la síntesis de péptidos
en la fase sólida de moléculas de aminoácidos y de proteínas que le
valieron en 1984 el premio Nobel de Química.
 Síntesis en
fase sólida de
péptidos
t-boc: reactivo bloqueante de grupo
amino

DCC: reactivo
reactivo
activador de
grupo carboxilo
 Solid-Phase Method
• This cycle of reactions can be readily automated,
which makes it feasible to routinely synthesize
peptides containing about 50 residues in good
yield and purity.
• In fact, the solid-phase method has been used to
synthesize interferons (155 residues) that have
antiviral activity and ribonuclease (124 residues)
that is catalytically active
La síntesis paso a paso

Obtenido de la página web:

http://www.um.es/qcba/inmov/inmov2.ppt
 Síntesis de Merrifield FASE LIQUIDA
FASE SÓLIDA INSOLUBLE

Cl4Sn

Cl CH2 O Et

Clorometilación
electrofílica

Poliestireno Preparación del soporte

 Síntesis de Merrifield FASE LIQUIDA
FASE SÓLIDA INSOLUBLE

Cl

O O
CH 2 C
Cl
R´ CH NH CO
O

Anclaje de un
aminoácido protegido
Poliestireno funcionalizado 1 al 10 %
 Síntesis de Merrifield FASE LIQUIDA
FASE SÓLIDA INSOLUBLE

CF3 COOH

CH 2 CH2Cl2
O O
C
R CH NH CO
O

Desprotección del grupo

amino
Primer aminoácido anclado
 Síntesis de Merrifield FASE LIQUIDA
FASE SÓLIDA INSOLUBLE

Cl

O O
C
CH 2
O O R´ CH NH CO
C
O
R CH NH 2

Anclaje del segundo

aminoácido protegido
Primer aminoácido anclado
 Síntesis de Merrifield FASE LIQUIDA
FASE SÓLIDA INSOLUBLE

CH2Cl2

CF3 COOH
CH 2
O O
C
O
R CH NH C
R´ CH NH CO
O Desprotección del grupo
amino
Segundo aminoácido anclado
 Síntesis de Merrifield FASE LIQUIDA
FASE SÓLIDA INSOLUBLE

HF

CH 2
O O
C
O
R CH NH C
R´ CH NH 2

Desanclaje del péptido

del polímero
Segundo aminoácido anclado
 Síntesis de Merrifield FASE LIQUIDA
FASE SÓLIDA INSOLUBLE

O OH
C
CH 2 O
F R CH NH C
O OH
C R´ CH NH2
O
R CH NH C

R´ CH NH2

Péptido obtenido
Liberación del péptido
 O O
Cl CH2 O Et C
R´ CH NH CO
Cl4Sn
O

CH 2
Cl
Síntesis de Merrifield

CH2Cl2

CH 2
CF3 COOH O O
O C
O
C R CH NH CO
CH 2
R´ CH NH CO O O O
CH2 C
O O
O R CH NH 2
C
O
R CH NH C

R´ CH NH 2 CO HF
O
Cl CH 2
F