ANÁLISIS GENÉTICO

DE LA CARIOGAMIA
EN S.CEREVISIAE
 CONJUGACION SEXUAL

• Sexo: determinado por dos alelos del

gen MAT (C-3, 20 cm centrómero). https://es.wikipedia.org/wiki/Saccharomyces_cerevisiae

• Células haploides expresan a o α según

el alelo del que sean portadoras.
• Diploides- heterocigotos MATa/MATα.

• Para que ocurra intervienen dos

feromonas, factor a y factor α.
• Causan transformaciones fisiológicas y
morfológicas.

https://alchetron.com/Saccharomyces-pastorianus
 HETEROTALISMO Y
HOMOTALISMO.
• Heterotalismo: necesitan la presencia de otro individuo
compatible para poder llevar a cabo la reproducción
sexual. Son por ello autoestériles.
• Homotalismo: son autocompatibles, es decir, capaces de https://www.amc.edu.mx/revistaciencia/images/revista/55_4/VidaSexHongos.pdf
autofecundarse y producir ascosporas.
• Estirpes: células derivadas de un cultivo primario con
propiedades o marcadores específicos.

• La alta tasa de cambio de sexo en estirpes

homotálicos se debe a la inestabilidad en su
fase haploide.
• La determinación del homo, alelo dominante
HO (gen no ligado al sexo).
• El alelo recesivo ho – heterotalismo.
• Hipótesis (“cassette”): cambio de sexo resulta de un
mecanismo tipo transposón (análogo al de bacterias).
- Elementos: gen MAT (det. Sexo), el gen HO y los genes
HML y HMR (determinadas Cond. Alélicas impedían el
cambio de sexo en estirpes HO).
• HML-brazo izquierdo a 64 cm y HMR brazo derecho a
65 cm.
• Según el modelo la información de MAT- secuencia
polinucleotidica de quita y pon, es reemplazada por
otra que viene de HML o HMR.
• 3 genes, formas alélicas a y α.
• Para que el cambio de sexo tenga lugar, uno de los  Una estirpe con genotipo : HMLa --- MATa --- HMRa NO
genes reserva info. dif. a MAT. CAMBIA DE SEXO; haploide estable.
(homotálismo) func. Perimtir el paso de info. desde HML o HMR
a MAT. Unidireccional.
MATERIALES Y MÉTODOS
ESTIRPES Mutantes de fisión nuclear Kar-
Descendencia meiótica
Mutaciones en 3 distintos
genes
Cruzamiento XW2
CruzamietoXW5
D
 MEDIOS DE CULTIVO
Medio mínimo (SD). Yeast nitrogen base w/o aminoacids 0.67%; glucose 2%.

Medio completo (YPD). Extracto de levadura, 1%, peptona 2%, glucosa 2%.

Medio selectivo: “Yeast nitrogen base w/o aminoacids 0.67%; glicerina 3%, glucosa 0.1%, histidina
20mg/L, sulfato de adenina 20mg/L. Citrato –fosfato pH6.5 0.1M. Sulfato de canavanina 60mg/L y nistatina
2mg/L.

Medio de preesporulación. Extracto de levadura 0.8%, peptona 0.3%, glucosa 10%.

Medio de esporulación: Extacto de levadura, 0.1%: glucosa 0.05%, acetato potásico 1%.

TODOS SOLIDIFICAN CON AGAR AL 2%. Crecimiento de cultivos (Temp. 30ºC)

SELECCIÓN DE MUTANTES Y CRUZAMIENTO
JC1 4836-8C
Fase estacionaria Fase estacionaria
Metanosulfonato de etilo

Mezcla en Medio
Completo

Incubar 18-20 horas

(Conjugación)
 Dilución Medio
selectivo

his1,
ADE1
his1, ADE1
HIS1, ade1 Parentales
his1, ade1
HIS1, ADE1 • Auxótrofos
complementarios
HIS1,
ade1
ESPORULACIÓN

Resiembra Híbridos a
medios de Medio de
en Medio pre- esporulación
Mínimo esporulación
 Obtención de estirpes diploides con
ANÁLISIS MEIOTICO.
capacidad conjugante.

• Diploide normal (heterocigótico para a/α) por

• La segregación de los cruzamientos se
cruzamiento de dos estirpes haploides (𝐾𝑎𝑟 +
estudió por tétradas.
y 𝐾𝑎𝑟 − o ambas 𝐾𝑎𝑟 − )
• En otros casos se recurrió al análisis masal
• El hibrido diploide se incubó en medio
de esporas.
completo.
• Se sembró en cajas con medio completo.
• Luz UV
TINCION DE NUCLEOS. • Se incubaron por 3 días.
• Colonias se replicaron en un MC. Césped de
una estirpe haploide. (1 noche)
• Se replicaron en MM (1 día)
• Mezclas conjugantes en medio
completo.
• Tenidas con mitraciclina y
observadas al microscopio con
iluminación de fluorescencia.
MEDIO SELECTIVO PARA KAR-

Canavanina
¿POR QUÉ
Impide SON SELECTIVOS?
el crecimiento de parentales

JC1- No utiliza carbono como glicerina

4836-8C- Es auxótrofa para leucina y

treonina, sensible a antibióticos

Diploides- Son recesivos para la resistencia

a canavanina y nistatina
HETEROPLASMONTES

JC1
No hay
4836 Núcleo JC1 Mitocondrias
4836-8C
fusión del
-8C nucleo

Parentales Heteroplasmonte Heteroplasmonte

 HETEROPLASMONTES “ACCIDENTALES”
Identificación de mutantes. Se colocan en Medio Completo.

Colonias obtenidas se resiembran en MC junto a un

césped.

Incubación por 4 horas. (Conjugación)

Siembra en Medio Mínimo por 1 día

Las colonias que no crecen en MM son mutantes de Kar-

CONCLUSIONES
Se han obtenido y estudiado 23 estirpes mutantes, incapaces de llevar a cabo
normalmente la fusión nuclear. De ellas 12 son portadoras de mutaciones alélicas a
la mutación kar1-1, descrita por Conde y Fink. Otras 5 son para el gen KAR2, y 1
mutante lo es par un tercer gen KAR3. La existencia de KAR2 y KAR3 se describe por
primera vez en este estudio.

No se logro identificar cual es el gen afectado en las 5 estirpes mutantes restantes.

Probablemente la existencia de un gen KAR4.

Se sospecha que las mutaciones kar afectan las placas nucleares.

UTILIDAD GENÉTICA DE LOS MUTANTES KAR-
Estudios de herencia citoplásmica.
Estudio de marcadores mitocondriales.
ESTIRPES Mutantes de fisión nuclear Kar- Mutaciones en 3 distintos
genes
BIBLIOGRAFÍA:

Julio Polaina Medina.(1980). Análisis Genético de la cariogamia en Saccharomyces

cerevisiae. Universidad de Sevilla, Facultad de Biología. España. Consultado en la url:
https://idus.us.es/xmlui/bitstream/handle/11441/24370/E_TD_029.pdf?sequence
=-1&isAllowed=y