ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
FITOQUIMICA
AISLAMIENTO Y ELUCIDACIÓN ESTRUCTURAL DE COMPUESTOS
FENÓLICOS (FLAVONOIDES )
INTEGRANTES:
• Yomaira Guashpa
• Nina Chiguano
• Maritza Estrella
• Gardenia Moreno
 AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE FLAVONOIDES

Los flavonoides y sus conjugados forman un grupo muy grande

de productos naturales. se encuentran en muchos tejidos de
plantas, donde están presentes dentro de las células o en las
superficies de diferentes órganos de plantas. Las estructuras
químicas de esta clase de compuestos se basan en un esqueleto
C6-C3-C6. Se diferencian en la saturación del anillo
heteroatómico

Los flavonoides pueden modificarse por hidroxilación,

metoxilación o O-glicosilación de hidroxilo. (Rostagno et al.,
2003; Herrera et al., 2004)
Se clasifican en varios subgrupos que incluyen los
siguientes: flavona , flavanona , flavonol , isoflavonoide , antoci
anidinay calconas. (Harborne, 1998).
 Las agliconas de flavonoides se pueden disolver con disolventes
no polares, como cloruro de metileno, éter etílico o acetato de
etilo. Los glicosídicos conjugados polares se disuelven en
disolventes (metanol y etanol), y estos disolventes orgánicos se
aplican para extracción.
Los procedimientos deben ajustarse
 Procedimientos en aparato Soxhlet: Mezclas de alcohol y
cuidadosamente debido a la posibilidad
agua en diferentes proporciones. Se aplican para la de Degradación de los derivados
extracción de flavonoides La eficiencia de extracción se flavonoides.
puede mejorar mediante la aplicación de ultrasonidos o
extracción líquida presurizada (PLE)
 Un Procedimiento realizado a temperatura elevada que oscila
entre los 60oC a 200oC (Rostagno et al., 2004). También se
puede utilizar la extracción de fluido supercrítico con
dióxido de carbono.
 Los glucósidos flavonoides asilados son especialmente
lábiles a temperaturas elevadas y frecuentemente se degradan
térmicamente durante el proceso de secado de los tejidos de
las plantas. (Rostagno et al., 2004)
 MÉTODOS DE SEPARACIÓN

 Se realiza a partir del material vegetal fresco y seco siempre

y cuando el proceso de secado no altere la composición de
los flavonoides.
 El material vegetal debe molerse finamente para de esta
forma facilitar la extracción de los compuestos flavonoicos
 Estos compuestos se pueden extraer indistintamente debido a
la solubilidad que estos presentan en diferentes solventes
orgánicos. (CARTAYA; 2001)

Los flavonoides que poseen un gran número de grupos

hidroxilos insustituidos o azúcares son considerados
compuestos polares, por lo que son moderadamente solubles en
solventes polares como: etanol, metanol, butanol, acetona,
DMSO, agua. Por otro lado, las agliconas menos polares como
isoflavonas y flavanonas tienden a ser más solubles en solventes
tales como éteres. La extracción de estos compuestos se puede
realizar con metanol al 85 %, con posterior filtración.
 Aislamiento y purificación.
Esta etapa es muy importante en la separación e identificación
de los flavonoides presentes en el extracto.
Con este objetivo se pueden utilizar diferentes técnicas
cromatografías: para la determinación de flavonoides en
extractos crudos de plantas o en fracciones son especialmente
utilizadas la cromatografía de papel (CP) y la cromatografía de
capa fina (CCF).
Por otro lado, son indispensable para la separación de
flavonoides la CP preparativa, la CCF, la cromatografía de
columna (CC) y especialmente la cromatografía Líquida de alta
resolución (HPLC). Cromatografía de papel bidimensional

El papel recomendado para el análisis de los extractos es el

whatman 3 MM (46 x 57 cm) o equivalente; se utilizan mezclas
de solventes cloroformo, ácido acético, agua (30: 15: 2) o (10:
10: 1) en la primera Corrida y ácido acético 15-30% en la
segunda, aunque son usadas también mezclas de butanol , n-
butanol, ácido acético y agua.
El revelado del cromatograma se realiza a la luz ultravioleta a
una longitud de onda de 366 nm, donde aparecen muchos
flavonoides como puntos coloreados, estos se intensifican o
cambian de color cuando se someten a vapores de amoníaco,
pudiéndose estimar de esta forma el tipo de flavonoide presente
en el extracto.
Los cuatro reactivos más utilizados con este objetivo son AlCl
3, Complejo Difenil-ácido bórico-etanoamina
(Naturstoffreogenz A), Acido sulfanílico diasotado (DSA) y
Borohidruro de sodio / HCl. (Verpoorte and Memelink, 2002).
La cromatografía de capa fina :es un Método de análisis
rápido, el cual re quiere muy pequeñas cantidades de muestra se
pueden utilizar como soporte celulosa, gel de sílice y poliamida.
La localización de los flavonoides en CCF es la misma que en
papel: los platos pueden revelarse a la luz ultravioleta (366 nm)
con la presencia o ausencia de vapores de amoníaco

Cromatografía de Columna: Esta técnica integrada consiste en

la aplicación de una mezcla de flavonoides (en solución) .Se
emplea para la separación de flavonoides a nivel preparativo
los adsorbentes más útiles utilizados en esta técnica son gel de
sílice, Poliamida, celulosa y sefadex.
Cromatografía Líquida de Alta Resolución:Esta técnica
(HPLC) pueden ser usados ​para la separación, determinación
cuantitativa e identificación de flavonoides.

Las columnas de c 18 son muy empleadas se usan

sucesivamente solventes como H 2 O / MeOH, H 2 O / MeOH /
HOAc y H 2 O / acetonitrilo en variadas proporciones para
cromatografiar flavonas, flavonoles, dihidroflavonoides,
catequinas, antocianidinas y glicósidos de flavonoides,
utilizando Sistemas de elución por gradientes. En una
separación típica de flavonoides glicosilados, dos solventes A
(1% HOAc) y B (MeOH) pueden usarse en variada
proporciones través de toda la corrida
Extracción, aislamiento e identificación de flavonoides de las partes aéreas del Chenopodium álbum

Las hojas de C. album se aplican como cataplasma para

picaduras de insectos, insolación , articulaciones reumáticas y
como laxante suave . objetivo del estudio fue aislar los
flavonoides mediante cromatografía flash y se caracterizó a
través de su análisis espectral como IR, 1H, 13C NMRR y MS.
(Sharma and Pracheta, 2013)

Los resultados mostraron que el rendimiento máximo del

flavonoide (7.335 mg / g) se obtuvo a partir de acetona. Este
extracto de acetona se sometió a cromatografía
ultrarrápida para el aislamiento de flavonoides. La
caracterización de flavonoides aislados se realizó mediante UV,
IR, 1H y 13C RMN y MS. Sobre la base del análisis químico
y espectral, la estructura se aclaró como 2- (3, 4-dihidroxifenil)
-3, 5, 7-trihidroxi-4H-cromen-4-ona, un flavonoide.
La caracterización de flavonoides aislados se realizó por IR, 1 H
NMR y MS. Sobre la base del análisis químico y espectral la
estructura se aclaró como 2- (3,4-dihidroxi-5-metoxi-fenil) -3,5-
dihidroxi-6,7-dimetoxicromen-4-ona, un flavonoide. Este
compuesto fue aislado por primera vez de esta planta.
Extracción, aislamiento e identificación de flavonoides de hojas de Euphorbia neriifolia

La HPTLC de diferentes extractos se realizó utilizando la fase móvil n-butanol: ácido

acético: agua (2: 2: 6).Para la caracterización del compuesto IR, se realizaron espectros
de RMN y de masas. La presencia de flavonoides (ENF) se confirmó mediante pruebas
de detección, que ilustraron una prueba positiva para flavonoides y negativa
para esteroides , terpenoides y alcaloides . ( Harborne, 1998 ).
El cromatograma de HPTLC mostró que se observó un número máximo de componentes
en el modo de absorbancia de UV y fluorescencia.
Visto la actividad anticancerígena de este nuevo flavonoide en ratones y se observó que
el flavonoide aislado era capaz de proteger la arquitectura tisular y podía minimizar las
anomalías y la carcinogenicidad causadas por la N-nitrosodietilamina ( Sharma y
Janmeda, 2013)
Esto podría deberse a la inhibición de los radicales ROS y a la
neutralización de los radicales libres, lo que proporciona
evidencia científica del uso terapéutico etno-medicinal para
tratar el cáncer.
El flavonoide aislado fue 2- (3,4-dihidroxi-5-metoxi-fenil) -3,5-
dihidroxi-6,7-dimetoxicromen-4-ona (C 18 H 18 O 9 ) extraído
de Euphorbia neriifolia posee un potencial significativo para la
eliminación Los radicales libres, ROS y también
inhibe la peroxidación de lípidos y por lo tanto
tienen potencial anticancerígeno. ( Harborne, 1998 ).

La presencia de flavonoides se confirmó mediante pruebas de

detección, que ilustraron una prueba positiva para flavonoides y
negativa para esteroides , terpenoides y alcaloides
 Elucidación estructural y evaluación de la actividad
antioxidante de los compuestos fenólicos clave aislados
de semillas de longan ( Dimocarpus longan lour).

Es un árbol tropical perenne,
nativo del Sur de China y el
sudeste de Asia
En el presente artículo se
Las semillas son ricas en analizan los compuestos
polifenoles por lo que se ha fenólicos responsables de la
reportado como una buena actividad antioxidante de
fuente de antioxidantes Semillas de longan por
dietéticos resonancia magnética
nuclear (RMN) y otros

( Jin-yu Chen, 2015)

 Extracción y aislamiento.
La solución de
. El extracto crudo
Las semillas etanol se combinó
(10.85 g) se
longan (300 g) se y se evaporó a
disolvió en 50 ml
sometió a reflujo presión reducida a
de etanol al 40%,
con 90% de 35ºC para eliminar
y cargado en una
etanol acuoso a 70 el disolvente
columna de resina
° C durante 4,5 h. antes de la
macroporosa
liofilización
( Jin-yu Chen, 2015)
Se usó etanol para eliminar el azúcar y eluir los
polifenoles a un caudal de 1.5 ml / min,
respectivamente.

Después de la elución, el eluato se concentró

usando un evaporador rotatorio bajo vacío hasta
un volumen final de 30 ml.

Se realizó el aislamiento de polifenoles de semilla

longan en un sistema de cromatografía líquida con
una columna de HPLC semipreparativa
( Jin-yu Chen, 2015)
Análisis espectroscópico de compuestos fenólicos a partir de semillas
longan
• Los espectros UV se registraron en un espectrofotómetro y las muestras fueron disueltas en
metanol para dar una concentración de 20 g / mL
Espectros
ultravioleta (UV)

• Las muestras se disolvieron en metanol a 0,1 g / l. Luego, 100 l de la solución.

• se importaron a una técnica de ionización por electropulverización (ESI) a un caudal de 100 l / h,
con la temperatura a 180 ° C.
FT-ICR – MS • Los espectros de masas se obtuvieron en modo de ion negativo.

• Se realizó un análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento – ionización por

electropulverización – espectrometría de masas (HPLC – ESI – MS) utilizando un espectrómetro.
HPLC – ESI – MS • La fase móvil y el gradiente fueron los mismos que se describieron anteriormente.

( Jin-yu Chen, 2015)

 Análisis de resonancia magnética nuclear
(RMN) 1 H RMN (500 MHz), 13C RMN (125
MHz) y heteronuclear
Los espectros de
correlación de enlaces
múltiples (HMBC) se El tetrametilsilano se
registraron en un usó como un estándar
espectrómetro en interno.
dimetilsulfóxido
perdeuterado
(Rangkadilok, 2017)
 • ( ácido 6-hidroxi-2,5,7,8- tetrametilcromo-2-
ácido carboxílico) Se produjo haciendo
reaccionar 10 ml de una solución ABTS (es
Ensayo de un compuesto químico utilizado para
observar la cinética de reacción) + 7 mm con

Trolox 176 l de persulfato de potasio

• La reacción se inició mediante la adición de

Absorción 25 l de 153 mM de2-metilpropionamidina.
• los el resultado se registró en un lector
fluorescente cada 5 minutos durante 140 min,
de radicales con la longitud de onda de excitación a 485
nm y la longitud de onda de emisión a 530

de oxígeno nm. Trolox se utilizó como estándar

(Rangkadilok, 2017)
El contenido de compuestos Lo que demostró la gran el
fenólicos totales en el longan potencial de utilizar semillas
original. semillas fue de 36,15 longan como la fuente natural
mg / g de estas compuestos fenólicos

Los cuales se obtuvieron

Los compuesto con mayor
mediante semipreparación
contribución a la capacidad
HPLC, y sus estructuras se
antioxidante de los polifenoles
identificaron más a fondo por
de semillas longan son las
uno y espectroscopia de RMN
estructuras 4 y 6
bidimensional

(Rangkadilok, 2017)
 COMPUESTO 6
Se atribuye a la estructura del
ácido hidroxicinámico
Es debido a los grupos orto-
dihidroxilo y trihidroxilo en la
molécula
Derivados del ácido
hidroxicinámico podrían eliminar
radicales de manera efectiva
La mayor actividad antioxidante del
compuesto 6 que la del compuesto
El anillo de fenilo de los ácidos 5 podría explicarse por la grupo
hidroxicinámicos desempeñó un metoxi adicional unido en su C-3
papel esencial en la estabilización
del radical por resonancia

Lo que aseguró mayor capacidad de

donación de H y posterior
estabilización radical

COMPUESTO 4 (Rangkadilok, 2017)

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- aislamiento de flavonoides Article scientific (internet) archive recuperate el 15 de December del 2018 disponible in
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