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Uma mãe prepara o café da manhã do filho. Como está muito apressada,
coloca 2 colheres de achocolatado no leite, e não 5 como o filho gosta.
O garoto reclama:
- E aí, mãe, vai regular o Nescau?
Como o garoto sabe, mesmo antes de beber o leite, que a mãe colocou
menos achocolatado que as 5 colheres que sempre coloca?
PRINCÍPIO DE LAMBERT-BEER
Pense um pouco...
PRINCÍPIO DE LAMBERT-BEER
Imaginemos outra situação... Observe a figura abaixo:
• Ex:
– DNA e RNA = 260nm
–Proteínas = 280nm
–Células bacterianas= 600nm
Espectrofotometria
–A fonte de luz tem seu feixe localizado pelo colimador (C) e é fracionada (decomposta) sobre um
prisma de quartzo ;
–Uma fenda seletora escolhe uma porção desse espectro como Luz Monocromática (Luz MC) que
passa através da cubeta que contém a solução onde parte será absorvida e parte será transmitida;
https://www.youtube.com/watch?v=R4ZT3g2-Ryg
https://www.youtube.com/watch?v=EYRmnC7RdNQ&t=11s
Amostra absorve a luz amarela, deixando passar as outras cores. Então
aparece uma mistura dessas cores, a cor rosa.
Componentes do espectrofotômetro
(a) fonte de luz, (b) colimador, (c) prisma ou rede de difração, (d) fenda seletora (e) cubeta
contendo solução, (f) detector, (g) leitor.
Componentes do espectrofotômetro
Fonte de luz
A fonte de energia eletromagnética precisa fornecer radiação estável e com
intensidade razoavelmente constante por toda a faixa de λ na qual se pretende
usar. Devido a essas exigências, geralmente utiliza-se um lâmpada para a região
do visível e do IV e outra lâmpada para o UV.
Fendas e lentes
Cubeta em Quartzo
Cubeta descartável
Cubeta em vidro Óptico
Cubeta 2 faces escuras
Detectores
Existem várias formas de se detectar ondas eletromagnéticas, sendo que todas
estão baseadas na conversão da energia radiante em energia elétrica, que podem
então ser detectados por um equipamento convencional.
-Células Fotovoltaicas
-Células Fotoelétricas
Padrão branco em espectrofotometria
Quando um feixe de luz monocromática atravessa uma cubeta de
espectrofotômetro, parte da luz sofre refração, reflexão, absorção pelos
reagentes e outras interações indesejáveis.
Para eliminar tais interferências, deve-se zerar o aparelho com uma solução
que é denominada “branco”.
Equação
y = 0,0189x - 0,0743