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Universidad Católica de Pereira

Facultad de Ciencias Humanas, Sociales y de la Educación


Programa de Psicología
2015

Neurociencias y Conducta I
Docente: Rosario Iodice
Intensidad Horaria: 4 horas
Créditos: 4
Fase Formación: Básica
Semestre: II
Área Académica – Componente: Núcleo Psicobiológico
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MÉTODOS Y ESTRATEGIAS DE INVESTIGACIÓN

- Llevar a cabo un proyecto de investigación en la neurociencia comportamental requiere dominar muchas técnicas
experimentales.

- Los investigadores tienen que conocer las ventajas y las limitaciones de los métodos que emplean.
- Hacer investigación significa cuestionarse sobre la naturaleza del fenómeno estudiado

- En el caso de la fisiología de la conducta las conclusiones se extraen desde un programa de investigación que permite
comparar los resultados del estudio que bordean el mismo problema.

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ABLACIÓN EXPERIMENTAL

- Destruir una parte del encéfalo y evaluar la conducta subsecuente del animal.
- La ablación experimental es el más antiguo de los métodos utilizados en neurociencia

Evaluación de los efectos comportamentales del daño cerebral

- El daño cerebral se describe como una lesión cerebral


- Por lo tanto el investigador hace un estudio de la lesión
- El funcionamiento del área cerebral puede deducirse basándose en las conductas que un animal ya no puede
realizar.
- Por esta razón es importante confirmar que la lesión condicione la conducta del sujeto y no que la conducta
influencie el desarrollo de una tarea.

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ABLACIÓN EXPERIMENTAL

Producción de lesiones cerebrales

- Se anestesia al animal
- Se corta el cuero cabelludo
- Se corta la dura madre
- Se extrae parte del cerebro
- Se deja descubierta la corteza
- Se puede succionar el cerebro

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ABLACIÓN EXPERIMENTAL

Lo más difícil es:

- Generar lesiones en las regiones subcorticales (por debajo de la corteza)


- Para alcanzar estas zonas se usa una corriente eléctrica
- El electrodo es guiado por un método estéreotaxico
- La corriente quema el tejido cerebral

Lesiones exitotóxicas

- Producida por el acido caínico que genera una sobreexcitación


de la neurona hasta producir su muerte.

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ABLACIÓN EXPERIMENTAL

Lesiones producidas por la 6-hidroxidopamina


- Una sustancia parecida a la dopamina y narodrenalina, por lo tanto se conecta con los respectivos receptores

NOTA

- Cuando se genera una lesión inevitablemente se pueden dañar también áreas cercanas, por esta razón los
investigadores usan una muestra amplia de animales lesionados que sufren unas lesiones falsas, es decir se
llega así a la región cerebral pero no se quema el tejido y no se inyecta sustancias.

Lesiones reversibles

- Se pueden obtener mediante el uso de un anestésico local inyectado en el cerebro (muscimol)


- Se puede también enfriar el tejido nervioso con criodos 6
Cirugía estereotáxica

- Se realiza gracias al uso atlas


- Los huesos craneales forman suturas
(en el niño se llaman fontanela)
- En el adulto se llaman Bregma
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El atlas estereotaxico

- Incluye figuras o esquemas de las secciones que se desea alcanzar.

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Aparato estereotaxico

- Puede usarse para destruir


neuronas o estimularlas

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Métodos histológicos

- Una vez producida la lesión cerebral


- Hay que seccionar el tejido cerebral para su observación al microscopio
- Para hacer esto es necesario: fijar, seccionar, teñir y examinar el encéfalo

Fijación y obtención de secciones

- Antes que nada se hace una perfusión el tejido es decir se quita la sangre y se reemplaza con otro líquido
- Para mantener intacto un tejido cerebral es necesario usar un fijador (formalina)
- Después se corta el cerebro con un micrótomo (10 a 80 µm)
- Para el microscopio electrónico menos de 1 µm.

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Métodos histológicos

Tinción
Los colores más usados son a base de ARN y ADN y son

- Azul metileno
- Violeta de cresilo

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Métodos histológicos

Microscopia electrónica

- Un haz de electrones pasa de un lado a otro del


- tejido y la sombra del mismo se proyecta sobre una
- placa fotográfica la cual queda revelada
- por los electrones.

- El microscopio electrónico
- de barrido posee menos
- resolución pero con imágenes
- tridimensionales.

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Métodos histológicos

Marcado de axones eferentes

- Marcado de axones eferentes mediante el marcado anterógrado


- Se usa PHA-L Phaseolus vulgaris leukoagglutinin, producida por la judía.
- Se inyecta en el cerebro mediante estereotáxia
- Se sacrifica el animal y se observa el tejido mediante
- el método de la inmunocitoquímica
- El método usa los mismo anticuerpos del animal

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Métodos histológicos

Marcado de axones aferentes

- Marcado de axones aferentes mediante el marcado retrógado


- Se usa oro fluorado
- Se examina el tejido bajo una luz adecuada
- Las moléculas de oro fluorado emiten fluorescencia

El método mas eficaz es del virus de la seudorrabia


Un virus del cerdo que afecta las neuronas
Con la inmunocitoquímica se marca el virus

NOTA estos métodos se pueden combinar entre ellos


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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

- Tomografía axial computarizada (TAC)


- Se coloca la cabeza del paciente en un amplio cilindro que contienen un aparato de rayos X que atravesaban
la cabeza del paciente y se evalúa la cantidad de radioactividad que se transmite.

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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

- Registro y estimulación de la actividad neuronal


- La actividad eléctrica del cerebro puede registrarse mediante la creación de impulsos sinápticos y post-
sináptico.

- Los registros pueden realizarse crónicamente (durante un período de tiempo largo)


- O de forma aguda (en un tiempo relativamente corto y bajo efecto de la anestesia, sirve para los estímulos
sensoriales)

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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

- Microelectrodos
- Con este método se realiza un registro de neuronas individuales
- Por cuanto fino puede ser la punta de un electorado
siempre será un cilindro vacío

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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

- Microelectrodos

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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

- Macroelectrodos
- Registran los potenciales post-sinápticos de miles o millones de neuronas
- Son constituidos por hilos, alambres, discos metálicos puesto por encima del cuero cabelludo
- Es una técnica que se puede usar inclusive en humanos
- Y registra la actividad cerebral por medio de un polígrafo

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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

- Magnetoencéfalografía
- Puede usarse para identificar el foco de una crisis epiléptica
- Omitir la actividad cerebral de una persona
- durante una tarea cognitiva

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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

Registro de la actividad metabólica y sináptica del cerebro

- El experimentador inyecta la 2-desoxiglucosa (2-DG) una sustancia parecida a la glucosa que entre
directamente en el torrente sanguíneo.
- A diferencia de la glucosa no es digerida por lo tanto se queda adentro de la célula.
- Existe una técnica que usa la proteína FOS

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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

Registro de la actividad metabólica y sináptica del cerebro

- PET (Tomografía por emisión de positrones)


- Se inyecta al paciente la 2-DG predictiva, cuando la molécula se degrada emite positrones que son detectado
por el equipo. El ordenador determina cuáles son las regiones del encéfalo que han absorbido la sustancia
respectiva y genera una imagen.

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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

Registro de la actividad metabólica y sináptica del cerebro

- Resonancia magnética funcional RMf


- Se detecta los niveles de oxigeno celular

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Métodos histológicos

Estudio del cerebro humano in vivo

Microdialisis
- Son técnicas que ponen de manifiesto la secreción de
- neurotransmisores o neuromoduladores
- en regiones específicas del cerebro.

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Métodos histológicos

- Estimulación de la actividad neural


- Puede ser de tipo eléctrico
- (como hemos visto en todos los casos anteriores)
- Puede ser de tipo químico
- En este segundo caso se pueden usar sustancias químicas mediante una cánula insertada en el encéfalo
- Técnicamente es más complicada
- La ventaja es que activa más células a la vez

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Métodos histológicos

Microiontoforesis
- Es una técnica parecida a la descrita anteriormente
- Usa micro pipetas para llegar a sitios específicos
y estimular neuronas circunscritas
- Contemporáneamente se usan micro electrodos

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Estimulación magnética Transcraneal EMT

- Es una bobina electromagnética con la forma de 8


- La bobina se acerca el cráneo y el punto de cruce en medio del 8
es aquél que estimula la corteza
- Los efectos son muy parecidos a la estimulación eléctrica en directo.

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Métodos neuroquímicos

- Inmunocitoquimica
- Hibridacion in situ

- Autorradiografia
se exponen sección del tejido cerebral en una solución que contiene un ligando para un receptor específico.
Después se enjuagan las secciones de manera que la única radiactividad que queda es la de las moléculas ligando
que se ha unido a sus receptores.

Determinar la sustancia química y las conexiones de las neuronas es definida técnica del doble marcado

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Métodos neuroquímicos

- Inmunocitoquimica
- Hibridacion in situ

- Autorradiografia
se exponen sección del tejido cerebral en una solución que contiene un ligando para un receptor específico.
Después se enjuagan las secciones de manera que la única radiactividad que queda es la de las moléculas ligando
que se ha unido a sus receptores.

Determinar la sustancia química y las conexiones de las neuronas es definida técnica del doble marcado

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Métodos genéticos

- Estudios con gemelos


- Estudios sobre adopción
- Mutaciones dirigidas, es decir una mutación genética generada en el laboratorio y después inyectada en el
modelo animal que se está utilizando

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