EMPRESA COLOMBIANA

DE PETROLEOS

INSTITUTO COLOMBIANO DEL PETROLEO

BIO-REMEDIACION DE AGUAS
Y SUELOS CONTAMINADOS
CON HIDROCARBUROS

DIVISIÓN DE TECNOLOGÍAS COMPLEMENTARIAS

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DE PETROLEOS
Biorremediación de aguas y suelos
contaminados con hidrocarburos

• Evaluación de tecnologías
• Selección de tecnología

* Medio
* Contaminante: - Volatilidad
- Movilidad
- Biodegradabilidad

• Protocolo para biorremediación

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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DE PETROLEOS
Caracterización del sitio/
estudio Factibilidad
Evaluación de aplicabilidad del
proyecto de biorremediación
• Propiedades del
contaminante.
• Propiedades químicas del
sitio.
• Propiedades físicas del sitio.
• Propiedades microbiológicas
del sitio.
Seleccione:
• Método de biorremediación
(in situ o ex-situ).
• Aceptor de e- y la trayectoria
metabólica.
Figura 1. Protocolo para biorremediación
de suelo contaminado
Estudio de Tratabilidad
Determine el criterio de diseño
• Cinética de
biorremediación.
• Factibilidad y obtención del
punto final.
• Parámetros y costos de la
implementación a full
escala.
Diseño
Definir:
• Aproximaciones del
tratamiento. para contener
todas las fases.
• Planos y especificaciones.
• Contratistas.
Diseño:
• Tuberías y estructuras de
contención.
• Concentración de nutrientes
y velocidades de carga.
• Sistema de entrega del
aceptor de e- y nutrientes.
Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
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DE PETROLEOS

Caracterización del área contaminada

Tipo de suelo basado en el sistema USC

Símbolo Grupo de Arcilla Limo Grava Arena %w

Muestra
del grupo Clasificación %w %w %w Fino Medio Grueso

Suelo área SM Franco-limoso 18.0 20.0 11.1 36.9 8.1 5.9

afectada

Composición de la fracción arcillosa

Clay Fraction (%W)

Muestra
Esmetita Cloritas Illitas Vermiculita Interestratificado Caolinita Cuarzo

Suelo área 8 3 20 15 49 5
afectada

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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Características de las muestras de
suelo limpio y contaminado

Análisis Suelo limpio Suelo contaminado

pH: Ca Cl2 0.01 M 3.56 ± 0.01 6.91 ± 0.06

pH agua 4.04 ± 0.05 7.31 ± 0.02
Humedad %w 2.24 ± 0.12 2.57 ± 0.6
COT %w 1.77 10.495
CIC1, mequiv/100g 4.24 6.47
Nitrógeno, mg/kg 2560.80 2213.98
Fósforo, mg/kg 19.855 9.972
Materia Orgánica %w 3.54 19.24
TPH, %w N.A. 6.52 ± 0.073

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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Aislamiento de Degradadores de Polinucleares
de Bajo Peso Molecular - Vía Rápida

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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Metodología Analítica

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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Caracterización Lodo Carboquímica

COMPOSICIÓN BÁSICA

31.5 %
HIDROCARBUROS TOTALES (31.5%)
13.9 %
3.7 %
(4,5)
34.8 % (1,2)
8.0 %
(2,6)

33.7 %

AGUA SÓLIDOS T.P.M.

74.4 %
FRACCION AROMATICAS (24.13 %) (24,13)

20 %
(4,87) RESINAS SATURADOS AROMATICOS ASFALTENOS

59 %
(14,43)

20 %
(4,87)

Investigación y Desarrollo Ambiental

DESCONOCIDO PAH's (US-EPA) FTALATOS
Biotecnología
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Montaje Experimental

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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Evaluación de la Toxicidad del Residuo

TOXICIDAD DE LA FASE SÓLIDA DIRECTA

EC100 = 12,5%

LODO
NEMATODO “PANEGRELLUS REDIVIVUS”

NAHTALENE 7018 PESO DE MUESTRA

METYLNAPHTHALENE 4064
TOXICIDAD = 0% Sobreviviente
ACENAPHTHALENE 708 0,5 g. * GENOTOXICIDAD = 0% Maduros
ACENAPFTHENE 1899
FLUORENE 4251
PHENANTHRENE 7496
0,0625 g. ** TOXICIDAD = 67% Sobreviviente
GENOTOXICIDAD = 21% Maduros
ANTHRACENE 17080
FLUORANTHENE 1743
PYRENE 1306
BENZO (a) ANTHRACENE 706
CRYSENE 706 * Completamente Tóxico
BENZO (a) FLUORANTHENE 179
BENZO (k) FLUORANTHENE 287
** Muy Genotóxico
BENZO (a) PYRENE 410
INDENO (1,2,3 - cd) PYRENE 221
BIDENZO (a,h) ANTHRACENE 59
BENZO (g,h,i) PERYLENE 183
BUTHYLPHTHALATE 5524 ASISTENCIA TÉCNICA INTERNACIONAL
OCTYLPHTHALATE 43859

TOTAL PAH’s 48.316

TOTAL PHTALATES 49383 Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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Seguimiento de la Biodegradación de PAH’s

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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DE PETROLEOS
Diseño y construcción
Sistema de Pretratamiento

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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DE PETROLEOS
GENERACIÓN DE RESIDUOS EN
LA INDUSTRIA PETROLERA

La Ciénaga Aceitosa No. 6 del Complejo Industrial de

Barrancabermeja en 1984
Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
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DE PETROLEOS
Configuración típica de una fosa
de acumulación de residuos aceitosos

FASE ACEITE (SLOP OIL)

(BSW 0 - 10%)

EMULSION DE AGUA EN
ACEITE (BSW 5-40%)

AGUA ACEITOSA
(0-20% de aceite y sólidos)

AGUA CONTAMINADA
Contenido de Aceite < 1%

SUSPENSION DE LODO
(BOMBEABLE-Contenido de agua
del 50-80%)
SUELO CONTAMINADO LODO ACEITOSO
(No Bombeable)

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
 EMPRESA COLOMBIANA
DE PETROLEOS Tratamiento y recuperación
de slop oil

Esquema General Deshidratación

de la Planta de deshidratación Gravitacional
Proyecto Ciénaga 6

Deshidratación
Térmica

Piscinas de Succión
Deshidratación
Química

Deshidratación
Electrostática
Entrega de producto
a Refinería Almacenamiento Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
EMPRESA COLOMBIANA
DE PETROLEOS Tratamiento y recuperación
de slop oil

Planta de tratamiento de slop.

Proyecto Ciénaga 6

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
 EMPRESA COLOMBIANA
DE PETROLEOS
Lavado Emulsionado:
Principio del proceso

Aceite
TENSOACTIVO sobrenadante
Sólido
Impregnado

Micelas

Sólido
despojado
Matriz
Acuosa

El surfactante llega al lodo y La afinidad del sólido por el aceite disminuye,

cambia la mojabilidad de las por lo que la mayor parte del crudo
partículas sólidos se desprende y migra hacia la superficie.
CONTENIDO INICIAL DE CONTENIDO FINAL DE Los sólidos despojados de aceite
ACEITE EN EL LODO ACEITE EN EL LODO sedimentan más facilmente. El crudo
15-35% > 10% se colecta en el sobrenadante.

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
 EMPRESA COLOMBIANA
DE PETROLEOS
Lavado Emulsionado:
Esquema de proceso

Lodo Lodo despojado

Crudo
Aceitoso CENTRIFUGA a
Aplicación de biodegradación
Tensoactivos
Agua Aceitosa
Solvente

A sistema de
ZARANDA Tanques de Tratamiento de
Proceso Aguas
Vapor
Sólidos
A sistema de
gruesos a
Tratamiento de
biorremediación
Crudo

Lodo aceitoso a Bomba de

biorremediación Lodos

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
EMPRESA COLOMBIANA
DE PETROLEOS
Lavado Emulsionado:
Estudios a nivel piloto

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
EMPRESA COLOMBIANA
DE PETROLEOS
Experiencia industrial de Ecopetrol ICP:
Ciénaga aceitosa No. 6 del CIB

Diciembre de 1.993

Diciembre de 1.997
Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
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DE PETROLEOS
Experiencia industrial de Ecopetrol ICP:
Ciénaga aceitosa No. 6 del CIB

Diciembre de 1.993

Diciembre de 1.997 Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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DE PETROLEOS

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
EMPRESA COLOMBIANA
DE PETROLEOS
Tratamiento de
Aguas contaminadas

Piscinas de sedimentación para

tratamiento de aguas en campo

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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DE PETROLEOS
Oxigenación mediante
boquillas eyectoras

AIRE

El aire es
succionado y
AGUA A disuelto en el agua
PRESIÓN

Cabeza de presión se Se hace transferencia

convierte en cabeza de de oxígeno al agua
velocidad en tratamiento
Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
EMPRESA COLOMBIANA
DE PETROLEOS
Tratamiento biológico de aguas
residuales industriales

Biodegradación de Fenoles
PTAR - Refinería de Barrancabermeja
Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
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DE PETROLEOS

300 0.4
0.35
250
0.3
200
0.25
ppm Fenol

150 0.2 gr/L

100 0.15
0.1
50
0.05
0
0
0 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 192
-50 -0.05
Tiempo (h)

Fenol A Fenol B Fenol alimentación Biomasa R. A Biomasa R B

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Biotecnología
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Refinería de Cartagena
Sistema de aireación en biorreactores

Sistema de oxigenación utilizando boquillas inyectoras

Refinería de Cartagena.
Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
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• Disminución de residuos en la fuente

• Segregación de corrientes
• Reuso de corrientes
• Combinación de diferentes tecnologías

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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Biofiltro para el Tratamiento Integral
de Aguas de Producción

Objetivo:
Proveer una tecnología para el tratamiento integral de
efluentes de producción en superficie.

Beneficios:
• Remoción de Bario y otros metales pesados de aguas con
eficiencias del 98%.
• Biodegradación de fenol con eficiencias del 95-100%.
• Bajos requerimientos de inversión.
• Pretratamiento efectivo para la solución de problemas de
incompatibilidad de aguas.
• Mejoramiento del calida ambiental del efluente.
• Tecnología Biológica de punta.
Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
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Biofiltro para el Tratamiento Integral
de Aguas de Producción

Descripción de la Tecnología
Componentes Abióticos
1. Diseño de las celdas .
2. Distribución de las Celdas en el sistema

TAPETE DE ALGAS Y BACTERIAS

1 2
SEGMENTO A

Componentes Biológicos: SEGMENTO B

1. Cianobacterias .
2. Bacterias oxidadoras de sulfuros .
3. Bacterias Biodegradadoras. 3

Localización del Biofiltro en

la planta de tratamiento de aguas

Operaciones de separación y sedimentación

AGUA TRATADA
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Biotecnología
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Biofiltro para el Tratamiento Integral
de Aguas de Producción

Descripción de la Tecnología

Los costos de Instalación de la tecnología pueden ser estimados

de la siguientes relación :
• Costo estimado en US = 250 M + 12000
• Donde M es el número de metros cúbicos/día a tratar

Se deben tener en cuenta los siguientes puntos:

• Los costos de aplicación de la tecnología resultan favorables
para efluentes mayores a 90 m3/día. La tecnología es
Viable para efluentes menores a 1000 m3 / día
• Los costos son modificables de acuerdo a las facilidades de
cada unidad de producción.
Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
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Tratamiento segregado de aguas agrias

Sistemas inmovilizados

Ventajas:
• Altas concentraciones
celulares
• Reuso de la biomasa
• Disminución en costos
• No hay lavado del sistema
• Flexibilidad en el diseño

Desventajas:
• Limitaciones difusionales
• Estabilidad mecánica de la
matriz

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Biotecnología
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Análisis de Restricción- ADNr 16 S
Consorcio degradador de fenol

Rsa I Hae III Rsa I Hae III

MP 1 2 3 4 5 6 7 8 MP 9 MP 10 11 12 13 14 15 MP

1500 pb
1500 pb
1000 pb
1000 pb

500 pb
500 pb

200 pb
200 pb

Consorcio 2000-GCB Consorcio 1997-GCB

Análisis de Restricción del ADNr 16S de cepas consorcios fenol. MP Marcador de

peso molecular 100 pb. 1. ICP 70 ; 2. ICP 244; 3. ICP 245; 4. ICP 246; 5. ICP 70; 6.
ICP 244; 7. ICP 245; 8. ICP 246 ; 9. Fragmento sin digerir; 10. ICP 16; 11. ICP 18;
12. ICP 21; 13. ICP 16; 14. ICP 18; 15. ICP 21. Investigación y Desarrollo Ambiental
Biotecnología
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Evaluación de soportes para inmovilización

Aspectos considerados en la
selección del soporte

- Inmovilización de Biomasa
- Actividad de degradación
- Costos
100
- Resistencia 90
Soporte, gr 80 Gramos de Soporte para

- Manipulación 70
60
10E7 UFC

50
- Volumen útil 40
30
20
10
0
Gravilla Malla Fibra Anillo
Nylon Jacger
Investigación y Desarrollo Ambiental
Tipo de soporte Biotecnología
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Investigación Biotecnológica en Degradación
de Residuos - Producción Enzima Lacasa en FES

Aumentar Producción

Producción de caldo enzimático

crudo:

• Act. Lacasa inicial: 12 U/mL

• Evaluando optimización de
condiciones ambientales en el
reactor: 26 U/mL en 15 días
• Evaluación de cofactores
nutricionales 33 U/mL

Investigación y Desarrollo Ambiental

Biotecnología
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Investigación Biotecnológica en Degradación de
Residuos - Oxidación de Fenol en Matriz Dopada

Efecto de la concentración Efecto del pH

de sustrato
100
100 93,86R %
93.86 %R
CV,1.40%
CV,1.4%

79.48%R 88.60 %R
80 CV,2.36% 80 CV,1.99%
Remoción de fenol, %

Remoción de fenol,%
77.38%R
CV, 2.71%

60 60

46.32%R
CV,2.11%
40 25 ppm 40
pH 3.5
100 ppm
pH 5.0
20 400 ppm 20

pH 7.0

0 0
0 5 10 15 20 25 30
0 5 10 15 20 25 30
Tiempo de reacción, h Tiempo de reacción, h

Condiciones: pH de reacción 5.0 (buffer Condiciones: 400 ppm de fenol,sin

citrato-fosfato 50 mM), sin adición de adición de aire, con 5 U/mL de Lacasa
aire, 5 U/mL de Lacasa cruda y fenol a cruda a tres pH de reacción 3.5, 5.0 y
25, 100 y 400 ppm. 7.0 (buffer citrato-fosfato 50 mM) .
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Investigación Biotecnológica en Degradación de
Residuos - Oxidación de Fenol en Matriz Dopada

Efecto de la estrategia de adición 100

de la enzima 89.49%R
CV,1.17% A
80

Remoción de fenol, %
77.38%R
Condiciones de reacción: pH de reacción 5.0 60
CV, 2.71%

(buffer citrato-fosfato 50 mM),fenol a 25, 100 y

400 ppm y 5 U/mL de Lacasa cruda adicionada 40

AD1
en dos estrategias. 20

AD1: adición de la concentraciónde enzima de 25 ppm AD2

5U/mL, 3mL,al tiempo cero de reacción. 0

0 5 10 15 20 25 30

Tiempo de reacción, h
AD2: adición fraccionada de la enzima así: 1.5
mL (0h), 0.5 mL(1h), 0.5 mL (2h) y 0.5 mL(4h).
100 93.86%R

80
90.23%R
CV,1.34%
B 100
CV,1.40%

92.05%R
C
79.48%R 80
CV,5.08%

Remociòn de fenol
Remoción fenol, %

CV,2.36%

60
60

40 AD1
AD1
40

20
100 ppm AD2 400 ppm AD2
20

0
0
0 5 10 15 20 25 30 0 5 10 15 20 25 30

Tiempo de reación, h
Tiempo de reacción, h
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Biotecnología
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Investigación Biotecnológica en Degradación de
Residuos - Oxidación de Fenol en Matriz Real

DA D1 A , Sig=270,10 Ref =of f (28JL0600\023-0401.D)

mA U
120

Condiciones: Agua agria de pH 7.3 oxidada

fenol
100

AA 0h
con 5 U/mL de lacasa cruda adicionada en 80

60

estrategia, AD3, 1.5mL (0h), 1mL(6h) y 0.5 40

mL (8h). Volumen de reacción 15mL.

20

0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 min

DAD1 A, Sig=270,10 Ref =of f (28JL0600\025-0601.D)

mAU

100
AA 6h
80

Tiempo

5.037
Agua Agria AD3 60

248.36 40

20

0
5 10 15 20 25 min
horas Concentración Remoción Promedio CV DAD1 A, Sig=270,10 Ref =of f (28JL0600\071-2601.D)
mAU
ppm (mg/L) % Remoción, % %
100

80 AA 24h
0 248.35 248.35 0.00 0.00 0.00 60

40
1 213.60 207.60 13.99 16.41 15.20 11.24 20

5.069
2 188.30 188.00 24.18 24.30 24.24 0.35 0

5 10 15 20 25 min
4 164.60 155.79 33.72 37.27 35.50 7.07 DAD1 A, Sig=270,10 Ref =of f (28JL0600\067-2101.D)
mAU

6 117.50 126.10 52.69 49.22 50.96 4.81 100

12 36.48 39.31 85.31 84.17 84.74 0.95 80 AA 48h

60
24 0.48 0.51 99.81 99.79 99.80 0.01
40

48 0.39 0.39 99.84 99.84 99.84 0.00 20

5.081

0
5 10 15 20 25
Investigación y Desarrollo Ambiental
min

Biotecnología
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Investigación Biotecnológica en Degradación
de Residuos - Oxidación de Fenol

Enzima C. enzima Concentración Tiempo Remoción, Referencia

utilizada
U/mL fenol, ppm h. %

Caldo crudo lacasa, 5 16.89 24 >98.63 Lab. Botecnología, (a)

P.ostratus
5 241.15 24 99.81 ICP.2000
Caldo crudo, Coriolus 330 50 24 81.3 Kadhim, et al , 1999 (b)
versicolor 10 50 24 5

Tirosinasa,
Sigma 250 400 24 94 Atlow, et al , 1984 (c)

Extracto pfdo 300 100 5 99

Peroxidasa de rábano
1 100 3 85.3 * Klibanov, et al , 1980 (d)
Sigma chemical Co.

* Necesita de H2O2 (a) Matriz real (b)Matriz dopada (c) Matriz real (d) Matriz dopada

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• Coeficiente de partición octanol agua, kow---Hidrofobicidad:

4 Kow<10 hidrofílico, alta solubilidad en agua, compuesto móvil

4 Kow>10.000 hidrofóbico, se acumula, inmóvil

• Coeficiente de adsorción suelo/agua, Kd:

4 Kd difícil adsorción
4 Kd fácil adsorción

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