TINCIÓN VERDE DE

METILO- PIRONINA
 FUNDAMENTO
 Esta técnica utiliza dos colorantes catiónicos
que se aplican bajo condiciones controladas:
-Verde de Metilo
-Pironina Y o G

Empleada para una coloración diferencial de los

ácidos nucleicos (ADN Y ARN), fundamentalmente
para distinguir células dotadas de una gran
capacidad secretora de proteínas.

FUNDAMENTO: la basofilia de los ácidos

nucleicos está ligada a la presencia de grupos Los resultados son una tinción de cromatina (DNA) azul verdoso,
ácidos ionizables pertenecientes al ácido nucléolo (RNA) rojo brillante y RNA citoplasmático rojo.
fosfórico.
 VERDE DE METILO
Es un colorante catiónico de color
verde derivado del trifenilmetano,
que se une específicamente a las
moléculas de ADN.
 Altamente catiónico y posee
afinidad a zonas más polimerizadas.
Se une electroestáticamente a los
grupos fosfatos en el lado externo de
la cadena de ADN.
 PIRONINA
Es un colorante catiónico de
color rojo derivado del xanteno,
de estructura planar que tiene
apetencia por moléculas de
ARN.
 Leve carácter catiónico y posee
afinidad a zonas menos
polimerizadas.
Se intercala entre los pares de
bases de la molécula de ARN.
PROBLEMAS DE LA PREPARACIÓN Y MANEJO DE
LOS REACTIVOS
 Es fundamental que la técnica se realice con un pH constante en torno a 4
4,5.

 Es necesario realizar un tratamiento de extracción a las muestras de tejido

para verificar la especificidad de la tinción.

El alcohol etílico tiene la propiedad de disolver la Pironina.

El colorante Verde metilo es un colorante no puro ya que está contaminado

por el violeta cristal, por lo tanto hay que eliminar este último de la solución.
 VARIANTE DE BRACHET DEL MÉTODO DEL VERDE
DE METILO-PIRONINA
Soluciones:
A) Solución de tampón acetato de sodio 0,2 M:
- Acetato de sodio……..………………………………………..16,4 g
- Agua destilada………………………….…………………….1000 ml
B) Solución de ácido acético 0,2 M:
- Ácido acético puro………………………….………………….12.0 ml
-Agua destilada hasta…………………………………………..1000 ml
VARIANTE DE BRACHET DEL MÉTODO DEL VERDE
DE METILO-PIRONINA
C) Solución de trabajo: Mezclar
-Solución A………………………….………………….13.2 ml
-Solución B….…………………………………………..1000 ml
-Agua destilada………………………………………..50.0 ml
D) Solución de verde de metilo
- Disolver 0,5 g de verde de metilo en 100 ml de tampón. Lavar con cloroformo, dejar la solución así
purificada en un recipiente abierto y en frigorífico hasta las eliminación de los vapores de cloroformo.
E) Solución de verde de metilo-pironina
-Solución de verde de metilo en tampón……………….100 ml
-Pironina G o Y…………………………………………0,2 g
VARIANTE DE BRACHET DEL MÉTODO DEL VERDE
DE METILO-PIRONINA
MODO DE OPERAR
Desparafinar e hidratar
Solución de verde de metilo-pironina, durante 10 minutos a temperatura ambiente
Lavar muy rápidamente en agua destilada.
Diferenciar y deshidratar en 2 baños breves de alcohol absoluto
Sumergir brevemente en Xilol agitando
Aclarar en dos baños de Xilol
Montar

RESULTADOS
Núcleos Verde (ADN)
Citoplasmas Rojo (ARN)
REFERENCIAS
Histological and Histochemical Methods, Theory and Practice, J.A. Kiernan, Third
Edition, 1999