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DEFINICIÓN DE ENZIMA
En las células vivientes la mayoría de los catalizadores son
moléculas proteicas denominadas ENZIMAS.
Formadas por:
• Apoenzima (función proteica)
• Cofactor (función no proteica)
este puede ser un Ion metálico (Fe,Mg,Zn,Ca) o una molécula
orgánica denominada coenzima
PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS
• Sumamente especificas
• Muy eficientes
• Sujetas a una gran variedad de controles
celulares
ENZIMAS
• Catalizadores biológicos.
• Proteínas de forma globular
• Específicas para un substrato particular (Estéreo
especificidad)
• Aceleran reacciones específicas químicas(103-10 20)
• Actúan en disolución acuosa, a pH y temp. Óptimos
• Son las unidades funcionales del metabolismo celular
Reacciones acopladas (catabolismo – anabolismo)
• Reguladoras de rutas metabólicas (Oligoméricas)
Medicina Transaminasas
Industria
Química Penicilina
Fermentaciones
Transformación
Quesos
de Alimentos
Vinos
Agricultura Rhyzobium
PROPIEDADES GENERALES
ESTRUCTURA GLOBULAR.
AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
De 106 to 1012 veces vs sin enzima.
Aún más rápido que los catalizadores químicos.
CONDICIONES DE REACCIÓN
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)
pH neutro (5-9), la mayoría 6.5 – 7.5
Presión atmosférica normal
CAPACIDAD DE REGULACIÓN
Por concentración de sustrato
Por concentración de enzima
Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato)
Por inhibidores no competitivos (modificación covalente de la enzima)
Por regulación alostérica
ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIÓN
Interacción estereoespecífica con el sustrato
No hay productos colaterales
ESTRUCTURA GLOBULAR
ALTO PODER CATALITICO
– Proceso enzimatico
Aminoácidos estructurales.
• Son los más abundantes y los
responsables de la forma de la enzima.
• Por ejemplo, en la lisozima de 129
aminoácidos, 124 son estructurales y sólo
5 no lo son.
Aminoácidos de fijación.
• Son los que establecen enlaces débiles
con el sustrato y lo fijan.
• Se encuentran en el centro activo de la
enzima
Aminoácidos catalizadores.
• Son los que al establecer enlaces, con el
sustrato, provocan la reacción.
• Son los responsables de su Centro activo
transformación.
• También están en el centro activo
MODELOS DE INTERACCIÓN (ESPECIFICIDAD)
•Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une
al centro activo del enzima: el modelo llave-cerradura, y el
modelo del ajuste inducido
•Enzimas holoproteínas:
Constituidos solamente por secuencias de aminoácidos.
Son poco frecuentes, pudiéndose citar como la ribonucleasa y
la lisozima.
•Enzimas heteroproteínas:
Formados por dos componentes, uno de naturaleza proteica
llamado apoenzima y otro no proteico ó grupo prostético, que
puede ser inorgánico (cofactor), o bien orgánico, en cuyo caso
se denomina coenzima.
Sólo proteínas
Enzimas
Cofactor Coenzimas
NAD, FAD
Moléculas
orgánicas
Holoenzima
s
Cofactor
E: PM 100000, 7 nm Ø
Inorgánico:
Fe2+, Mn2+, Zn2+,etc.
Orgánico:
Coenzimas
NAD,
FAD,
CoASH.
Grupo Prostético
Apoenzima Holoenzima
Enzimas que requieren
elementos inorgánicos
Citocromo oxidasa Fe2+, Fe+,
Catalasa, peroxidasa
Citocromo oxidasa Cu2+
DNA polimerasa
Anhídrasa carbónica Zn2+
Alcohol deshidrogensa
Hexoquinasa Mg2+
Glucosa 6-fosfatasa
Arginasa Mn2+
Piruvato quinasa K+, Mg2+
Ureasa Ni2+
Nitrato reductasa Mo2+
COENZIMAS
Coenzyme A (CoA)
Nicotinamide Adenine
Dinucleotide (NAD+) Nicotinamide Adenine Dinucleotide
Phosphate (NADP+) Flavin Adenine Dinucleotide (FAD)
EFECTO CATALITICO DE ENZIMAS
•La acción de los
catalizadores consiste en
disminuir la Energía de
activación
•Por ej, la descomposición del
agua oxigenada (H2O2) puede
ocurrir
–sin catalizador
Ea= 18 Kcal/mol
–con un catalizador
inorgánico (platino) Ea= 12
Kcal/mol
–con una enzima específico
(catalasa) Ea= 6 Kcal/mol •La velocidad de reacción esta determinada
por el número de moléculas con energía
•Así, el platino acelera la suficiente para alcanzar el estado de
reacción 20.000 veces, transición.
mientras que la catalasa la •Mientras menor sea la energía de
acelera 370.000 veces. activación y más moléculas puedan
alcanzarla, la velocidad de la reacción será
mayor.
NOMENCLATURA
Hay varias formas de nombrar una enzima:
• Nombres particulares
• Nombre sistemático
• Código de la comisión de enzimas
NOMBRES PARTICULARES.
• Antiguamente, los enzimas recibían nombres
particulares, asignados por su descubridor.
Consta de 3 partes:
• el sustrato preferente
• el tipo de reacción realizado
• terminación "asa“
ejemplo: la glucoquinasa
ATP: glucosa fosfo transferasa
1. Oxidorreductasas
2. Transferasas
3. Hidrolasas
4. Liasas
5. Isomerasas
6. Ligasas
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreducción, es decir, transferencia de
hidrógeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, según la
reacción general:
AH2 + B A + BH2
Ared + Box Aox + Bred
Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la citocromo c oxidasa.
Enzimas:
•grupos aldehídos
•gupos acilos
•grupos glucosilos
•grupos fosfatos (kinasas)
Ejemplo. ATP:glucosa fosfo transferasa
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De óxido reducción (transferencia de Peroxidasa Oxidasas
e-) Oxigenasas
Reductasas
•Ejemplo: La piruvato
carboxilasa, que cataliza la
decarboxilación del ácido
pirúvico a acetaldehído y
dióxido de carbono
Enzimas:
No. Clase Tipo de reacción que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De óxido reducción (transferencia de e-) Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas
1. Racemosas y epimerasas
2. Isomerasas cis-trans
3. Oxidorreductasas
intramoleculares
4. Transferasas intramoleculares
5. Liasas intramoleculares
CINÉTICA ENZIMÁTICA
CINÉTICA ENZIMÁTICA
La velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas puede ser
modificada por la acción de diversos factores.
El comportamiento de esa velocidad y su modificación debido a la
presencia de diferentes agentes físicos o químicos constituye el objeto
de estudio de la Cinética Enzimática.
A mayor concentración de enzima (E) mayor Vo, siempre que el sustrato se encuentre en
exceso.
La primera explicación para este comportamiento fue
expuesta por la ecuación y la constante de Michaelis-
Menten. La dedujeron Leonor Michaelis y Maud Menten en el
Berlín de 1913
Según ellos la primera etapa (formación del complejo
enzima-sustrato) ocurre de manera rápida y la segunda
etapa (transformación de sustrato en producto liberando
enzima) resulta ser la mas lenta, por lo que es el paso
limitante de la reacción.
A concentraciones muy elevadas de sustrato se produce un
efecto de saturación y casi toda la enzima se encuentra
en forma de complejo enzima-sustrato. En este momento
se habrá alcanzado la mayor velocidad posible para la
reacción (Vm)
Así se obtiene la forma habitual de la ecuación de
Michaellis y Menten:
Vm (S)
Vo = -------------
Km + (S)
Donde:
• Vo= Velocidad Inicial
• Vm= Velocidad Máxima
• (S)= Sustrato
• Km= Constante de Michaellis, es un índice de la afinidad
de la enzima por el sustrato, ( a mayor afinidad por el
sustrato menor será el valor de Km ).
Concentración de sustrato
Las reacciones enzimáticas se saturan con el sustrato (son
autosaturantes)
Efecto autosaturante
Significa que a mayor cantidad de sustrato, mayor número de
centros catalíticos estarán ocupados, lo que incrementará la
eficiencia de la reacción, hasta el momento en que todos los sitios
posibles estén ocupados.
En ese momento se habrá alcanzado el punto de saturación de la
enzima y, aunque se añada más sustrato, no aumentará más la
eficiencia
Tripsina 7.7
Catalasa 7.6
Arginasa 9.7
Fumarasa 7.8
Ribonucleasa 7.8
Explicación: El sitio activo de la enzima esta frecuentemente
compuesto de grupos ionizables que deben estar en la forma iónica
para tener actividad, unir los sustratos o catalizar la reacción.
•Si varia grandemente la concentración de iones H+, la enzima se
desnaturaliza.
Efecto de la Temperatura
• El aumento de la temperatura produce un incremento de
la energía cinética de las moléculas lo cual hace que se
produzca un mayor numero de choques efectivos entre
ellas, esto hace que los reactantes posean un contenido
energético que los ubica mas próximos al estado activado
y de esta forma se incrementa la velocidad de la
reacción.
• La mayor Vo se alcanza a un valor de temperatura
determinado, denominado Temperatura Optima, luego
del cual la velocidad comienza a disminuir y luego
desaparecer por la desnaturalización de la proteína
enzimática que provoca la perdida de su actividad
Efecto de la Temperatura
En el efecto de la temperatura
hay dos componentes:
1.Aceleración de la reacción
según la ecuación de
Arrhenius. (dentro del margen
de actividad)
k = A exp (-Ea/RT)
Para casi todas las enzimas,
un incremento de 10°C duplica
la velocidad de reacción.
2. Desnaturalización térmica de
la proteína.
Para muchas enzimas la región
de inactivación térmica está
muy próxima de la temperatura
óptima.
Enzima Temp. Ópt.
(oC)
Mamíferos 37
La ecuación de Michaelis-
Menten describe como varía la
velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas de
acuerdo a la concentración de
sustrato:
1/2 Vmax
Km
Concentración de sustrato [S]
CALCULO DE Km Y Vmax POR LA
REPRESENTACIÓN DE LINEWEAVER-‐BURK
CALCULO DE PARÁMETROS DE LA ECUACIÓN
La Linearización de
Lineweaver-Burk .
•Artificio matemático que
permite deducir gráficamente
los valores de km y Vmax.
•El artificio consiste en convertir
a la ecuación M-M en la
ecuación de una recta, de forma
Y = A + BX,
Donde:
•Y = 1/v,
•A = 1/Vm,
•B = km/Vm, y
•X = 1/[S]
Ploteo de Eadie-Hostee
•El ploteo se realiza vi/ vi/[S], con ese fin
se multiplica ambos miembros de la
inversa de la ecuación M-M por vi.Vmax
obteniéndose:
•Vmax (vi) = Km.Vmax(vi) + Vmax(vi)[S]
• vi Vmax[S] Vmax [S]
•
• Vmax = Km.vi + vi
• [S]
•Ordenando:
• vi = Vmax - Km.vi
• [S]
•Esta es una ecuación de línea recta de la
forma Y = a – bX.
•Pendiente= –Km,
•Ordenada en el origen= Vmax.
Ploteo de Hanes- Wolf
[S]
V 1
a x
Vm
Km
V max
[S]
0
Ploteo Eisentahl-Cornish
• Vmax = vi + vi.Km
• [S]
V max
[S]
Km
LIMITACIONES DE CINÉTICA MICHAELIANA
Para utilizar la ecuación de Michaelis-Menten deben asumirse:
La Actividad Específica
Es el no. de U de enzima / mg de proteína.
Es una medida de la pureza de la enzima.
Catalasa de Catalasa de
Aspergillius niger Hígado de bisonte
4000-8000 U/mg de prot. 2000-5000 U/mg de prot.
No cambia Km.
Disminuye Vmax.
Sustrato
Sustrato
Inhibidor
no
competitivo
INHIBICIÓN ACOMPETITIVA
•Su denominación no es muy adecuada.
•El inhibidor se une solo al complejo ES para dar siempre un
complejo inactivo EIS, estabilizándolo e impidiendo la
formación de P.
•Esta forma de inhibición es poco frecuente en las reacciones
monosustrato, pero es frecuente en las reacciones con dos
sustratos.
•En este caso: Km y Vmax disminuyen.
INHIBIDORES IRREVERSIBLES: VENENOS
•Los gases nerviosos. (sarín, tabún, somán)
•Organofosforados. El fluorofosfato de di-isopropilo DIPF
•Carbamatos.
•Inhiben la enzima acetilcolinesterasa (interviene en el
proceso de la transmisión del impulso nervioso)
•Esta enzima contiene un sitio activo con residuos de serina.
•Ejemplos de gases nerviosos: todos tienen un grupo ester
fosfato, que inactiva los restos de serina de la enzima
acetilcolinesterasa
Plaguicidas organofosforados
•Organofosforados: malathion
•Carbamatos: como el carbaril
(Sevín).
•Inhiben la acetilcolinesterasa
Acción del fluorofosfato de di isopropilo DIPF
b) Reacciones ping-pong
a.- Reacciones mediante formación de un
complejo ternario.
El complejo ternario puede formarse independientemente del
orden de unión de los substratos (aleatorio), o bien
únicamente en un orden determinado (mecanismo ordenado).
Mecanismo aleatorio. Los substratos A y B forman un
complejo con la enzima. Cualquiera de ambos puede
combinarse con para formar el complejo ternario EAB,
que conduce a los productos X e Y y a regenerar la
enzima.
Mecanismo ordenado. Un substrato (A) se une inicialmente con la
enzima formando el complejo EA. El segundo substrato sólo se une al
complejo EA para conducir al complejo ternario EAB:
• hexoquinasa
•Glucosa + ATP ----------> Glucosa-6-fosfato + ADP
•
•El propio producto de la reacción puede inhibir
competitivamente a la enzima
Ello impide:
• La utilización innecesaria del primer sustrato
• La acumulación del producto final
• Se evita la acumulación de intermedios
Ejemplos de cinética.
1. En una reacción enzimática que transcurre con una
concentración de enzimas de 0,015g/l, se obtienen lo siguiente:
•[S] (g/l) 20 15 10 7.0 5.0 4.0 3.0 2.5
•v(g/l-min) 1.14 1.01 0.87 0.72 0.59 0.5 0.44 0.35
•Deduzca el modelo que representa la cinética del proceso.
Representando
gráficamente se
tiene:
Deducción de los, coeficientes de la ecuación
S v (g/l-min) 1/S 1/v
y = 5.3879x + 0.6147
Pendiente: Km/vmax. =
2.5000 R² = 0.9914 5.387
2.0000
•Km = 8.776 g/l
1.5000
•El modelo será.
1.0000
•V = Vmax.S/(Km+S)
0.5000
0.0000
•V = 1.628S/(8.776+S)
0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500
0.140
0.120
0.100
0.080
0.060
y = -0.1148x + 0.1861
0.040 R² = 0.9758
0.020
0.000
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
Ejercicio 2
Se investigó el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una
reacción catalizada enzimáticamente sobre un solo sustrato,
obteniéndose los siguientes resultados
Concentración de sustrato Concentración del inhibidor
(mmol L -1) (mmol L -1)
0 0.5 1.0
Velocidad de reacción (mol L -1 min-1)