DETERMINACIÓN DE LA

VITAMINAS
 1. QUE SON LAS VITAMINAS
Las vitaminas son sustancias orgánicas, no
sintetizadas por el organismo, por lo que éste
no puede obtenerse más que por ingestión
directa. Las vitamina son nutrientes esenciales
imprescindibles para la vida.
 2 CLASIFICACIÓN
Las vitaminas se clasifican en función de su grado de
solubilidad. Hay dos tipos:

1. Vitaminas hidrosolubles:
se disuelven en el agua y el cuerpo las tiene que usar
inmediatamente ya que no se almacenan.
a. Vitaminas del grupo B (la vitamina B12 es la única
que se almacena en el hígado durante años)
b. Vitamina C
 2. Vitaminas liposolubles:
se disuelven en grasa y aceites se almacenan en
el hígado y en los tejidos grasos

a. Vitamina A
b. Vitamina D
c. Vitamina E
d. Vitamina K
3. VITAMINA A
La vitamina A o Retinol es un alcohol diterpénico
formado por un anillo trimetilciclohexenilo provisto de
una cadena lateral de unidades isopreno.
El Retinol se puede encontrar como un alcohol libre o
esterificado por un ácido graso.
La principal fuente de vitamina A es el β-caroteno, que es
uno de los carotenoides precursores de la vitamina A.
Acido Retinoico
 3.1 Determinación Fotométrica de
Vitamina A (retinol)
Aplicaciones
- Alimentos Grasos
- Preparados multivitamínicos
Introducción
 Existe 16 posibles isómeros de Vitamina A.
 La vitamina A1(retinol) tiene un interés especial desde el
punto de vita practico, porque en la naturaleza se encuentra
esterificado con ácidos grasos.
 Algunos carotenoides, como el α, β y γ caroteno son
provitaminas a partir de las cuales se forma las vitamina
A en el organismo humano y en los animales.

 Los carotenoides son de origen vegetal y se encuentra

principalmente en frutas y verduras.
Funciones vitamina A:
- Es indispensable para el crecimiento.
- Funciones epiteliales.
- Funciones glandulares
- Para la visión.

Requerimiento de vitamina A en un adulto

Adulto son de 1.5 a 1.8 mg/dia (= 5000 a 6000 UI)
1 UI= 0.3 μg de retinol
Fundamento
 La vitamina A se libera de los esteres de los ácidos grasos por
hidrolisis alcalina;
 se extrae con éter, purificando el extracto obtenido por
cromatografía en columna.
 Se elimina el disolvente, Se disuelve el residuo en isopropanol y
se determina Fotométricamente a 310, 325 y 334 nm.
Equipos y Materiales
-Espectrofotómetro
-Cubeta de cuarzo (d=1 cm)
- Una balanza analítica .
-Rotavapor (es un aparato que sirve para quitar el solvente
de una mezcla o de un compuesto.)
-Matraz redondo de cuello doble de 250ml
-Un refrigerante a reflujo
-Columna de cromatografía
-Un fiola de 25ml
-Una fiola de 100ml
-Un embudo de decantación de 250ml
-Una probeta de 50ml
Reactivos
- Disolución de KOH en metanol.
- Hidroquinona C6H6O2
- Eter dietílico
- Fenolftaleína
- Al(OH)3
- Se mezclan 50 g de Al2O3 en elermeyer con 7.5 ml de
agua destilada y se agita hasta homogeneidad. Dejar 1 hora
a temperatura ambiente antes de utilizarlo.
- Isopropanol
-Acetato de vitamina A (acetato de retinol , 1g =500.000UI ).
- Disolución madre de la vitamina A
Se pesa 2g de acetato de vitamina A con una precisión
de ± 0.1 mg , se disuelve en isopropanol y se afora a 100 ml
Procedimiento experimental
Para la determinación de la vitamina A (retinol)
consiste en tres pasos que se realiza
- Saponificación
- La extracción
- Purificación

1.Saponificación
Esta etapa tiene por objeto eliminar la interferencia de la materia
grasa.
1. Pesar aprox. 1gr de muestra, con una precisión de ± 0.1mg.
2. La muestra pesada se hecha a un matraz de 250 ml
3. Se le agregarle 30 ml de KOH en metanol y
4. 0.1 gr de hidroquinona
5. La mezcla se somete a calentamiento a reflujo durante un
tiempo de 30 minutos en baño maría.
2.Extracción
1. Una vez enfriado, el hidrolizado se mezcla con 30ml de
agua destilada.
2. La disolución se pasa a un embudo de decantación de
250ml.
3. Se lava la disolución 3 veces con éter dietilico con un
volumen de 50ml.
4. La mezcla éter- agua se agita enérgicamente durante 2
minutos.
5. Luego de esto se elimina el agua.
6. La fase etérea se lava con 50 ml de agua destilada ( hasta
que el agua del lavado no de color rosa con fenolftaleína)
3. Purificación
1 La purificación se realiza en una columna de óxido de
aluminio, cuyo interior se lavará con 20ml de éter.
2 El eluato se concentra en el rotavapor.
3 El residuo se disuelve en isopropanol.
4 Se lleva a una folía de 25 ml y se enrasa.
5 Finalmente la disolución se lleva a medir al
espectrofotómetro a 310, 325,334 nm en cubetas de
cuarzo frente a un blanco que se prepara con los mismos
reactivos.
Cálculos
Siendo:
Ecorr : Extensión corregida: se calcula según
Morton y Stubbs
E corr=6.815xE325-2.555-E310x4.260xE334
c : Peso de la muestra en gr referido a 100 ml de
la disolución problema .
d : Espesor de la capa en cm
1.830 : factores de transformación de g a UI teniendo
en cuenta la extinción específica de una disolución
de retinol a 1%.
100 : Calculo referido a los 100gr de muestra .
 Recuperación
Es importante determinar el contenido real de
acetato de vitamina A (U.I ) .
se diluye la disolución madre de vitamina A
por un factor de 1.000 con isopropanol y se
mide la extinción 326 nm .(máximo de
absorbancia para el acetato de vitamina A
frente al isopropanol ).
 𝐸
𝑎= 1.900 ∗ 1.000
𝑐∗𝑑
Siendo

a : U.I vit.A /100 ml disolución madre de vitamina A

e : extinción medida a 326 nm

c : Peso de acetato de vitamina A en gr referido a 100 ml de

disolución madre.

d: Espesor de la capa en cm.

1.900: factor de conversión de g a U.I. Teniendo en cuenta la

extinción especifica de una disolución 15% de acetato de vitamina
A.

1.000: Factor de dilución en disolución medida.