Los embriones bovinos son recolectados en una solución salina buffer fosfato (PBS Dulbecco)

suplementada con 1% de suero o 0,1% de albúmina sérica (PBSS). A medida que los embriones son
localizados bajo la lupa estereoscópica, se los coloca en PBSS con un porcentaje mayor de suero (10 ó
20%) o albúmina 4%. Permanecen en este medio, a la temperatura del laboratorio 20-25ºC hasta que
se realiza la transferencia o se lleva a cabo otra manipulación.

La manipulación de los embriones in vitro se lleva a cabo siguiendo las disposiciones establecidas por
la Sociedad Internacional de Transferencia Embrionaria (IETS) a fin de prevenir la transmisión de
enfermedades

Una evaluación morfológica detallada, a mayor aumento, considerando estadios de desarrollo y

cualidades estructurales permite determinar que embriones están en condiciones de ser transferidos.
La transferencia en fresco debe ser realizada dentro de las 3-4 hrs post-recolección.
Los embriones pueden ser conservados in vitro para su posterior transferencia mediante: Cultivo a
37°C, refrigeración entre 0°C y 4° C o congelación a -196°C.

A continuación, se analiza en detalle cada una de estas técnicas:

 CULTIVO A 37°C
Los embriones bovinos recolectados 6°y 8°día de vida, método no Qx.
 Evalua resultado de distintas manipulaciones
 NO para conservar un embrión hasta que una receptora asincrónica alcance el sincronismo óptimo.
 % preñez disminuyen cuando se transfieren embriones que han sido cultivados
 Viabilidad embrionaria disminuye cuando la extensión del cultivo es >24 horas.

<24hr  Ham F-10

 B2 de menezo

Medio de cultivo:
- Reducir la tensión superficial y favorecer sedimentación
>24hr - Proteina embriones y evitar que se adhieran
- solución
Se cultivan en una Esterilizacion
salina buffer fosfato (PBS Dulbecco) suplementada
- Incorporar con de suero (10 ó 20%) o albúmina
sustancias
4%. - ATB: pnc, strpm, knm - Absorber e inhibir metales pesados tóxicos del medio.
 REFRIGERACIÓN A 0-4°C
Vehiculizando los embriones en PBSS envasados en pajuelas de 0,25 ml y colocadas en un
refrigerador (común o portátil)
Se utiliza hielo y agua para regular el descenso de la T , de manera similar a como se realiza la
estabilización durante la congelación de semen.
La transferencia noQx de embriones refrigerados durante 1-3 días, se han obtenido 44 y el 50% de
preñez.
Alternativa interesante cuando no sea posible recurrir a la congelación.
Enviar embriones a ser transferidos en lugares distantes de donde se encuentran las donantes
Para conservar embriones hasta que receptoras asincrónicas alcancen la sincronización adecuada.
 CONGELACIÓN A -196°C
 TECNICA DE ELECCION
La criopreservación es el proceso por el cual células o tejidos son
congelados a muy bajas temperaturas, para disminuir las
funciones vitales de una célula u organismo y poder mantenerlo
en condiciones de vida suspendida por mucho tiempo.
Se considera que los embriones pueden ser mantenidos a -196°C
durante doscientos años o más, sin afectar sus viabilidad y sin
causarles cambios genéticos. Este hecho, convierte a la
congelación de embriones en una herramienta insustituible para
el comercio internacional de reproductores.

Condicionado por 2 FACTORES:

- CALIDAD embrión
- TIEMPO ( recolección hasta inicio
congelación
 CONGELACIÓN A -196°C
- Utilizar eficientemente donante y receptoras.
- Incorporar progreso genético a bajo costo, comparando los valores del
embrión y el de su transporte frente a los animales en pie.
- Transferir algunos embriones y conservar el resto hasta poder analizar los
registros de producción de la descendencia.
- Controlar enfermedades exóticas, reemplazando la importación de animales
en pie por la de embriones congelados libres de ellas.
- Conservar razas en vías de extinción.
- Crear bancos de germoplasma de valor pecuario.
 CONGELACIÓN
CONGELACIÓN A -196°C
A -196°C
- Exposición de los embriones a agentes crioprotectores.
- Enfriamiento desde temperaturas fisiológicas hasta temperaturas lo
suficientemente bajas como para causar un virtual cese de todas las
reacciones químicas inducidas térmicamente.
- Calentamiento desde la temperatura de conservación (-196°C) a
temperaturas fisiológicas.
- Remoción de los crioprotectores (dependiendo del criopreservante del
que se trate.
 METODOS DE CONGELACION
1. M.C. STANDARD
En la actualidad, los embriones son congelados y
descongelados de manera rápida.
 Esto hace necesario una DESHIDRATACION PARCIAL AGENTE CRIOPROTECTOR
antes de la congelación a fin de evitar la formación
de cristales que lesionan los blastómeros • Permeables: glicerol, dimetilsulfóxido
(DMSO), 1-2 propanodiol, etanol y otros
alcoholes.
El glicerol es el más utilizado en la congelación de embriones • Impermeables: polivinilpirrolidona (PVP),
bovinos. La exposición de los embriones al medio de sucrosa, glucosa, y otros azúcares.
congelación (PBSS + glicerol) debe realizarse a la temperatura
del laboratorio (25°C), en un sólo paso, de 10 a 30 minutos de
duración. Este período incluye el envasado de los embriones,
generalmente en pajuelas plásticas.
 METODOS DE CONGELACION
1. M.C. STANDARD
Las pajuelas o pajillas de 0,25 ml constituyen el envase de elección porque tienen menor
tamaño, paredes más delgadas y menor volumen que las ampollas y los tubos. Estas
propiedades permiten realizar más rápidamente y con mayor precisión la inducción de la
cristalización o "seeding“ maniobra clave para evitar que la viabilidad embrionaria sea
afectada durante la congelación.
CONGELACION
 Pueden ser colocadas en el equipo de congelación a la temperatura a la que se efectúa el
seeding (aproximadamente -7°C). Es conveniente en este caso que transcurran cinco
minutos para que se equilibre la temperatura de las pajuelas con la del equipo de
congelación. Algunos equipos de congelación utilizan nitrógeno líquido como agente
refrigerante.
 Una vez efectuado el seeding, se mantiene la temperatura estable durante 10 minutos (período de
estabilización) y luego se la desciende a una velocidad que oscila entre 0,3 y 0,5°C hasta -30 ó -35°C. En ese
momento, las pajuelas pueden ser retiradas del equipo de congelación y sumergidas en nitrógeno líquido
 Se considera que entre -30 y -35 °C se establece un adecuado balance entre deshidratación y formación de
hielo intracelular
DESCONGELACION
La descongelación se efectúa de manera rápida, sumergiendo las pajuelas en un baño María a 30-35º C
durante 20-30 segundos
 METODOS DE CONGELACION
2. M.C. VITRIFICACIÓN
 Es un proceso físico de solidificación utilizado para conservar órganos y tejidos y más recientemente
embriones
 Crioprotectores en ALTA concentración.
 Al ser enfriado no cristaliza sino que se torna viscoso y pasa del estado líquido a un estado sólido no
estructurado similar a un vidrio, de ahí toma este método la denominación de vitrificación.
 Para vitrificar embriones bovinos, se ha utilizado una solución mixta de glicerol y 1-2 propanodiol en PBSS.
La elección del 1-2 propanodiol (es estable y tiene poca tendencia a cristalizar durante el enfriamiento).
 Embriones son expuestos al medio de vitrificación intracelular (10% glicerol + 20% 1-2 propanodiol)
durante 10 min. Luego, se los envasa en el medio de vitrificación extracelular (25% glicerol + 25% 1-2
propanodiol). Inmediatamente después de cerrada, la pajuela debe ser introducida lenta y
progresivamente en el nitrógeno para que se produzca simultáneamente la vitrificación de los
compartimientos extra e intracelular