PRODUCCIÓN DE BIOETANOL DE

SACCHAROMYCES CEREVISIAE EN JUGO

DE BANANO DE RECHAZO

Laura Alejandra Díaz Vaca 2113251

Christian Camilo Angulo Beleño 2123614
 B IOMASA SELECCIONADA

 Cepa
Saccharomyces cerevisiae
 Curva De Crecimiento

Grafica 1. Curva de crecimiento microbiano. (Durango Londoño, 2007)

 B IOMASA SELECCIONADA

 Factores Ambientales
Temperatura: 25 a 30 °C
pH: 4.0 a 5.5
Nutrientes: Un medio de cultivo debe de tener todos los
elementos necesarios para el crecimiento microbiano,
tales como C, N, P, S, K, Mg, Ca, Mn, Zn, Fe, Ba y Na.
Aireación: Un proceso fermentativo en fase anaeróbica
se caracteriza generalmente por la producción de
etanol.
 FUENTE DE CARBONO
Jugo de banano (Maduros Valery Cavendish)
extraídos de frutos que fueron rechazados en la
plantación 'La Manzana' situada en Turbo
Antioquia.
 FUENTE DE CARBONO

 Pre-tratamiento
Lavado y descascarado

Extracción del jugo por compresión con

una solución diluida de Ca(OH)2 caliente
(100 ml de solución por kg de banano).

El zumo de banano se neutralizó con

ácido cítrico 0,5% hasta alcanzar un pH
5,5 y por último se filtró.
 FUENTE DE CARBONO
 Composición del del jugo obtenido a partir
del banano
Componente Composición Unidad
Azucares Totales 16.5 %
K2O 8.34 %
CaO 7.54 %
Fe2O3 6.9 ppm
pH 5.5 -
Tabla 1. Caracterización jugo de banano.
(Peña serna, Castro Gil, & Peláez Jaramillo, 2011)
COMPUESTO QUE PUEDA
INHIBIR EL PROCESO
Concentración Microorganismo
de alcohol resistente

Concentración
del sustrato

pH óptimo
Acidez en el
Proceso
Condiciones anaerobias

Temperatura
 PROCESO EN BATCH
MÉTODOS DE ANÁLISIS DE RESULTADOS
• Concentración de sustrato (azucares residuales) :
Ácido dinitrosalicílico (DNS) con la hidrólisis previa
con HCl 10% a 95 ° C.

• Masa seca de los microorganismos: Método del

peso seco

• Las concentraciones de etanol: Cromatografía de

gases, equipo marca Agilent 6890, con un detector
de ionización.
 PROCESO EN BATCH
DATOS EXPERIMENTALES
 Caldo De Cultivo
Jugo de banano de rechazado. El pH se ajustó a 5,0
Componente Concentración (g/l)

Azucares Reductores 100

Totales (ART)
KH2PO4 2
MgSO4 7H2O 1
Urea 5
Tabla 2. Composición del caldo de fermentación.
(Peña serna, Castro Gil, & Peláez Jaramillo, 2011)
 PROCESO EN BATCH
 Preparación Del Inoculo
Se preparó en matraces Erlenmeyer de 1000 ml con 400
ml de caldo estándar.

Componente Concentración (g/l)

Glucosa 100
KH2PO4 1
MgSO4 7H2O 0.5
Peptona 10
Extracto de levadura 5
Tabla 3. Caldo Estándar
Se incubo T=30 °C durante 30 h, sin agitación mecánica.
Biomasa inicial de fermentación (7,3 g/l)
 PROCESO EN BATCH
 Las Condiciones De Fermentación
La toma de muestras se hizo 5 ml cada 2,5 h
V fermentador 500 ml
V caldo de 400 ml
fermentación
Temperatura 30 °C
Agitación 150 rpm
pH inicial 5
Concentración inóculo 7,3 g/l
Tiempo fermentación 35 h
Tabla 4. Condiciones de fermentación
 PROCESO EN BATCH
T (h) S (g/l) X (g/l) P (g/l)
0 100 7,3 0
Concentraciones 2,5 72,3 7 13,3
obtenidas después 5 51,1 6,8 21,8
de la fermentación 7,5 36,4 6,9 27,1
10 24,02 7,2 31,2
en batch.
12,5 15,9 7,5 34
15 9,9 7,8 36,4
17,5 7 8,1 37,7
Tabla 5. Datos 20 6,7 8,3 37,1
experimentales 22,5 6,2 8,5 36,6
fermentación en Bacth. 25 6 8,6 36,7
(Peña serna, Castro Gil, 27,5 5,8 8,7 36,4
& Peláez Jaramillo, 30 5,7 8,78 36,7
2011) 32,5 5,5 8,8 37,5
35 5,3 8,8 39,6
 PROCESO EN BATCH
FERMENTACIÓN BATCH
100

90

80 Biomasa
Concentración [g/l]

70 Sustrato
60
Etanol
50

40

30

20

10

0
0 5 10 15 20 25 30 35

Tiempo [h]
 PROCESO EN BATCH

100
FERMENTACIÓN BATCH
90

80
Sutrasto [g/l]

70

60

50

40

30

20

10

0
0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo [h]
 PROCESO EN BATCH

9
FERMENTACIÓN BATCH

8.5
Biomasa [g/l]

7.5

6.5

6
0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo [h]
 PROCESO EN BATCH

45
FERMENTACIÓN BATCH
40

35
Etanol [g/l]

30

25

20

15

10

0
0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo [h]
 PROCESO EN BATCH
ALGORITMO DE SOLUCIÓN PARA CALCULAR LOS
PARÁMETROS CINÉTICOS
 Balance de masa para la biomasa
1 𝑑𝑋
𝜇= ∗ 𝑝𝑟𝑖𝑚𝑒𝑟𝑎 𝑟𝑒𝑠𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎𝑠 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠
𝑋 𝑑𝑡
 Calculo de la velocidad de crecimiento microbiano
𝑑𝑋 −3𝑋0 + 4𝑋1 − 𝑋2
𝑝𝑢𝑛𝑡𝑜 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 =
Método de diferencias finitas
𝑑𝑡0 2 ∗ Δt
𝑑𝑋 𝑋𝑖+1 − 𝑋𝑖−1
𝑝𝑢𝑛𝑡𝑜𝑠 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜𝑠 =
𝑑𝑡𝑖 2 ∗ Δt
𝑑𝑋 𝑋𝑛−2 − 4𝑋𝑛−1 + 3𝑋𝑛
𝑝𝑢𝑛𝑡𝑜 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 =
𝑑𝑡𝑛 2 ∗ Δt
 PROCESO EN BATCH

 Se evaluaron varios modelos de crecimiento

microbiano para encontrar cual se ajustaba mejor
a los datos experimentales. (S, X, P, u)
 Realizó mediante regresión lineal (Excel) para el
caso del modelo de crecimiento exponencial y
regresiones no lineales (IBM spss) para los demás
modelos.
 Coeficiente de regresión múltiple (R2)
 Significado de los parámetros cinéticos
PROCESO EN BATCH

𝑬𝒙𝒑𝒐𝒏𝒆𝒏𝒄𝒊𝒂𝒍 𝑋 = 𝑋0 𝑒 𝜇𝑚𝑎𝑥∗𝑡 𝐿𝑛𝑋 = 𝜇𝑚𝑎𝑥 ∗ 𝑡

𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜𝑠 = 𝜇𝑚𝑎𝑥 = 0,013
𝑅2 = 0,974

𝜇𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑪𝒐𝒏𝒕𝒐𝒊𝒔 𝜇 = 𝑅2 = 0,945
𝐾𝑠 𝑋 + 𝑆
𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜𝑠 = 𝜇𝑚𝑎𝑥 = 0,018 ; 𝐾𝑠 = 0,18
 PROCESO EN BATCH
𝜇𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑴𝒐𝒏𝒐𝒅 𝜇 = 𝑅2 = 0,982
𝐾𝑠 + 𝑆
𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜𝑠 = 𝜇𝑚𝑎𝑥 = 0,018 ; 𝐾𝑠 = 1,522

𝜇𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑷𝒐𝒘𝒆𝒍𝒍 𝜇 = 𝑅2 = 0,953
𝐾𝑠 + 𝐾𝑝 + 𝑆
𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜𝑠 = 𝜇𝑚𝑎𝑥 = 0,018 ; 𝐾𝑠 = 274,27 ; 𝐾𝑝 = −272,75

𝑆
−𝐾
𝑻𝒆𝒔𝒔𝒊𝒆𝒓 𝜇 = 𝜇𝑚𝑎𝑥 ∗ 1 − 𝑒 𝑅2 = 0,746
𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜𝑠 = 𝜇𝑚𝑎𝑥 = 0,017 ; 𝐾𝑠 = 3,482
 PROCESO EN BATCH

𝜇𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑯𝒊𝒏𝒔𝒉𝒆𝒍𝒘𝒐𝒐𝒅 𝒊𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒄𝒊𝒐𝒏 𝑷 𝜇= ∗ 1 − 𝐾𝑝 ∗ 𝑃
𝐾𝑠 + 𝑆
𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜𝑠: 𝜇𝑚𝑎𝑥 = 0,022 𝐾𝑚 = 0,585 𝐾𝑝 = −0,07
𝑅 2 = 0,951

𝜇𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑯𝒂𝒅𝒂𝒏𝒆 𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒄𝒊ó𝒏 𝑺 𝜇 =
𝐾𝑚 + 𝑆 + 𝐾1 𝑆 2
𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜: 𝜇𝑚𝑎𝑥 = 0,016 ; 𝐾𝑚 = 0,761 ; 𝐾1 = −0,3
𝑅2 = 0,978
 PROCESO EN BATCH
MODELOS VS DATOS EXPERIMENTALES
0.0175

0.017

0.0165
u [1/h]

Monod
0.016

Datos Exp
0.0155
Contois
0.015
Power
0.0145
5 10 15 20 25 30 35 40

Sustrato [g/l]
 PROCESO EN BATCH

En general los modelos tuvieron parámetros

cinéticos parecidos pero el que mejor que se ajustó
a los datos experimentales fue el modelo de Monod,
los valores de los parámetros fueron:

μmax [1/h] 0,018

Ks [g/l] 1,522

 R2 = 0,98.
 PROCESO EN BATCH
 El rendimiento celular Yxs se calculo utilizando la
curva de crecimiento celular vs el sustrato, que tiene
pendientes de Yxs
𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑎
𝑌𝑥𝑠 =
𝑆𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜

 el rendimiento de etanol Yps se calculo utilizando la

curva de la producción de etanol vs sustrato, que
tiene pendientes de Yps

𝑃𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑎𝑑𝑜
𝑌𝑝𝑠 =
𝑆𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜
 PROCESO EN BATCH

 La productividad volumétrica de etanol Qp, se

calculó utilizando la producción de etanol frente a la
curva del tiempo, en el que Q p es la pendiente.
𝑃𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑎𝑑𝑜
𝑄𝑝 =
𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜

Yxs [g/g] 0,016

Yps [g/g] 0,411
Qp[g/lh] 1,13
PROCESO EN CONTINUO

MÉTODOS DE ANÁLISIS DE RESULTADOS

• Concentración de biomasa: se determinó
midiendo la densidad óptica en un
refractómetro (HITACHI, U‐2000)

• Masa seca de los microorganismos: Se obtuvo

secando un volumen de muestra de 40mL en
una estufa a 105 ºC .

• Las concentraciones de glucosa, etanol: se

determinaron mediante un cromatógrafo de
líquidos
PROCESO EN CONTINUO

 Preparación del inoculo

El cultivo se realizo a 30 ° C .

Componente Concentración [g/l]

Glucosa 20
Extracto de malta 3
Peptona 3
Extracto de Levadura 1

El cultivo se dejó crecer antes de iniciar la

operación continua.
PROCESO EN CONTINUO
 Concentraciones obtenidas después de la
fermentación alcohólica en continuo a diferentes
tasas de dilución.
So [g/l] D [1/h] x [g/l] s [g/l] p [g/l]
82 0.025 5.85 6.17 35.79
0.05 5.51 8.82 34.35
0.1 5.01 14.11 31.45
0.15 4.2 22.05 25.22
0.2 3.41 42.94 11.7
0.25 1.25 72.06 3.76
Tabla 4. Datos experimentales fermentación en Continuo. (Nigam, 2000)
 PROCESO EN CONTINUO
FERMENTACIÓN EN CONTINUO
80
Concentración [g/l]

70

60

50
Biomasa
40

30
Sustrato

20 Producto
10

0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
Dilución [1/h]
PROCESO EN CONTINUO
ALGORITMO DE SOLUCIÓN PARA CALCULAR LOS
PARÁMETROS CINÉTICOS
 Se realizó un balance de masa en estado
estacionario para la biomasa donde se encontró la
siguiente ecuación:

𝜇 = 𝐷 𝑝𝑟𝑖𝑚𝑒𝑟𝑎 𝑟𝑒𝑠𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎𝑠 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠

Donde D= tasa de dilución [h-1]

PROCESO EN CONTINUO

 Se evaluaron varios modelos de crecimiento

microbiano para encontrar cual se ajustaba mejor
a los datos experimentales. (S, X, P, D)

𝐷𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑪𝒐𝒏𝒕𝒐𝒊𝒔 𝐷 = 𝑅2 = 0,978
𝐾𝑠 𝑋 + 𝑆
𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜𝑠 = [𝐷𝑚𝑎𝑥 = 0,28 ; 𝐾𝑠 = 5,505 ]

𝐷𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑴𝒐𝒏𝒐𝒅 𝐷 = 𝑅2 = 0,971
𝐾𝑠 + 𝑆
𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜𝑠 = [𝐷𝑚𝑎𝑥 = 0,43 ; 𝐾𝑠 = 50,55 ]
PROCESO EN CONTINUO

𝑆
−𝐾
𝑻𝒆𝒔𝒔𝒊𝒆𝒓 𝐷 = 𝐷𝑚𝑎𝑥 ∗ 1 − 𝑒 𝑅2 = 0,202
𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜𝑠 = [𝐷𝑚𝑎𝑥 = 0,048 ; 𝐾 = 0,1 ]

𝐷𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑷𝒐𝒘𝒆𝒍𝒍 𝐷 = 𝑅2 = 0,971
𝐾𝑠 + 𝐾𝑝 + 𝑆
𝐷𝑚𝑎𝑥 = 0,433 ; 𝐾𝑝 = 641,398 ; 𝐾𝑠 = −590,844

𝐷𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑯𝒂𝒅𝒂𝒏𝒆 𝒊𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒄𝒊ó𝒏 𝒑𝒐𝒓 𝑺 𝐷 =
𝐾𝑠 + 𝑆 + 𝐾1 𝑆 2
[𝐷𝑚𝑎𝑥 = 1,811 ; 𝐾𝑠 = 255,302 ; 𝐾1 = 0,039 ]
𝑅2 = 0,979
 PROCESO EN CONTINUO
MODELO MATEMATICO SELECCIONADO:
 modelo de 𝑷𝒐𝒘𝒆𝒍𝒍 fue descartado debido a que
dio un valor de Ks negativo, aunque
matemáticamente está bien, físicamente no tiene
sentido la existencia de un ks negativo, y su
regresión aunque no fue mala, está por debajo
de las de otros modelos.
 El modelo de 𝑻𝒆𝒔𝒔𝒊𝒆𝒓 obtuvo una regresión muy
baja 0.202 por lo que fue descartado de
inmediato.
 El modelo de 𝑴𝒐𝒏𝒐𝒅 obtuvo una buena
regresión 0.971, pero será descartado porque
hubo dos modelos que se ajustaron más a
nuestros datos experimentales.
 PROCESO EN CONTINUO
MODELOS VS DATOS TEÓRICOS
0.3

0.25

0.2
D[1/h]

0.15
Hadane

0.1
Contois
Datos exp
0.05

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
S[g/l]
 PROCESO EN CONTINUO
𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑎
 El rendimiento Yx/s 𝑌𝑥𝑠 =
𝑆𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜

CÉLULAS PRODUCIDAS VS SUSTRATO CONSUMIDO

7

5
Biomasa [g/l]

2 y = 0.0662x + 0.6115
R² = 0.9827
1

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
Sustrato [g/l]
PROCESO EN CONTINUO
𝑃𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑎𝑑𝑜
𝑌𝑝𝑠 =
𝑆𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜

PRODUCTO FORMADO VS SUSTRATO CONSUMIDO

40

35

30
Producto [g/l]

25

20

15 y = 0.5014x - 3.302
10
R² = 0.976
5

0
0 10 20 30 40
Sustrato [g/l]50 60 70 80
 PROCESO EN CONTINUO
Se calculo la productividad volumétrica para escoger
la mejor tasa de dilución
Grado de dilución ( h-1 )
Parámetro
0.02 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25
Q p (g p l -1 h -1 ) 0.70 1.70 3.10 3.75 2.46 1.18

Q s (g s l -1 h -1 ) 1.52 3.65 6.80 8.55 6.00 2.79

Q x (g x l -1 h -1 ) 0.11 0.26 0.49 0.63 0.52 0.28

Tabla 5. Datos de productividad volumétrica fermentación en Continuo.

Valor máximo de 3.75 [g/lh] para una tasa de dilución

de 0.15 [1/h] Valor promedio = 2,14 [g/lh]
TABLA COMPARATIVA DE LOS PARÁMETROS
CINÉTICOS EN OPERACIÓN BATCH Y
CONTINUA

PROCESO EN PROCESO EN
BATCH CONTINUO

μmax [h-1] 0,018 Dmax [h-1] 0,028

Ks 1,522 Ks 5.505
Yxs [g/g] 0,016 Yxs [g/g] 0,0066
Yps [g/g] 0,411 Yps [g/g] 0,514
Qp[g/lh] 1,13 Qp[g/lh] 2,14

Tabla 8. Parámetros cinéticos calculados para operación batch y continúo

 MÉTODO NUMÉRICO Y HERRAMIENTA
COMPUTACIONAL

Para el cálculo de los parámetros cinéticos se utilizaron:

• Método diferencias divididas de newton,
para hacer las derivaciones numéricas
pertinentes.

• El programa IBM spss para hacer

regresiones no lineales.

• Excel para hacer regresiones lineales y

gráficas.
 BATCH O CONTINUO

 Se puede evidenciar en la tabla comparativa,

que los parámetros cinéticos del proceso
continuo son ligeramente superiores a los del
proceso batch.
 Bibliográficamente este tipo de fermentación
es recomendable hacerse en proceso batch.
 Hay que tener en cuenta que la
concentración inicial de azúcar fue diferente
para cada proceso, razón por la cual se cree
que en este caso el proceso continuo dio
mejores resultados comparado con el batch.
 BIBLIOGRAFIA
 Nigam, J. (2000). Continuous ethanol production from
pineapple cannery waste. Journal of Biotechnology, 72, 197–
202. Recuperado el 2016 de Febrero de 3, de
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S016816569
9001066
 Peña serna, C., Castro Gil, C., & Peláez Jaramillo, C. A. (2011).
Evaluation of ethanol production from two recombinant and A
commercial strains of saccharomyces cerevisiae (fungi:
ascomycota) in sugar-cane molasses and rejected-banana juice
from Urabá, Colombia. Actualidades Biológicas, 33, 183-192.
Recuperado el 1 de Febrero de 2016, de
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S
0304-35842011000200004&lng=en&tlng=pt.