 RUTINAS DEL

LABORATORIO
 Encender los equipos a utlizar:
baños maria, platos calientes,
destilador de agua.
 Limpiar el area a utilizar
 Buscar hielo
 Descongelar los reactivos en el
hielo.
 Identificar el procedimiento o
revisar el protocolo
 Identificar todos los reactivos y las
formas seguras de trabajar: batas,
guantes, gafas o mascaras de
proteccion.
 Preparar las soluciones necesarias
 Iniciar el proceso
La seguridad es crítica en el desarrollo de
ciencia sostenible de clase mundial

 Seguridad es sobre cuidar de las

personas
 Seguridad es atender la
integridad física y emocional de
las personas
 Seguridad es atender la salud de
las personas
 Seguridad es sobre inversión de
recursos para la prevención de
accidentes
 Seguridad es aprendizaje y modelaje de
comportamientos adecuados
 Seguridad es acerca de desarrollar y mantener
buenas condiciones de trabajo.
 Seguridad es trabajar con procedimientos
estandar para obtener resultados consistentes.
 Seguridad es cumplir con las leyes y las buenas
prácticas.
 Tiene que ver con trabajo en equipo, excelencia,
efectividad, productividad, etc.
 Identificar la áreas potenciales de accidentes,
evaluar los procesos para determinar los PPE.
 Seguridad en el laboratorio un elemento
importante

 Utilice siempre su bata y guantes cada vez que entre

al laboratori. Al salir, retírelos y disponga de ellos
correctamente.
 Cambiar guantes cada vez que sea necesario para
evitar contaminaciones
 No es saludable tocar muestras
biologicas con sus manos limpias
usted no sabe cual es el riesgo
potencial de estas muestras para
su salud o la de sus compañeros
sea considerado trabaje de forma
segura.

 El laboratorio es un area donde se

llevan a cabo experimentos que
pueden poner en peligro su salud
además guantes y batas existen
otros elementos y equipos que
debe ser considerados para su
protección el laboratorio
verifique siempre las
instrucciones para reconocer que
equipos requiere.
 No se come, ni se bebe, ni se fuma o se retoca
el maquillaje en el laboratorio.
 Conocer las salidas de emergencia y la
localización y utilización de los extintores,
lavaojos y equipos de emergencia.
 Mantener el área de trabajo limpia y ordenada. Todos los
equipos deberán ser instalados en lugares apropiados, con
buena iluminación, ventilación y los sistemas de seguridad
correspondientes.
 MSDS
 Verifique las etiquetas de los químicos y los sitios donde están
almacenados para conocer le nivel de riesgo de los químicos
que utiliza.
 Nombre del Quimico
 Nivel de peligrosidad
 Nivel de riesgo
 EPP
 Condiciones de almacenamiento
Cuáles son las medidas de
seguridad que se han
implementado en su
laboratorio si existe alguna
Manipulación de Líquidos
•Con personal experimentado y buenas prácticas de
laboratorio y un ambiente ideal ( temperatura constante
para el aire, puntas de pipeta y líquido; presión de aire. se
pueden evitar los errores de`pipeteo.
• Para una adecuada certeza, precisión y correcto despeño
las pipetas deben se verificadas y calibradas regularmente
o cuando sea necesario.
•Las grandes ventajas de las pipetas electronicas no son
solamente autocalibrables, pero tambien las más fáciles de
usar, alta reproducibilidad de pipeteo y un amplio campo
de aplicaciones son el resultado de sus funciones integrales
de dispensado.
•La alta calidad de los resultados obtenidos con las pipetas
electronicas es muy dificil de alcanzar con las pipetas
manuales.
 Precisión y exactitud
Volume Test
Increment Inaccuracy Imprecision
Range Volume
10ul 0.90% 0.50%
0.2-10ul 0.1ul 5ul 1.50% 0.80%
1ul 4.00% 4.00%
100ul 0.50% 0.20%
50ul 0.70% 0.30%
5-100ul 1ul
10ul 1.50% 1.50%
5ul 4.00% 2.50%
250ul 0.40% 0.15%
25-250ul 5ul 125ul 0.60% 0.20%
25ul 1.50% 1.00%
1200ul 0.50% 0.15%
600ul 1.00% 0.20%
50-1200ul 10ul
100ul 4.00% 0.80%
50ul 8.00% 1.50%
 Partes de la Pipeta
1

2
3

 Boton del Embolo: Desplaza el

aire y produce al retornar a su 4 5

posicion inicial un efecto de

succion.
 Expulsor de puntas de pipetas
 Ajuste de volumen
 Indicador digital
6
 Cuerpo de la pipeta
 Punta
Manipulacion de liquidos
 Existen diversas técnicas en los laboratorios
químicos que involucran soluciones, diluciones y
transferencia de líquidos de un envase a otro.
 En biología molecular estas transferencia la
mayoría de las veces involucra volúmenes muy
pequeños y alta precisión en las medidas.
 Tanto en la investigación como en la rutina de
trabajo del laboratorio se debe confiar en la forma
como se mide y se dispensan las muestras y
reactivos, Ej.: pipetear es indispensable para el
éxito del análisis.
 Tradicionalmente el pipetear se hacia casi
exclusivamente por la succión a través de pipetas
de vidrio.
 Procedimiento
 Seleccione un tejido bien preservado

 Destrucción química y mecánica de las células del tejido

 Desnaturalización de las Proteínas con la proteinasa K y

precipitación con la centrifugación.
EXPERIMENTACION

 Se identifica la muestra con un número único y se

preserva
 Se determina el tejido a emplear
 Se lleva a cabo el proceso inicial de preparación de
la muestra llamado
EXTRACCION
 The basic steps of DNA isolation are disruption of the cellular
structure to create a lysate, separation of the soluble DNA from cell
debris and other insoluble material and purification of the DNA of
interest from soluble proteins and other nucleic acids. Historically,
this was done using organic extraction (e.g., phenol:chloroform)
followed by ethanol precipitation. In the case of plasmid
preparations, the multiple day protocol typically involved cesium
chloride banding followed by dialysis of the plasmid DNA. These
methods were time consuming and used a variety of hazardous
reagents.
 Heads

Tails

Grease Soap Grease and Soap

 DNA Extraction Procedure - 2
 Obtain DNA from digestion
 Add ethanol
 Centrifuge
 Wash the pellet
 Resuspend
The building
blocks for DNA
or RNA are
nucleotides-
A T C G / UAGC
DNA REPLICATION
EASY TO USE
 Sequence Mutations
 Mutations can also occur within a gene or other small region of sequence.
 Some mutations can be harmless or have minor effects, while other mutations can have devastating
effects. As an example, take the sentence (which is made of three letter words, similar to codons):
 The fat cat saw the red dog If we insert the letter 'x' before the f, the sentence will no loner have the
same meaning. In fact, it will be unreadable:
 The xfa tca tsa wth ere ddo g A similar effect will happen if we delete the f:
 The atc ats awt her edd og or if we translocate the 'e' in 'The' with the 'f' in 'fat':
 Thf eat cat saw the red dog <BLOCKQUOTEAnother example of deletion...

 The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene contains 250,000 base pairs.
In the majority of cystic fibrosis patients, three base pairs are missing. This leads to the loss of a
single amino acid from the 1,480 residues in the protein...and this change ultimately kills a person.
DNA,
PROTEINS
HAVE
ELECTRICAL
CHARGE

7/1/2018 Nimiadina Herrera MMUL_Naos Marine Lab 36

 PCR
The Polymerase chain reaction (PCR) has rapidly become established as
one of the most widely used techniques of molecular biology,
because:
It is rapid
Inexpensive
Produce microgram amounts of DNA from minutes samples.
Based on natural DNA replication of simultaneuos primer extension of
complementary strands of DNA, 5’-3’ direction.

7/1/2018 Nimiadina Herrera MMUL_Naos Marine Lab 37

 PCR Requirements

 DNA - template
 dNTP’s: deoxynucleotides
 Polymerase
 Buffer solution for enzyme activity Mg2
 Primer sequences
 Thermocyclers

7/1/2018 Nimiadina Herrera MMUL_Naos Marine Lab 38

PCR...
 Detection and analysis of PCR
products

 The PCR product should be a fragment or

fragments of defined length.

7/1/2018 Nimiadina Herrera MMUL_Naos Marine Lab 40

 SECUENCING
 1. When a single stranded DNA template is placed together with the 4
deoxynucleotide triphosphates(dNTP's) and a short primer that hybridizes
to the beginning of the DNA template, DNA polymerase will direct the
synthesis of a complementary strand (complementary to the DNA strand
that is to be sequenced).
 2. If di deoxynucleotide triphosphates (di dNTP's) are included, DNA
strand elongation will terminate when a didNTP is incorporated. This is
because di deoxynucleotides lack a 3' hydroxyl group which is needed to
form a bond to an adjacent nucleotide.
7/1/2018 Nimiadina Herrera MMUL_Naos Marine Lab 43
Automated Sequencing
 Labeled DNA fragments
(PCR products) Principles of Sample Separation
Capillary or and Detection
Gel Lane
Sample Detection

CCD Panel
Size Ar+
Separation LASER
(488 nm)

Detection Color
region Separation

Fluorescence ABI Prism

spectrograph
 STR Polymorphisms
 Most of our DNA is identical to DNA of others.
 However, there are inherited regions of our DNA that can vary from person to
person.
 Variations in DNA sequence between individuals are termed
"polymorphisms".
 sequences with the highest degree of polymorphism are very useful for DNA
analysis in forensics cases and paternity testing.
 DNA polymorphisms known as "Short Tandem Repeats", or simply STRs.
 STRs are short sequences of DNA, normally of length 2-5 base pairs,
 repeated numerous times in a head-tail manner, i.e. "gata".
 D7S280
 D7S280 is one of the 13 core CODIS STR genetic loci.
This DNA is found on human chromosome 7. The DNA
sequence of a representative allele of this locus is shown
below. This sequence comes from GenBank, a public DNA
database. The tetrameric repeat sequence of D7S280 is
"gata". Different alleles of this locus have from 6 to 15
tandem repeats of the "gata" sequence. How many
tetrameric repeats are present in the DNA sequence shown
below? Notice that one of the tetrameric sequences is
"gaca", rather than "gata".
 1 aatttttgta ttttttttag agacggggtt tcaccatgtt ggtcaggctg
actatggagt
 61 tattttaagg ttaatatata taaagggtat gatagaacac ttgtcatagt
ttagaacgaa
 121 ctaacgatag atagatagat agatagatag atagatagat agatagatag
atagacagat
 181 tgatagtttt tttttatctc actaaatagt ctatagtaaa catttaatta
ccaatatttg
 241 gtgcaattct gtcaatgagg ataaatgtgg aatcgttata attcttaaga
atatatattc
 301 cctctgagtt tttgatacct cagattttaa ggcc
Applying the technology

 The shrimp production falled at the end of the

century because viral diseases
 Molecular techniques help farmer to prevent and
won the war against the virus.
 Science and aquaculture
Proper Sensitivity Effective Prevention

• Screening PLs before buying

• Screening broodstocks before production
• Screening live-feed before feeding
• Screening environmental carriers before stocking

More Sensitive

Less Risk

Better Crop
Domestication Project for SPF Brooder in Taiwan
 Control Systems of IQ2000 System
Basic criteria for a accurate PCR result: good extraction,
successful PCR reaction,
no contamination
Data of IQ2000 WSSV System
1: sample with severe WSSV infection
1 2 3 4 5 6 7 8 9 M 2: sample with medium WSSV infection
3: sample with light WSSV infection
4: sample with very light WSSV infection
5: WSSV negative sample
6: ddH2O
7: Standard 1, 1000 copies/reaction
8: Standard 2, 100 copies/reaction
Confirm that there is no 9: Standard 3, 10 copies/reaction
contamination during M:molecular weight marker
PCR procedure

• Monitor the quality of extraction Monitor the sensitivity of PCR reaction

• Confirm the PCR is working Farming IntelliGene Tech. Corp.
 Protein Divergence

 Seven shrimp specie were screening with aloenzymes and

mitochondrial COI
 The results determines that some of this species may be form
by the rise of the Istmus but some other not.
 Diadema antillarum

Diadema mexicanum
ECHINOMETRA
 ATLANTICO PACIFICO

Abudefduf concolor Abudefduf taurus

Anisotremus surinamensi Anisotremus interruptus

Anisotremus virginicus Anisotremus taeniatus

 La Divergencia en las Proteínas
 Siete especies de camarones, aloenzimas, secuencia de la
region de CO1 y su comportamiento
 El resultado del estudio fue complejo pero estableció que el
surgimiento del Istmo de Panamá representó para estas
especies cambios dramáticos en su ambiente y su
comportamiento lo que conllevó a la especiación de estos
grupos.
 Diadema antillarum

Diadema mexicanum
ECHINOMETRA
 ATLANTICO PACIFICO

Abudefduf concolor Abudefduf taurus

Anisotremus surinamensi Anisotremus interruptus

Anisotremus virginicus Anisotremus taeniatus

 Abudefduf

Anisotremus

Lutjanus
TERAPIA DE CÉLULAS MADRE
DÍA 4

Cavidad

Masa de células
internas
células
(células Madre
de
Masa de células Embrionarias)
cubierta
internas
interna

Células MADRE para transplantes de Organos

MASA DE CELULAS INTERNAS

Células
Células NERVIOSAS Formadoras de
SANGRE

CELULAS MADRE

BLASTOCISTO
Modificado de: Scientific American, 2001 Células PANCREATICAS Células CARDIACAS
To analyze the data that follows we need only consider the
genotypes of the parents and their offspring. The alleles are
inherited as describe by Mendel.
Diploid parents each pass on one of their two alleles to their
offspring according.
You will have 2 allelles per loci involve to compare and
answer our questions.
Quien es el hijo de esta pareja
 RATON

GATO
Aún hay mucho más que descubrir
Y ustedes pueden ser sus descubridores…
hay tan solo que observar, cuestionarse,
encontrar respuestas verdaderas y sugerir
soluciones…
Les agradezco su atención y participación
y los espero en STRI…