CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

NOMBRE: Carlos Villacís A.

ANTIOXIDANTES EN MEDIOS DE CULTIVO in vitro

 Oxidación
La oxidación es el proceso a través del cual un átomo o grupo
de átomos pierde electrones (se oxida) a otro (el cual se
reduce).

En tejidos cultivados in vitro, la oxidación por radicales libres

de varios componentes celulares, y de compuestos fenólicos
catalizado por la enzima polifenol oxidasa (PPO) produciendo
quinonas, generan daño e incluso muerte celular.

En las células vegetales, las especies reactivas de oxígeno

(ROS) se forman constantemente durante: incompleta
reducción del oxígeno, oxidación de agua en cloroplasto o
mitocondria, cadena de transferencia de electrones en
fotosíntesis y respiración, beta oxidación de ácidos grasos,
oxidación del glicolato, NADPH, oxalato y xantinas.
 Oxidación in vitro
La célula vegetal sometida a un estrés reacciona produciendo mayores
niveles de ROS, que generan una reacción en cascada cuando el
electrón libre se transfiere de una molécula a otra.

Las enzimas se encuentran compartimentalizadas, PPO en

cloroplastos y peroxidasas (POX) en peroxisomas o membranas
subcelulares, los sustratos se almacenan en las vacuolas. Ambos
entran en contacto cuando la célula sufre algún daño, estrés o se
encuentra senescente. Generalmente resulta en la muerte del explante.

Los procesos de oxidación in vitro son causados principalmente por el

efecto abrasivo del agente desinfectante aplicado, los cortes que sufre
el explante, composición del medio de cultivo, volumen y calidad del
frasco de cultivo.

SOLUCIÓN: Antioxidantes, compuestos que inhiben o demoran la

oxidación de un sustrato propenso, por descomposición de ROS o
prevención de su formación.
 Antioxidantes en medios de cultivo
• AC. Puede inactivar trazas metálicas. Antioxidante terminador
de cadenas radicalarias.
Ácido
cítrico

• AA. Hidrosoluble. Está disponible para una oxidación

energéticamente favorable. ROS se oxidan a partir del
Ácido ascorbato, y luego son reducidas a agua. Las formas oxidadas
de ascorbato son relativamente estables y no reactivas.
ascórbico

• CIS. Actúa como antioxidante terminador de cadenas

radicalarias, se forma un compuesto estable porque el átomo de
azufre retiene la carga y porque el radical puede inactivarse
formando puentes disulfuro. También es antioxidante preventivo,
agente quelante de cationes metálicos gracias a la coordinación
L-cisteína con los grupos mercapto y carboxílico.
 Efectos producidos por deficiencia
Oscurecimientos letales en los explantes y en el medio de cultivo, especialmente en especies
leñosas.

Luego de ser cortados, los explantes empiezan a perder el color verde e inician un
oscurecimiento, liberando frecuentemente exudados oscuros al medio, formados por una
mezcla compleja de sustancias fenólicas.

Los compuestos fenólicos son oxidados para formar quinonas que se polimerizan. Las
proteínas se oxidan, los fenoles se unen a las proteínas mediante puentes de hidrógeno.

El crecimiento del explante es inhibido, perdiendo gradualmente su capacidad de

proliferación.

Si no se remedia la situación, en pocas horas el explante se oscurece y muere.

Desencadenamiento de desórdenes fisiológicos, morfológicos, epigenéticos y genéticos,

como recalcitrancia, hiperhidricidad, variación somaclonal y habituación.