UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE

CENTRO DE SAÚDE E TECNOLOGIA RURAL

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA ANIMAL
DISCIPLINA: METABOLISMO DOS NUTRIENTES EM RUMINATES
DOCENTE: LEILSON ROCHA BEZERRA
DISCENTE: PAULO CESAR BATISTA DE FARIAS

Effect of inclusion of different levels of Leucaena silage

on rumen microbial population and microbial protein
synthesis in dairy steers fed on rice straw

Abril de 2018
Patos - PB
Efeito da inclusão de diferentes níveis de silagem de leucena
na população microbiana ruminal e na síntese de proteína
microbiana em novilhos alimentados com palha de arroz

Thien Truong Giang Nguyen¹, Metha Wanapat¹,*,

Kampanat Phesatcha¹, and Sungchhang Kang²

Abril de 2018
Patos - PB
 Roteiro

 Introdução;
 Objetivos;
 Metodologia;
 Resultados;
 Discussão;
 Conclusão;
 Referências.
 Introdução
 Os recursos alimentares para ruminantes são principalmente
subprodutos agrícolas;

 Baixa proteína bruta (PB), mas com altos níveis de

lignocelulósico;

 A proteína é o fator mais importante na manutenção do

ecossistema ruminal, estimulando a ingestão de matéria seca,
bem como a digestibilidade;

 Portanto, a suplementação da dieta com concentrado proteico

potencializará a população bacteriana ruminal;

 Forragens e leguminosas arbustivas, como Leucaena

leucocephala ( Leucaena ) ou Flemingia macrophylla;
 Introdução
Leucena

Características:

 Alta proteína;
 Palatabilidade;
 Vitamina e mineral; Fonte: Passos B., 2016. Fonte: Embrapa, 2002.

 Conteúdo de enxofre que sustenta o crescimento microbiano ;

 Alta digestibilidade de proteína e matéria seca (MS);
 Compostos secundários de plantas como o tanino condensado (TC).

 No entanto, ainda há dados limitados sobre o uso de silagem de

Leucaena (SL) como volumoso de alta qualidade para ruminantes.
 Objetivo

Objetivo deste estudo foi investigar o efeito da substituição da

palha de arroz (PA) por níveis de SL em populações microbianas
e na síntese de proteína microbiana em novilhos leiteiros.
 Matérias e Metodos

 Centro de Pesquisa e Desenvolvimento

de Recursos de Alimentação Tropical
(CPDRAT), Departamento de Zootecnia,
Faculdade de Agricultura, Universidade
Khon Kaen, Tailândia;
Fonte: Google Maps, 2018..

 Preparação de SL A leucena foi

colhida e cortada em 2 a 3 cm de
comprimento, depois ensilada com ureia
e melaço a 1,0% e 2,0% de MS;
Fonte: Embrapa, 2002.
 Sacos plásticos e prensados ​para remover o ar;
 A duração do tempo de ensilagem.
 Matérias e Metodos

Animais:
 Quatro novilhos fistulados no rúmen, com peso inicial de 167 ± 12
kg, foram distribuídos aleatoriamente para receber quatro dietas de
acordo com um delineamento quadrado latino 4 × 4;

Fonte: Patrícia K., 2014.

Fonte: Change, 2018.

 Matérias e Metodos

Dietas

 Os tratamentos foram os seguintes:

 T1 = PA não tratado (Controle);

 T2 = 70% PA + 30% SL;
 T3 = 40% PA + 60% SL;
 T4 = 100% SL.

 Os animais foram alimentados duas vezes por dia de manhã

(07:00) e tarde (16:00);
 Matérias e Metodos
Dietas

 O experimento foi realizado por quatro períodos. Cada período

durou 21 dias;

 Durante os primeiros 14 dias foi medido o consumo de ração;

 Enquanto nos últimos 7 dias os novilhos foram movidos para

as caixas de metabolismo para coleta total de fezes e urina;

 ZAcomposição do concentrado, PA e SL são apresentados na

tabela a seguir.
 Matérias e Metodos
Tabela 1 - Ingredientes da ração e composições químicas estimadas
de tratamentos dietéticos usados ​no experimento.

Fonte: Tabela adaptada de Nguyen et al. (2016).

 Matérias e Metodos
Procedimentos de amostragem de alimentos

 A ração oferecida e as recusas foram registradas diariamente

durante todo o período experimental;

 Amostras de ração foram coletadas aleatoriamente duas vezes por

semana para análise de MS usando estufa de ar quente a 100 °C
por 24 horas;

 Amostras de ração e fezes foram coletadas diariamente durante os

últimos 7 dias de cada período pelo método de coleta total;

 As fezes foram amostradas em torno de 50 g/kg de peso fresco

total e divididas em duas partes;
 Matérias e Metodos
Procedimentos de amostragem de alimentos

 Os alimentos, as recusas alimentares e as amostras fecais foram

secas a 60 °C por 48 horas e moídas (em tela de 1 mm usando o
métodos padrão de AOAC (1995), para MS, cinzas e PB;

 A fibra de detergente ácido foi determinada de acordo com um

método AOAC (1995), e foi expressa por inclusão de cinzas
residuais;

 A fibra em detergente neutro foi estimada segundo Goering e Van

Soest (1970), e o resultado foi expresso com cinzas residuais;

 O TC na amostra de SL foi analisado usando o método Vanillin-

HCL, (1971).
 Matérias e Metodos

Procedimentos do fluido ruminal

o Amostras de líquido ruminal foram coletadas às 0, 2, 4, 6 horas

após a alimentação;

o Aproximadamente 200 mL de fluido ruminal foram retirados da

parte média do rúmen a cada vez no final de cada período;

o As amostras de fluido ruminal foram filtradas através de quatro

camadas de gazes;
 Matérias e Metodos
Procedimentos do fluido ruminal
 A primeira porção de 1 mL de
líquido ruminal foi coletada e
mantida em frasco plástico ao
qual foram adicionados 9 mL de
solução de formalina 10 mL/L
(1:9 v/v, líquido ruminal: 10 mL/L
formalina) e armazenados a 4 °C
para determinar a população de
bactérias, protozoários e fungos
usando a contagem total de
direções de acordo com Galyean Fonte: Technology, 2018.
(1989), por hemocitômetro.
 Matérias e Metodos

Procedimentos do fluido ruminal

 A segunda parte foi quantificada os microrganismos ruminais

(celulolítica, proteolítica, amilolítica e contagem de bactérias
viáveis ​totais) usando a contagem viável de bactérias, com base
no uso de uma técnica de tubo de rolo.
 Matérias e Metodos
Procedimentos de amostragem de urina
 A urina total foi coletada nos mesmos dias das fezes com o uso de
recipiente plástico fixado com ácido sulfúrico (10%) para proteger a
perda de nitrogênio (N);

 As amostras urinárias foram coletadas em cerca de 100 mL/L do

volume total de urina, mantidas em geladeira;

 A alantoína na urina foi

determinada por Cromatografia
Líquida de Alta Pressão de
acordo com Chen et al. (1993).

Fonte: Slide Player, 2018.

 Matérias e Metodos
Procedimentos de amostragem de urina

 A quantidade de absorção de derivados purinas (DP) microbiana

(X mmol / d) correspondente à excreção de DP (Y mmol/d) foi
calculada baseando-se na relação derivada de Chen e Gomes
(1992): Y = 0.85X + (0.385W 0.75 );

 O suprimento de N microbiano (NM) foi estimado pela excreção

urinária de DP segundo Chen e Gomes (1992), : NM (g/d) = 70X
/ (0,116 × 0,83 × 1000) = 0,727 X; onde X é a absorção de DP em
mmol / d.
 Matérias e Metodos
Procedimentos de amostragem de urina

 A eficiência da síntese de N microbiana (ESNM) para denotar o

NM fornecido ao animal, por unidade de matéria orgânica
digestível aparentemente fermentada no rúmen (MODR) foi
calculada usando a seguinte fórmula:

ESNM = NM (g/d) / MODR (assumindo a digestão ruminal foi

de 650 g / kg de matéria orgânica (MO) de digestão no trato
total, MODR = CMOD × 0,65 e CMOD = consumo de matéria
orgânica digestível.
 Matérias e Metodos
Análise estatística

 Todos os dados obtidos no experimento foram submetidos à

análise de variância para um delineamento quadrado latino 4 × 4
utilizando os procedimentos de modelos lineares gerais (MLG)
do Statistical Analysis System Institute;

 Os dados foram analisados utilizando o modelo:

Y IJK = μ M + I + A J + P K + ɛ IJK

 As médias dos tratamentos foram comparadas pelo novo teste de

múltiplas frequências de Duncan (TMFD). Diferenças entre
médias com p <0,05 foram aceitas como diferenças
estatisticamente significantes.
 Resultados

Efeito da dieta em bactérias, protozoários e fungos

anaeróbios

Tabela 2 - Efeito dos níveis de silagem de leucena na contagem

direta total de bactérias, protozoários e fungos anaeróbios em
novilhos leiteiros.
a, b, c, d Significa na mesma linha com diferentes sobrescritos diferentes (* p <0,05).

Fonte: Tabela adaptada de Nguyen et al. (2016) .

 Discussão
Efeito da dieta em bactérias, protozoários e fungos
anaeróbios

 A população de protozoários diminuiu com o aumento dos níveis

de alimentação de SL na dieta. Hung et al. (2013);

 O menor número de protozoários poderia ser devido à presença

do TC contida na SL. Makkar et al. (1995);

 Os valores médios de bactérias e zoósporos foram aumentados

com níveis crescentes de SL, mas não no nível mais alto de
captação de TC com 100% de SL;

 Isto pode ser devido à interação entre protozoários e zoósporos

fúngicos. Newbold e Hillman (1990);
 Discussão

 Além disso, 60% SL podem fornecer uma fonte adequada de N

para o crescimento microbiano, levando ao aumento da população
bacteriana.

Efeito da dieta em bactérias amilolíticas, bactérias

proteolíticas e bactérias celulolíticas

Tabela 3 - Efeitos dos níveis de silagem de leucena em bactérias

viáveis ​utilizando a técnica de tubo rolante em novilhos leiteiros.
 ns, não difere significativamente; EPM, erro padrão da média.
a, b, c, d Significa na mesma linha com diferentes sobrescritos diferentes (* p <0,05).

Fonte: Tabela adaptada de Nguyen et al. (2017) .

 Discussão

Efeito da dieta em bactérias amilolíticas, bactérias

proteolíticas e bactérias celulolíticas

 A população bacteriana celulolítica e proteolítica foi

significativamente diferente entre os tratamentos e foi a mais
alta na alimentação com 60% de SL;

 Isto poderia ser explicado por uma diminuição da população de

protozoários, levando a um aumento da população bacteriana.
Makkar et al. (1995).

 Além disso, o aumento da população bacteriana poderia ser um

resultado do aumento da ingestão de proteína da alimentação
SL;
 Discussão
Efeito da dieta em bactérias amilolíticas, bactérias
proteolíticas e bactérias celulolíticas

 Além disso, o SL contém um alto nível de enxofre, que é um

fator que sustenta o crescimento microbiano;

 Tagari et al. (1965), mostraram que o crescimento de bactérias

celulolíticas e proteolíticas foi inibido por taninos de alfarroba
em um rúmen artificial.
 Resultados
Efeito do balanço de nitrogênio na dieta e eficiência da
síntese de proteína microbiana

Tabela 4 - Efeito dos níveis de silagem de leucena na utilização de

nitrogênio e derivados urinários de purinas em novilhos leiteiros.
a, b, c, d Significa na mesma linha com diferentes sobrescritos diferentes (* p <0,05), (** p <0,01).

Fonte: Tabela adaptada de Nguyen et al. (2016) .

 Discussão
Balanço de nitrogênio e eficiência de síntese de
proteína microbiana

 O aumento do balanço de N pela alimentação de SL no presente

estudo foi concordante com os achados de Hung et al. (2013), e
Longo et al. (2008), que relataram que a alimentação
de Leucaena aumenta o balanço de N de búfalos e ovinos;

 É claro que Leucaena com alto teor de proteína pode ser uma
fonte de mais N para novilhos leiteiros;

 No entanto, o N fecal aumentou pela ingestão de SL e o mais alto

foi em novilhos alimentados com 100% de SL;

 Devido à alta captação de PB e TC;

 Discussão
Balanço de nitrogênio e eficiência de síntese de
proteína microbiana

 Tem sido relatado que a excreção de N através da urina foi

aumentada devido à dieta PB e à ingestão de N;

 E a alta taxa de proteína degradável no rúmen na proteína da dieta

também aumentou a N da urina;

 Quando a degradação protéica é mais rápida do que a síntese, a

amônia se acumula no líquido ruminal e é absorvida no sangue,
levada ao fígado e convertida em ureia e excretada pela urina N.
 Discussão
Balanço de nitrogênio e eficiência de síntese de
proteína microbiana

• A excreção de DP na urina é considerada um indicador para

estimar a produtividade de proteína microbiana no rúmen.

• A síntese de proteína microbiana ruminal desempenha um papel

importante em ruminantes;

• No entanto, a síntese e a eficiência das proteínas microbianas

dependem de muitos fatores: como o consumo de MS, taxa de
degradabilidade ruminal de fontes de nitrogênio e carboidratos,
taxa de diluição ruminal, fatores minerais e outros.
 Discussão
Balanço de nitrogênio e eficiência de síntese de
proteína microbiana
 Este estudo mostrou que a síntese de proteína microbiana foi a
mais alta em 60% SL e seguida por 30% SL, 100% SL e PA.

 Isso poderia ser explicado que a ração PA tinha baixo teor de

proteína (2,4% PB), o que afeta negativamente o crescimento
microbiano.

 O teor de proteína bruta na dieta requerido para um crescimento

microbiano ótimo é maior que 11% de PB.

 Além disso, a TC nas dietas SL pode ajudar na sincronização da

liberação de vários nutrientes;
 Discussão
Balanço de nitrogênio e eficiência de síntese de
proteína microbiana

 No entanto, a síntese de proteína microbiana em 100% SL não

foi melhorada em comparação com 60% SL e 30% SL;

 Isso provavelmente devido ao teor de proteína de sobrecarga na

dieta causou um desequilíbrio na ração proteína-energia e os
efeitos da maior dieta TC que provavelmente inibe algumas
bactérias do rúmen.
 CONCLUSÃO

 Com base neste estudo, pode-se concluir que 60% SL foi o

melhor nível para a substituição da alimentação basal por PA;

 Essa substituição melhorou as populações de bactérias totais,

especialmente bactérias proteolíticas e bactérias celulolíticas,
enquanto a fertilização e a síntese de proteína microbiana
também foram aumentadas;

 No entanto, um estudo mais aprofundado deve ser conduzido

usando SL em vacas leiteiras em lactação e / ou gado de corte de
engorda para elucidar o efeito no leite, produção de carne e
qualidade.
 Classificação da Revista

Fonte: Capes, 2016.

 REFERÊNCIAS
 AOAC (Associação de Químicos Analíticos Oficiais) Animal
Feed: Associação de Químicos Analíticos Oficiais. 16 edn. VA:
AOAC Internacional; 1995. Métodos oficiais de análise.

 Burns RE. Método para estimativa de tanino em sorgo

granífero. Agron J. 1971; 63 : 511-2.

 Chen XB, Gomes MJ. International Feed Resources

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Rowett; 1995. Estimativa do suprimento de proteína microbiana
para ovinos e bovinos com base na excreção urinária de
derivados de purina - uma visão geral dos detalhes
técnicos. Publicação ocasional de 1992.
 REFERÊNCIAS

 Chen XB, DJ de Kyle, Orskov ERJ Chromatogr. Medição de

alantoína na urina e plasma por cromatografia líquida de alta
performance com derivatização pré-coluna. 1993 11 de agosto;
617 (2): 241-7.

 Goering HK, Van Soest PJ. Análise de fibra de forragem

(aparelho, reagente, procedimentos e alguma aplicação) ARS,
Washington DC: USDA; 1970. (Manual Agrícola No. 379).

 Hung LV, Wanapat M, Cherdthong A. Efeitos do pellet de folhas

de leucena na diversidade bacteriana e síntese de proteína
microbiana em búfalos-de-pântano alimentados com palha de
arroz. Livest Sci. 2013; 151 : 188-97.
 REFERÊNCIAS

 Longo C, Nozella EF, Cabral Filho SLS, Lavorenti N. Vitti

DMSS, Abdalla AL. Consumo voluntário, digestibilidade
aparente e balanço de nitrogênio em ovinos suplementados com
Leucaena leucocephala . Livest Res Rur Dev. 2008; 20 Artigo #
184.

 Makkar HP, Blümmel M, Becker K. In vitro efeitos e interações

entre taninos e saponinas e destino de taninos no rúmen. J Sci
Food Agric. 1995; 69 : 481-93.

 ML galyeano. Procedimento laboratorial em pesquisa em nutrição

animal. Las Cruces, NM: New Mexico State University; 1989. pp.
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 REFERÊNCIAS

 Newbold CJ, Hillman K. O efeito de protozoários ciliados no

turnover de proteínas bacterianas e fúngicas no rúmen de
ovinos. Lett Appl Microbiol. 1990; 11 : 100–2.

 SAS (Instituto de Análise Estatística) Institute Inc. Guia para

computadores pessoais. 6 ed. Cary, NC: SAS Institute Inc; 1998.

 Tagari H, Henis Y, Tamir M., Volcani R. Efeito do extrato de

vagem de alfarroba na celulólise, proteólise, desaminação e
biossíntese de proteínas em um rúmen artificial. Appl Environ
Microbiol. 1965; 13 : 437-42.